聚丙烯凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量

崗位演練聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量1任務(wù)九電泳法檢定細(xì)胞色素C崗位演練查閱資料，預(yù)判各標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)和待測(cè)蛋白質(zhì)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置查閱設(shè)計(jì)《聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量操作記錄》，在任務(wù)實(shí)施過(guò)程中同步填寫(xiě)按實(shí)訓(xùn)操作步驟，以SDS法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量設(shè)計(jì)實(shí)操設(shè)計(jì)（一）任務(wù)描述2（二）實(shí)訓(xùn)材料1.材料、試劑標(biāo)準(zhǔn)蛋白混合液、30%凝膠儲(chǔ)備液、10%十二烷基硫酸鈉（SDS）、分離膠緩沖液（1.5mol/L）、濃縮膠緩沖液（0.5mol/L）、電泳緩沖液（pH8.3）、10%過(guò)硫酸銨（新鮮配制）、1%四甲基乙二胺（TEMED）、上樣緩沖液、0.25%考馬斯亮藍(lán)R-250染色液、脫色液、未知分子量的蛋白質(zhì)樣品（1mg/mL，建議牛血清白蛋白）。2.儀器設(shè)備電泳裝置：電源、垂直電泳槽、長(zhǎng)滴管及微量加樣器、燒杯、量筒、培養(yǎng)皿、注射器等。3（三）實(shí)訓(xùn)操作42凝膠的聚合按需要配制分離膠和濃縮膠灌注分離膠，并靜置聚合灌注濃縮膠，插入樣品模子（梳子），靜置聚合后，拔出模子1裝板將硅膠框放在平玻璃上，然后將凹型玻璃與平玻璃重疊，立起來(lái)使底端接觸桌面，夾緊放入電泳槽內(nèi)，然后插入斜插板到適中程度4加樣將玻璃膠室凹面朝里置入電泳槽，添加緩沖液依次在各加樣孔內(nèi)加樣3蛋白質(zhì)樣品的處理將15～20mg的標(biāo)準(zhǔn)蛋白樣品溶液中，加入15～20mL的樣品處理液。在100℃水浴中處理2min，冷卻至室溫后備用。吸取未知分子量的蛋白質(zhì)樣品20mL，處理方法同上染色、脫色關(guān)掉電源，取出膠片，使用考馬斯亮藍(lán)染液，染色2～4h，必要時(shí)可過(guò)夜。棄去染色液，用蒸餾水漂洗膠面。加入脫色液，適時(shí)更換脫色液，直至蛋白質(zhì)帶清晰為止。5電泳打開(kāi)開(kāi)關(guān)，按照實(shí)驗(yàn)進(jìn)展調(diào)節(jié)電流如室溫高，打開(kāi)電泳槽循環(huán)水，降低電泳溫度（四）任務(wù)分析測(cè)量距離計(jì)算樣品的相對(duì)遷移率繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定樣品的分子量脫色后凝膠板的長(zhǎng)度每個(gè)蛋白質(zhì)樣品移動(dòng)距離（蛋白質(zhì)帶中心到加樣孔的距離）指示染料遷移的距離相對(duì)遷移率=樣品遷移距離（cm）/染料遷移距離（cm）各標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對(duì)遷移率為橫坐標(biāo)，蛋白質(zhì)分子量的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上作圖，得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)待測(cè)蛋白質(zhì)樣品的相對(duì)遷移率，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得該蛋白質(zhì)的分子量（五）任務(wù)分析與總結(jié)通過(guò)實(shí)訓(xùn)訓(xùn)練，總結(jié)一下電泳設(shè)備有哪些組成部分，以及各部分在電泳中發(fā)揮什么功能。思考電泳操作時(shí)，選擇電泳方法的依據(jù)，試著描述一下瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳各自特點(diǎn)及適宜的應(yīng)用場(chǎng)景。請(qǐng)分析瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，DNA條帶模糊的原因，并分別針對(duì)性提出對(duì)策。選擇題。電泳操作中的過(guò)硫酸銨是（）A、控制分子篩孔徑B、催化聚合C、加快電泳

D、混合均勻