五味子炮制前后總木脂素的含量變化

五味子炮制前后總木脂素的含量變化【摘要】目的：分析五味子炮制前后總木脂素的含量變化。方法：采取超聲提取法，以總木脂素含量為指標，對超聲功率、超聲時間、乙醇體積分數(shù)3個因素進行單因素分析并結合響應面優(yōu)化得到最佳提取工藝，通過紫外分光光度法測定五味子及醋五味子總木脂素含量。結果：最佳提取工藝為乙醇體積分數(shù)64%，超聲時間46min，超聲功率400W，在此條件下五味子及醋五味子總木脂素含量分別為34.14mg/g、53.67mg/g。結論：五味子經醋制后總木脂素含量升高?！娟P鍵詞】五味子；醋五味子；響應面法；含量變化

ChangesofTotalLignansinSchisandraChinensisbeforeandafterProcessing[Abstract]Objective:ToanalyzethecontentchangesoftotallignansinSchisandrachinensisbeforeandafterprocessing.Methods:Theultrasonicextractionmethodwasadopted,andthetotallignancontentwasusedastheindex.Thesinglefactoranalysistestwascarriedoutonthethreefactorsofultrasonicpower,ultrasonictimeandethanolvolumefraction,andtheoptimalextractionprocesswasobtainedbyresponsesurfaceoptimization.ThetotallignancontentofSchisandrachinensisandvinegarSchisandrachinensiswasdeterminedbyultravioletspectrophotometry.Results:Theoptimumextractionprocesswasasfollows:ethanolvolumefraction64%,ultrasonictime46min,ultrasonicpower400W.Undertheseconditions,thetotallignancontentofSchisandrachinensisandvinegarSchisandrachinensiswas34.14mg/gand53.67mg/g,respectively.Conclusion:Thecontentoftotallignansincreasedaftervinegarprocessing.[Keywords]SchisandraVinegarSchisandraResponsesurfacemethodContentchanges

目錄1前言 [13]等考察超聲提取法、超臨界CO2流體萃取法和大孔吸附樹脂法三種方法對提取五味子木脂素的效果，其中前兩者提取率相差不大，皆高于大孔吸附樹脂法，使用超臨界CO2流體萃取法試驗成本高，故選定超聲提取法。它利用超聲波使得細胞破裂擴大溶劑與藥材接觸面積，增強提取效果，且所需溫度低有效避免提取成分的化學結構被高溫破壞，操作簡便易行，廣泛應用于制藥行業(yè)。本課題從超聲時間、超聲功率、乙醇體積分數(shù)考察提取條件的最優(yōu)水平。進行實驗前對超聲清洗器進行檢查，發(fā)現(xiàn)即便對超聲波清洗器設置固定溫度，在使用過程中隨時間增加溫度仍升高，超聲40min后溫度出現(xiàn)5℃是儀器運作時間長導致升溫，因不具固定性難以控制條件故不對超聲溫度展開試驗。試驗中為保證重復性良好需控制超聲初始溫度條件一致，措施具體為固定超聲水位線，設置超聲初始溫度偏低以免破壞木脂素成分結構。對于制備供試品溶液過程中是否需要操作補足失重步驟進行實驗，一組超聲冷卻后補足失重，一組不進行補足失重操作。超聲冷卻后稱重時可知溶液重量減少0.1g，即乙醇揮發(fā)，測定吸光度后發(fā)現(xiàn)兩者相比吸光度相差0.02左右，故補足失重是必要的。為保證實驗準確度避免不必要的人為誤差，超聲提取時固定同一儀器、同一水位、同一溫度、加蓋超聲。4.3響應面交互作用分析響應面法廣泛運用在中藥提取及炮制等工藝中，通過擬合二次多項回歸方程解決多變量問題，便于科學安排實驗，減少人力物力，提高實驗效率，精度高于正交設計及均勻設計，且對比正交設計具可直觀得出各因素對因變量影響的優(yōu)點。除了對Design-Expert13軟件所作出結果的方差分析外，亦可從預測值與實際值分布圖及殘差的正態(tài)分布圖中判斷所擬合模型的適應性，若兩個圖中數(shù)據(jù)大致分布在直線上則說明存在良好的適應性。響應面得出的響應面圖及等高線圖，響應面交互作用模型能很好地描述和擬合實際數(shù)據(jù)，可以在實際應用中幫助分析人員進行有效的決策。響應面圖的陡峭程度直觀反映各因素對五味子總木脂素含量的影響，交互作用是否顯著可由曲面的傾斜程度判斷，亦可從響應曲面的開口朝向判斷是否存在最大最小值及顏色判斷總木脂素含量的多少。等高線圖則考察超聲時間、超聲功率、乙醇體積分數(shù)兩兩間的交互作用對五味子總木脂素含量的影響，橢圓形則交互作用對響應值影響顯著，不顯著時則說明需改進。在根據(jù)得出的最優(yōu)提取條件進行驗證試驗，卻得不到與預測結果相接近的結果時，說明實驗選擇的因素與水平不恰當，需重新選擇。在進行響應面優(yōu)化的17組實驗中，第一次方差分析中三因素及交互項僅少數(shù)呈現(xiàn)顯著性，檢查發(fā)現(xiàn)5個重復組數(shù)據(jù)RSD大于3%且?guī)捉M數(shù)據(jù)大于因素最優(yōu)水平組，是人為操作失誤所致。根據(jù)Design-Expert13軟件的數(shù)據(jù)分析對數(shù)據(jù)不良的幾組試驗重新進行操作測定，重復試驗直至得出可靠的模型。響應面試驗講究試驗組順序隨機化，為方便將存在同條件的試驗組一起超聲提取是不可取的，所得實驗結果不可靠。4.4含量測定方法的選擇常用高效液相色譜法測定木脂素類單體成分含量，紫外分光光度法測定總木脂素含量。五味子木脂素含共軛雙鍵，在紫外區(qū)特征吸收，又具靈敏性高、精密度好、操作簡便易行及分析成本低等優(yōu)點，本課題選用紫外分光光度法進行五味子總木脂素含量測定。根據(jù)比爾定律吸光度與濃度成正比，在不同吸光度范圍內測量會引起不同的誤差，使用該方法時應控制供試液的吸光度讀數(shù)在0.2-0.8之間，此范圍內相對誤差較小，可滿足定量分析要求。實驗中波長掃描得到的波峰是249nm，與參考文獻相同，在215nm附近出現(xiàn)吸光度大于1的溶劑吸收峰。在測定過程中，前兩次的波長掃描并未出現(xiàn)波峰，是因溶液濃度較高需再進行稀釋，稀釋后出現(xiàn)明顯的波峰。在考察線性關系時，相同濃度的對照品溶液出現(xiàn)吸光度相差數(shù)值極大的情況，分析原因可能是在制備溶液時有一些五味子甲素對照品不溶于乙醇，經微長時間的超聲操作且定容后未充分搖勻。4.5實驗注意事項課題考察重復性的實驗結果RSD為2.53%，操作多次重復性試驗后RSD數(shù)值均較高，分析原因，需注意以下幾點：1）藥材粉末細度不一，粉末需均勻攪拌。2）超聲提取條件如水位、溫度不一致，本次實驗使用的超聲清洗器超聲溫度上升，故需控制超聲初始溫度條件一致，固定超聲水位線避免誤差。3）制備供試品溶液時進行補足失重及定容操作需一致。4）測定吸光度存在儀器系統(tǒng)誤差、儀器自檢時波長校正失敗及吸光度測定值相對標準偏差大等問題。紫外分光光度計應定期校準，波長校正失敗可通過檢查信號線和電源電壓、清洗絲桿、執(zhí)行系統(tǒng)應用主菜單的波長校正及重新自檢等方法解決。吸光度測定值相對標準偏差大可通過分析制備供試品溶液步驟是否操作一致、檢查是否進行空白對照及石英比色皿是否徹底潤洗干凈等措施克服，在考察乙醇體積分數(shù)的單因素試驗中，注意使用相應配制供試品溶液的溶劑作為空白對照，以更加準確地測量樣品。加樣回收率反映操作人員的技術水平及該實驗方案的可靠性及準確性。試驗中以1:1的比例加入對照品，出現(xiàn)多次加樣回收率不在95%-105%范圍內的情況導致平均回收率不達標，甚至出現(xiàn)計算超過105%的數(shù)據(jù)。查閱報道文獻原因可能是系統(tǒng)誤差如加入標準物質后引起檢測系統(tǒng)存在正干擾，或人為誤差如稱取對照品時讀數(shù)加標量過多導致待測物濃度不在精密度相當?shù)姆秶鷥?、樣品提取及測定過程中未嚴格進行一致的操作步驟等。進行加樣回收試驗時需注意以上幾點。

5結論五味子作為我國藥理作用廣泛的上品中藥，隨現(xiàn)代科學發(fā)展五味子的藥用價值相繼被發(fā)掘，在制藥市場極具發(fā)展?jié)摿?。本實驗對五味子炮制前后總木脂素含量變化展開分析，首先確定檢測波長為249nm，考察線性關系得到方程為y=31.955x-0.0037，R2為0.9999，并考察方法的可行性，平均回收率為97.76%，RSD為1.40%，可見此實驗方法的可行性。通過單因素分析可知五味子總木脂素含量最高的條件為超聲時間40min、超聲功率400W、乙醇體積分數(shù)60%；開展響應面優(yōu)化試驗獲得最佳提取工藝并對因素相互作用進行分析，修正后條件為乙醇體積分數(shù)64%，超聲時間46min，超聲功率為400W。該工藝下五味子及醋五味子總木脂素平均含量分別為34.14mg/g、53.67mg/g，醋制后含量升高57%。本實驗響應面所得模型及提取工藝參數(shù)可靠，可應用提取五味子總木脂素；本實驗對五味子炮制前后總木脂素含量測定，可為生產中的五味子炮制品質量評價及探討炮制機制的研究提供參考。

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