口腔上皮細(xì)胞原血紅素檢測(cè)

口腔上皮細(xì)胞原血紅素a/b/c檢測(cè)（苯胺藍(lán)染色液）1口腔上皮細(xì)胞原血紅素a/b/c檢測(cè)1口腔癌是頭頸部較常見的惡性腫瘤之一，包括口腔癌按其發(fā)生部位可分為齦癌、唇癌、頰癌、舌癌、口底癌、腭癌、上頜竇等。國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道口腔癌的發(fā)病率為1.06~1.69/10萬人口。口腔癌占全身惡性腫瘤的1.9~3.5%，占頭頸部惡性腫瘤的4.7~20.3%。相比其他部位的癌癥，口腔癌更易轉(zhuǎn)移、治療花費(fèi)大、預(yù)后差，目前健康，甚至生命。因此，口腔癌的預(yù)防就顯得十分重要。從早期發(fā)現(xiàn)入手，口腔癌是可以預(yù)防的。22既往口腔癌的篩查方法主要依賴腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原（ＣＥＡ）檢查，但特異性很差。ＣＴ檢查和細(xì)胞學(xué)檢查不適于篩查或早期診斷。研發(fā)敏感性高、特異性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)便捷的口腔癌篩查方法非常迫切。3既往口腔癌的篩查方法主要依賴腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原（ＣＥＡ）苯胺藍(lán)染色液（口腔細(xì)胞特殊染色TNO?SSF-2型）是一種分析口腔上皮組織細(xì)胞病理變化的檢測(cè)試劑，屬液體活檢病理學(xué)檢測(cè)技術(shù)，應(yīng)用于口腔癌篩查及協(xié)助早期診斷。該產(chǎn)品為無創(chuàng)取材、靶向、快速、自動(dòng)化分析和/或床旁（POCT）診斷，5~10分鐘即可顯示檢測(cè)結(jié)果。具有新穎性、創(chuàng)新性、實(shí)用性，高靈敏度、高特異度，準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟(jì)、操作方便。獨(dú)家研制、專利產(chǎn)品，是口腔癌篩查、普查和協(xié)助早期診斷的適宜技術(shù)。4苯胺藍(lán)染色液（口腔細(xì)胞特殊染色TNO?SSF-2【操作方法】1、全面的檢查需要良好的照明，壓舌板，手套和紗布?jí)|。口鏡或咽喉鏡有助于口腔檢查。依次檢查牙、牙齦、口腔黏膜、舌、唾液腺導(dǎo)管口及軟硬腭。應(yīng)注意其形態(tài)、顏色、質(zhì)地的變化，包括有無腫脹、增生、萎縮、點(diǎn)彩消失等；上皮覆蓋是否完整，有無皰疹、丘疹、糜爛、潰瘍、過度角化、瘢痕、腫塊及色素沉著；是否有出血；擠壓腮腺或下頜下腺時(shí)導(dǎo)管口處有無涎液流出及涎液的情況。若發(fā)現(xiàn)異常，用采樣拭子在局部擦拭，取得口腔黏膜滲液和分泌液。一般取液量為0.5~1ml，以棉拭子頭部全部濕潤(rùn)為度。2、取得口腔黏膜滲液和分泌液后，打開樣本管（紅塞），把拭子頭部置入樣本液內(nèi)充分?jǐn)噭?dòng)，使蘸在上面的液體及樣本保存液混勻制得樣本液。5【操作方法】5【注意事項(xiàng)】1、正確取材是準(zhǔn)確檢測(cè)的前提和保證，全面、認(rèn)真檢查口腔各個(gè)部位，發(fā)現(xiàn)細(xì)微的異常，以使苯胺藍(lán)染色液體活檢病理學(xué)檢測(cè)技術(shù)成功實(shí)施。2、苯胺藍(lán)染色液體活檢病理學(xué)檢測(cè)技術(shù)是一項(xiàng)靶向檢測(cè)技術(shù)，取材部位及檢測(cè)結(jié)果具有組織器官的一致性。3、本檢測(cè)為篩查方法，檢驗(yàn)結(jié)果僅為提示性資料，為評(píng)估口腔惡性腫瘤患病風(fēng)險(xiǎn)提供參考，請(qǐng)結(jié)合臨床進(jìn)一步檢查作出疾病判斷。4、口腔內(nèi)出血性疾病容易造成假陽性，應(yīng)結(jié)合病史、體征及其它檢查進(jìn)行鑒別診斷。6【注意事項(xiàng)】6技術(shù)原理7技術(shù)原理7腫瘤細(xì)胞Warburgeffect8腫瘤細(xì)胞8

高耗糖（10倍以上）糖酵解活躍三羧酸循環(huán)抑制PasteureffectWarburgeffect氧化磷酸化及糖酵解相互調(diào)節(jié)，動(dòng)態(tài)平衡正常人體細(xì)胞腫瘤細(xì)胞9Pasteur氧化磷酸化及糖酵解相互調(diào)節(jié)，動(dòng)態(tài)平衡腫瘤正常細(xì)胞在氧充足的情況下，利用線粒體的氧化磷酸化產(chǎn)生為細(xì)胞的生命活動(dòng)提供90%ATP。在氧不足的情況下，細(xì)胞能量轉(zhuǎn)變?yōu)樘墙徒猓o氧糖酵解和磷酸戊糖途徑）的方式。有氧狀態(tài)下氧化磷酸化對(duì)糖酵解有抑制作用，稱為Pasteur效應(yīng)。10正常細(xì)胞在氧充足的情況下，10諾貝爾獎(jiǎng)獲得者德國生物化學(xué)家奧托.海因里希.瓦博格（OttoHeinnichWarburg）發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的耗糖速度是正常細(xì)胞的10倍，卻僅產(chǎn)生1/10的能量。腫瘤細(xì)胞主要通過磷酸戊糖途徑產(chǎn)能，即便在有氧情況下，氧化磷酸化反應(yīng)也不能對(duì)糖酵解產(chǎn)生抑制作用。這稱為瓦博格氏效應(yīng)（Warburgeffect）。11諾貝爾獎(jiǎng)獲得者德國生物化學(xué)家11FDG-PET/CT的設(shè)計(jì)原理——腫瘤細(xì)胞糖代謝異常Warburgeffect12FDG-PET/CT12惡性腫瘤細(xì)胞由于代謝旺盛，導(dǎo)致對(duì)葡萄糖的需求增加，因此靜脈注射葡萄糖類似物——18FDG后，大多數(shù)腫瘤病灶會(huì)表現(xiàn)為對(duì)18FDG的高攝取，因此可應(yīng)用18FDGPET-CT顯像可早期發(fā)現(xiàn)全身腫瘤原發(fā)及轉(zhuǎn)移病灶，準(zhǔn)確判斷其良、惡性，從而正確指導(dǎo)臨床治療決策。13惡性腫瘤細(xì)胞由于代謝旺盛，導(dǎo)致對(duì)葡萄糖的需13PET-CT運(yùn)營(yíng)成本相當(dāng)高，進(jìn)口價(jià)格兩千多萬人民幣，再加上人員、維護(hù)費(fèi)等費(fèi)用，成本在3000萬元左右。但很多醫(yī)院一年即收回成本。PET-CT全身檢查一次,輻射量相當(dāng)于一個(gè)正常人30年的輻射，一小時(shí)就接受。相當(dāng)于在日本福島核電站泄漏的第二天站了一天。2011年底，衛(wèi)生部在一份文件中提出要規(guī)范使用PET-CT，要求其檢查陽性率不低于70％。這一表態(tài)意味著PET-CT今后必須對(duì)癥使用。14PET-CT運(yùn)營(yíng)成本相當(dāng)高，進(jìn)口價(jià)格兩千多萬人民幣，再為解決PET-CT運(yùn)營(yíng)成本高、對(duì)人體有較重的輻射危害問題，我們根據(jù)同一原理，即腫瘤細(xì)胞糖代謝增高（瓦博格氏效應(yīng)）設(shè)計(jì)出一種簡(jiǎn)便易行、安全無創(chuàng)的惡性腫瘤篩查和早期診斷的方法，稱為PrettyPositronEmissionTomographyofTube。15為解決PET-CT運(yùn)營(yíng)成本高、對(duì)人體有較重的輻射15P-PET精巧的試管PET《苯胺藍(lán)染色液》PrettyPositronEmissionTomographyinTube

16P-PET16磷酸戊糖途徑17磷酸戊糖途徑17腫瘤細(xì)胞瓦博格氏效應(yīng)（Warburgeffect）：糖代謝異常1、耗糖速度是正常細(xì)胞的10倍，卻僅產(chǎn)生1/10的能量。2、磷酸戊糖途徑活躍。18腫瘤細(xì)胞瓦博格氏效應(yīng)（Warburgeffect）：惡性腫瘤細(xì)胞糖酵解代謝活躍的機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚未完全明確。主要包括以下幾個(gè)方面的因素:1、原癌基因的激活（低氧誘導(dǎo)因子hypoxia-inducedfactorHIF的激活導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞糖酵解增加；絲蘇氨酸蛋白激酶PI3K—AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活刺激糖酵解）；2、腫瘤抑制基因的失活（p53調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝）；3、低氧微環(huán)境；4、糖酵解調(diào)節(jié)機(jī)制異常。5、線粒體氧化磷酸化功能的損害等。19惡性腫瘤細(xì)胞糖酵解代謝活躍的機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚腫瘤細(xì)胞糖代謝關(guān)鍵蛋白及酶學(xué)變化1、腫瘤細(xì)胞攝取葡萄糖能力是正常細(xì)胞的10倍左右，腫瘤細(xì)胞膜表面存在大量葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體（GLUT）。大量惡性腫瘤GLUT3，GLUT4過量表達(dá)，GLUT1在正常組織中表達(dá)，在惡性腫瘤組織中表達(dá)增高。

20腫瘤細(xì)胞糖代謝關(guān)鍵蛋白及酶學(xué)變化1、腫瘤細(xì)胞攝取葡萄糖2、在腫瘤細(xì)胞中，氧化磷酸化的酶合成受到抑制，如細(xì)胞色素C，丙酮酸脫氫酶系復(fù)合體、琥珀酸脫氫酶，延胡索酸水和酶等；

212、在腫瘤細(xì)胞中，氧化磷酸化的酶合成受到抑制，如細(xì)胞色3、糖酵解酶合成增多，例如己糖激酶（HK），6-磷酸葡萄糖脫氫酶，磷酸果糖激酶、乳酸脫氫酶和磷酸甘油醛脫氫酶等。223、糖酵解酶合成增多，例如己糖激酶（HK），6-磷酸葡萄糖磷酸戊糖途徑葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白己糖激酶6-磷酸葡萄糖脫氫酶丙酮酸脫氫酶系23磷酸戊糖途徑葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白己糖激酶6-磷酸葡萄糖脫氫酶丙酮酸中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院吳緬教授和美國賓夕法尼亞大學(xué)醫(yī)學(xué)院楊小魯教授的合作研究結(jié)果認(rèn)為，這種腫瘤細(xì)胞代謝異常及抑癌基因p53突變有關(guān)。在正常狀態(tài)下，阻抑蛋白p53及磷酸戊糖途徑上第一步反應(yīng)的關(guān)鍵酶“葡萄糖-6-磷酸脫氫酶”相結(jié)合，抑制它的活性，阻止磷酸戊糖旁路的進(jìn)行，確保正常狀態(tài)的細(xì)胞中主要通過三羧酸循環(huán)途徑進(jìn)行能量代謝。24中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院吳緬教授和美國賓夕法24阻抑蛋白p53+葡萄糖-6-磷酸脫氫酶p53葡萄糖-6-磷酸脫氫酶葡萄糖丙酮酸乙酰輔酶A三羧酸循環(huán)ATP二氧化碳水葡萄糖戊糖磷酸代謝途徑NADPH果糖-6-磷酸二氧化碳Warburg效應(yīng)Pasteur效應(yīng)3-磷酸甘油醛抑制己糖激酶己糖激酶丙酮酸脫氫酶系復(fù)合體HIFPI3K—PI3K—KTGLUT25阻抑蛋白p53+葡萄糖-6-磷酸脫氫酶p53葡萄糖-6-磷酸26262727Ferton氏反應(yīng)Fe2++H2O2→Fe3++OH-+·OH28Ferton氏反應(yīng)Fe2++H2O2→Fe3芬頓（Ferton）氏反應(yīng)，是H2O2及線粒體內(nèi)的功能性二價(jià)鐵離子反應(yīng)產(chǎn)生活性氧（ROS，reactiveoxygenspecies）的反應(yīng)。1mol的H2O2及1mol的Fe2+反應(yīng)后生成1mol的Fe3+，同時(shí)伴隨生成1mol的OH-外加1mol的羥自由基。在pH4的溶液中，羥自由基的氧化電勢(shì)高達(dá)2.73V。另外，還生成1mol的過氧自由基。

29芬頓（Ferton）氏反應(yīng)，是H2O2及線粒體內(nèi)的功能羥自由基的氧化態(tài)勢(shì)僅次于鹵族元素氟。但是，羥自由基半衰期短（不到1μs），作用直徑很短（3nm）。因而最鄰近羥自由基的部位受到攻擊的可到性最大。線粒體內(nèi)膜裸露于內(nèi)膜上氧化呼吸鏈產(chǎn)生的大量自由基的環(huán)境中，所受氧化損傷最嚴(yán)重。30羥自由基的氧化態(tài)勢(shì)僅次于鹵族元素氟。但是，羥自由基半衰線粒體內(nèi)膜氧化損傷

促使細(xì)胞原血紅素釋放31線粒體內(nèi)膜氧化損傷

促使細(xì)胞原血紅素釋放原血紅素在動(dòng)物體內(nèi)主要存在鐵卟啉（血紅素）和銅卟啉（血藍(lán)素），在植物體內(nèi)主要存在鈷卟啉（維生素B12）和鎂卟啉（葉綠素），它們都是細(xì)胞載氧進(jìn)行呼吸作用和植物細(xì)胞進(jìn)行光和作用過程中的關(guān)鍵物質(zhì)。32原血紅素32卟啉類血紅素（鐵卟啉）三價(jià)鐵離子二價(jià)鐵離子高鐵血紅素亞鐵血紅素原卟啉IX原血紅素（亞鐵原卟啉）原卟啉15個(gè)異構(gòu)體原血紅素a/b/c/等氯化高鐵血紅素羥基高鐵血紅素等卟吩血紅素家族二亞硝基亞鐵血紅素碳氧亞鐵血紅素等胚期原血紅素胎兒期原血紅素成人型原血紅素33卟啉類血紅素三價(jià)鐵離子二價(jià)鐵離子高鐵血紅素亞鐵血紅素原卟啉I血紅素a卟啉環(huán)的第八位上以甲?；婕谆诙簧弦粤u代法呢烯基代替乙烯基。血紅素b（甲酰血紅素）卟啉環(huán)上的側(cè)鏈取代基為4個(gè)甲基蛋白質(zhì)分子半胱氨酸血紅素c卟啉環(huán)上的乙烯基及蛋白質(zhì)分子中的半胱氨酸巰基相加成的硫醚鍵共價(jià)結(jié)合細(xì)胞色素A細(xì)胞色素B、細(xì)胞色素P450、血紅蛋白和肌紅蛋白等細(xì)胞色素C的活性基血紅素a/b/c共同或分別存在于鐵硫蛋白及輔酶Q、ATP合酶、過氧化氫酶、過氧化物酶、單胺氧化酶、血紅素加氧酶、NAD（P）H氧化酶、鳥氨酸氧化酶、一氧化氮合成酶、腺苷酸激酶、蘋果酸還原酶等120余種酶類中。34血紅素a血紅素b（甲酰血紅素）蛋白質(zhì)分子半胱線粒體（mitochondria）在生物的生長(zhǎng)、發(fā)育、代謝、衰老、疾病、死亡以及生物進(jìn)化等方面都有非常重要的意義。線粒體消耗著人體95%以上的氧，并以ATP的形式生產(chǎn)人體幾乎所有的能量，素有“細(xì)胞動(dòng)力工廠”之稱。整個(gè)人體里約有1億億個(gè)。線粒體是重要細(xì)胞器；原血紅素是線粒體功能關(guān)鍵物質(zhì)；原血紅素a/b/c在線粒體中存在最多,也是原血紅素a/b/c最集中的細(xì)胞器。35線粒體（mitochondria）35線粒體是原血紅素最集中的細(xì)胞器。原血紅素a/b/c在細(xì)胞線粒體內(nèi)，以細(xì)胞色素和以原血紅素為活性基的酶兩種形式參及氧化磷酸化反應(yīng)電子傳遞。原血紅素及珠蛋白結(jié)合在一起發(fā)揮作用，稱為血紅素蛋白。使用新型X射線激光衍射測(cè)定血紅素蛋白結(jié)構(gòu)表明，原血紅素就位居線粒體基膜處血紅素蛋白多肽構(gòu)成的疏水桶（血紅素口袋）內(nèi)。36線粒體是原血紅素最集中的細(xì)胞器。原血紅素a/b/c在原血紅素位于血紅素蛋白β折疊形成的疏水核（血紅素口袋）內(nèi)，它主要依靠Fe2+及F8His的咪唑氮配位而掛在Pr鏈上。在α鏈中，有一個(gè)丙酸基及CD3His相連；在β鏈中，原血紅素的兩個(gè)丙酸基別CD3Ser和E10Lys相連。37原血紅素位于血紅素蛋白37線粒體的的強(qiáng)氧化損傷，使血紅素蛋白中珠蛋白及原血紅素之間的亞基之間作用力減弱，離子鍵、氫鍵、疏水鍵斷裂，使多肽鏈的β折疊伸展、斷裂。血紅素口袋被打開，使那些原來包藏在蛋白疏水核部的原血紅素釋放謂之腫瘤細(xì)胞原血紅素（ProtohemeofTumorCellsTCPH）。38線粒體的的強(qiáng)氧化損傷，使血紅38再者，超氧自由基是一種親脂性小分子，可以進(jìn)入疏水核內(nèi)，它所帶的負(fù)電荷中和了肽鏈上His、Lys所帶的正電荷，使它們不再及原血紅素丙酸基側(cè)鏈保持靜電吸引，從而使原血紅素脫落。39再者，超氧自由基是一種39腫瘤細(xì)胞崩解肽鏈及血紅素之間結(jié)合力消失血紅素口袋被打開糖酵解瓦伯格氏效應(yīng)腫瘤抑制基因失活原癌基因的激活羥自由基氧化損傷超氧自由基負(fù)電荷作用程序性鐵死亡芬頓氏反應(yīng)低氧微環(huán)境糖酵解調(diào)節(jié)機(jī)制異常線粒體氧化磷酸化功能損害原血紅素釋放40腫瘤細(xì)胞崩解肽鏈及血紅素之間結(jié)合力消失血紅素口袋被打開糖瓦腫利用熒光染料DCFH-DA（2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽）進(jìn)行活性氧檢測(cè)。DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測(cè)DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。此實(shí)驗(yàn)證明腫瘤細(xì)胞活性氧明顯增高。41利用熒光染料DCFH-DA（2',7'-二氯熒光中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞動(dòng)衛(wèi)生及職業(yè)病研究所戴宇飛教授等用正丁醇抽取原血紅素輔基，再進(jìn)行Sephadex-100柱層析，柱的規(guī)格57X1.8cm，用0.9%Nacl溶液洗脫，280紫外檢測(cè)鐵離子，對(duì)活性氧損傷血紅素結(jié)合蛋白導(dǎo)致原血紅素的釋放，提供了試驗(yàn)依據(jù)。42中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞動(dòng)衛(wèi)生及職業(yè)病研究所42原血紅素a/b/c供氧體氧化物供氫體苯胺藍(lán)還原型氧化型【O】【O】染色還原型脫氫H2O43原血紅素供氧體氧化物供氫體苯胺藍(lán)還原型氧化型【O】染色還原型腫瘤組織呈現(xiàn)組織高壓狀態(tài)。一是腫瘤組織中缺乏功能性淋巴系統(tǒng)。二是腫瘤血管具有高滲的特性。血液濃縮，間質(zhì)內(nèi)液體增多，血細(xì)胞外滲粘性阻力增大，最終出現(xiàn)腫瘤間質(zhì)高壓。腫瘤間質(zhì)高壓促進(jìn)腫瘤炎癥性滲出。44腫瘤組織呈現(xiàn)組織高壓狀態(tài)。一是腫瘤組織中缺乏44腫瘤性炎癥最具特征性的變化是以血管反應(yīng)為中心的腫瘤性滲出病變，腫瘤組織血管內(nèi)的液體和腫瘤細(xì)胞成分通過血管壁進(jìn)入組織間質(zhì)、體腔、粘膜表面和體表的過程稱為腫瘤性滲出。所滲出的液體和細(xì)胞總稱為腫瘤性滲出液，其內(nèi)含有較高的蛋白質(zhì)和較多的細(xì)胞成分以及他們的崩解產(chǎn)物。

45腫瘤性炎癥最具特征性的變化是以血管反應(yīng)45“種子和土壤”，強(qiáng)調(diào)癌細(xì)胞和微環(huán)境之間的關(guān)系，認(rèn)為腫瘤轉(zhuǎn)移的形成，是處于旺盛生長(zhǎng)狀態(tài)的腫瘤細(xì)胞作為“種子”，當(dāng)遇到合適的器官、組織的基質(zhì)環(huán)境，即“土壤”時(shí)，就會(huì)發(fā)生腫瘤的轉(zhuǎn)移。“解剖—機(jī)械”，認(rèn)為CTC的轉(zhuǎn)移為隨機(jī)現(xiàn)象，CTC在最先到達(dá)臟器的毛細(xì)血管或淋巴結(jié)發(fā)生機(jī)械性滯留。分泌液、滲出液、漏出液和黏液總稱為“組織滲液”組織細(xì)胞及微環(huán)境組織液——細(xì)胞及微循環(huán)之間的通路；幾乎含有血液、淋巴液所有的非細(xì)胞內(nèi)容物；細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，檢測(cè)細(xì)胞變化的第一生物學(xué)介質(zhì)；滲出至體外（粘膜、皮膚表面）稱為組織滲液。46“種子和土壤”，強(qiáng)調(diào)癌細(xì)胞和微環(huán)境之間的關(guān)系，認(rèn)為腫瘤轉(zhuǎn)移的基因突變Warburg效應(yīng)Ferton氏反應(yīng)血紅素蛋白的血紅素口袋供氫體腫瘤性組織滲液羥自由基苯胺藍(lán)原血紅素a/b/c釋放強(qiáng)氧化損傷腫瘤間質(zhì)高壓腫瘤性炎癥腫瘤細(xì)胞原血紅素a/b/c供氧體酶樣作用染色47基因突變WarburgFerton氏血紅素蛋白的供腫瘤性羥自分類原理方法技術(shù)屬性創(chuàng)傷性操作費(fèi)用用途瓦伯格影像學(xué)有創(chuàng)復(fù)雜昂貴診斷效應(yīng)代謝成像瓦伯格病理學(xué)無創(chuàng)便捷經(jīng)濟(jì)篩查效應(yīng)代謝染色48分類原理方法技術(shù)屬性創(chuàng)傷性產(chǎn)品結(jié)構(gòu)設(shè)備：全自動(dòng)分析儀POCT試劑盒試劑：試劑A試劑B樣本保存液全自動(dòng)分析儀專用清洗液

49產(chǎn)品結(jié)構(gòu)49全自動(dòng)分析儀5050【操作方法】1、全面的檢查需要良好的照明，壓舌板，手套和紗布?jí)|?？阽R或咽喉鏡有助于口腔檢查。依次檢查牙、牙齦、口腔黏膜、舌、唾液腺導(dǎo)管口及軟硬腭。應(yīng)注意其形態(tài)、顏色、質(zhì)地的變化，包括有無腫脹、增生、萎縮、點(diǎn)彩消失等；上皮覆蓋是否完整，有無皰疹、丘疹、糜爛、潰瘍、過度角化、瘢痕、腫塊及色素沉著；是否有出血；擠壓腮腺或下頜下腺時(shí)導(dǎo)管口處有無涎液流出及涎液的情況。若發(fā)現(xiàn)異常，用采樣拭子在局部擦拭，取得口腔黏膜滲液和分泌液。一般取液量為0.5~1ml，以棉拭子頭部全部濕潤(rùn)為度。2、取得口腔黏膜滲液和分泌液后，打開樣本管（紅塞），把拭子頭部置入樣本液內(nèi)充分?jǐn)噭?dòng)，使蘸在上面的液體及樣本保存液混勻制得樣本液。51【操作方法】514、檢測(cè)方法（1）自動(dòng)化腫瘤細(xì)胞原血紅素分析儀檢測(cè)：把編號(hào)后的樣本管置至分析儀樣本位，啟動(dòng)設(shè)備。按設(shè)定程序自動(dòng)將染色液A100μL、樣本液200μL、染色液B100μL依次加入至反應(yīng)杯中，在540秒的時(shí)間節(jié)點(diǎn)測(cè)定腫瘤細(xì)胞原血紅素的吸光度，通過分析設(shè)備自動(dòng)評(píng)估口腔癌風(fēng)險(xiǎn)。（2）POCT分析法：向樣本管內(nèi)依次加入試劑A（黃塞）、試劑B（綠塞）各0.5ml，蓋好樣本管塞，顛倒樣本管2~3次，使樣本液及試劑混勻。靜置。在5分鐘時(shí)間節(jié)點(diǎn)觀察反應(yīng)液顯色情況，并及比色板比對(duì)。524、檢測(cè)方法52【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】不變色：陰性，尚未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞發(fā)生異型性變化；淡藍(lán)色：可疑陽性，細(xì)胞可能發(fā)生異型性變化；藍(lán)色：陽性，細(xì)胞發(fā)生異型性變化；深藍(lán)色：強(qiáng)陽性，細(xì)胞發(fā)生異型性變化。若反應(yīng)液緩慢出現(xiàn)粉色或黃色，表明樣本內(nèi)混有較多粘液，仍存有顯示藍(lán)色的可能性，應(yīng)再延長(zhǎng)觀察時(shí)間3~5分鐘。若反應(yīng)液即刻顯深藍(lán)色后轉(zhuǎn)為深黃色或棕紅色，表明標(biāo)本內(nèi)內(nèi)混有血液，亦應(yīng)視為強(qiáng)陽性53【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】53【注意事項(xiàng)】1、正確取材是準(zhǔn)確檢測(cè)的前提和保證，全面、認(rèn)真檢查口腔各個(gè)部位，發(fā)現(xiàn)細(xì)微的異常，以使苯胺藍(lán)染色液體活檢病理學(xué)檢測(cè)技術(shù)成功實(shí)施。2、苯胺藍(lán)染色液體活檢病理學(xué)檢測(cè)技術(shù)是一項(xiàng)靶向檢測(cè)技術(shù)，取材部位及檢測(cè)結(jié)果具有組織器官的一致性。3、本檢測(cè)為篩查方法，檢驗(yàn)結(jié)果僅為提示性資料，為評(píng)估口腔惡