生物藥物分析概論

生物藥品分析與檢驗金葉458708244@藥物：能夠預(yù)防、治療、診斷人的疾病的物質(zhì)。藥品的定義是“用于預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能并規(guī)定有適應(yīng)癥或者功能主治、用法和用量的物質(zhì)，包括中藥材、中藥飲片、中成藥?；瘜W(xué)原料藥及其制劑、抗生素、生化藥品、放射性藥品、血清、疫苗、血液制品和診斷藥品等?！薄吨腥A人民共和國藥品管理法》（自2001年12月1日起施行）十章第一百零二條藥物分類:藥品分類:生物藥物化學(xué)藥物中藥、天然藥物生物制品化學(xué)藥品1、生物藥物是運用生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)等的研究成果，從生物體、生物組織、細(xì)胞、體液等綜合利用物理學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、生物技術(shù)和藥學(xué)等學(xué)科的原理和方法制造的一類用于預(yù)防、治療、診斷人類疾病的制品。生物藥物的概述廣義的生物藥物包括：①從動植物和微生物中直接制取的各種天然生理活性物質(zhì)。②人工合成或半合成的天然類似物2、生物藥物分類①按其來源和生產(chǎn)方法大致分為三類a)生化藥物b)生物技術(shù)藥物c)生物制品②按生物藥物的化學(xué)本質(zhì)和化學(xué)特性來分類（1）氨基酸及其衍生物藥物（2）有機(jī)酸，醇酮類（4）酶及其調(diào)節(jié)劑（3）維生素a)消化酶類b)消炎酶類c)心腦血管疾病治療酶類d)抗腫瘤類e)氧化還原酶類(5)脂類藥物（6）多肽和蛋白質(zhì)類（7）核酸類及其降解物和衍生物（8）糖類（9）生物技術(shù)藥物類（10）生物制品類生物制品：是以微生物、細(xì)胞、動物或人源組織和體液等為原料，應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類疾病的預(yù)防、治療、診斷，包括疫苗、抗血清、血液制品等。生物技術(shù)藥物：采用DNA重組技術(shù)或其他新生物技術(shù)生產(chǎn)的治療和預(yù)防藥物。重組DNA藥物（基因藥物）重組蛋白質(zhì)藥物（基因工程藥物）③按生物藥物的用途分類（1）治療藥物（2）預(yù)防藥物（3）診斷藥物（4）用作其他生物醫(yī)藥用品二、生物藥物的性質(zhì)（1）在化學(xué)構(gòu)成上，生物藥物十分接近于人體內(nèi)的正常生理性質(zhì)，進(jìn)入人體后也更容易為機(jī)體所吸收利用和參與人體的正常代謝與調(diào)節(jié)。（2）在藥理上，生物藥物具有更高的生化機(jī)制合理性和特異診療有效性。（3）在醫(yī)療上，生物藥物具有藥理活性高，針對性強(qiáng)，毒性低，副作用小，療效可靠及營養(yǎng)價值高等特點。（5）生物藥物常常是一些生物大分子，它們不僅相對分子質(zhì)量大，組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且具有嚴(yán)格的空間構(gòu)象，以維持其特定的生理功能。（6）生物藥物對熱，酸，堿，重金屬及PH變化都比較敏感，各種理化因素的變化易對生物活性產(chǎn)生影響。（4）生物藥物的有效成分在生物材料中濃度很低，雜質(zhì)的含量相對比較高。（4）效價測定（5）生化法確證結(jié)構(gòu)三、生物藥物的分析特點：（1）相對分子量的測定（2）生物活性的檢查（3）安全性的檢查藥物分析與生物藥物分析的關(guān)系①生物藥物分析是藥物分析的一個分支。藥物分析研究小分子之間的反應(yīng)較多。特點：A比較快的反應(yīng)B比較簡單的體系C化學(xué)鍵的斷裂，組合或重排②研究對象不同

D在反應(yīng)體系中做布朗運動無序碰撞而反應(yīng)生物藥物分析研究大分子與大分子或著大分子與小分子之間反應(yīng)。③生物藥物與化學(xué)藥物的區(qū)別

a)在結(jié)構(gòu)上大分子藥物、化學(xué)結(jié)構(gòu)不明確、分子量不是定值。b)在檢查項目上熱源檢查過敏實驗異常毒性實驗c)在分析方法上化學(xué)藥物測定方法：重量法，滴定法，比色法，HPLC生物藥物測定法：HPLC，電泳法，酶法，免疫法，生物檢定法藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與藥典

一、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是國家對藥品質(zhì)量、規(guī)格及檢驗方法所作的技術(shù)規(guī)定，是藥品生產(chǎn)、供應(yīng)、使用、檢驗和藥政管理部門共同遵循的法定依據(jù)。1.組織生產(chǎn)提高質(zhì)量的手段；

2.科學(xué)管理和技術(shù)監(jiān)督的組成部分；

3.聯(lián)系科研、生產(chǎn)、供應(yīng)、使用和檢驗的技術(shù)紐帶。

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系中國藥典企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)國家標(biāo)準(zhǔn)使用非成熟(非法定)方法標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格高于法定標(biāo)準(zhǔn)藥品標(biāo)準(zhǔn)臨床研究用標(biāo)準(zhǔn)(臨床研究)暫行標(biāo)準(zhǔn)(試生產(chǎn))試行標(biāo)準(zhǔn)(正式生產(chǎn)初期)地方標(biāo)準(zhǔn)整理提高后的品種部頒標(biāo)準(zhǔn)（療效確切、廣泛應(yīng)用、質(zhì)量可控）我國制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指導(dǎo)思想：中藥標(biāo)準(zhǔn)立足于特色，西藥標(biāo)準(zhǔn)立足于趕超,生物制品基本保持一致。

我國現(xiàn)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.中華人民共和國藥典，簡稱中國藥典2.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)，簡稱部頒標(biāo)準(zhǔn)

《藥品管理法》中第三十二條規(guī)定“藥品必須符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)”。明確取消了地方藥品標(biāo)準(zhǔn)。從2001年12月1日起至2002年11月30日，國家藥品監(jiān)督管理局對《藥品管理法》修訂前按照當(dāng)時實行的地方藥品標(biāo)準(zhǔn)批準(zhǔn)生產(chǎn)的藥品品種，逐個進(jìn)行審查，經(jīng)審查，對符合《中華人民共和國藥品管理法》有關(guān)規(guī)定的，納入國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，可以繼續(xù)生產(chǎn)；對不符合規(guī)定的，立即停止該品種的生產(chǎn)并撤銷其批準(zhǔn)文號。

二、中國藥典（一）中國藥典的沿革建國以來，先后出版了10版藥典，1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005、2010和2015年版藥典，現(xiàn)行使用的是中國藥典（2015年版）。其英文名稱是ChinesePharmacopiea，縮寫為ChP（2015）。藥典是一個國家關(guān)于藥品標(biāo)準(zhǔn)的法典，是國家管理藥品生產(chǎn)與質(zhì)量的依據(jù)。具有與其他法令一樣的約束力。凡屬藥典收載的藥品，其質(zhì)量不符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的均不得出廠、不得銷售、不得使用。藥典在一定程度上反映一個國家的醫(yī)藥水平。中國藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所涉及的分析方法根據(jù)生產(chǎn)工藝、檢驗條件和水平及綜合國力等多因素來選擇、建立。

方法學(xué)上要求具有普遍適用性。

（二）中國藥典的基本結(jié)構(gòu)和內(nèi)容

藥典的內(nèi)容一般分為凡例、正文、附錄和索引四部分。

1.凡例（GeneralNotices）是制定和執(zhí)行藥典必須了解和遵循的法則，解釋和說明《中國藥典》概念,正確進(jìn)行質(zhì)量檢驗提供指導(dǎo)原則。將正文、附錄及質(zhì)量檢定有關(guān)的共性問題以及采用的計量單位、符號與專門術(shù)語等加以規(guī)定,避免全書中重復(fù)說明。其內(nèi)容同樣具有法定約束力。

凡例1.名稱及編排中文藥名:《中國藥品通用名稱》英文藥名:國際非專利藥品(INN)命名原則有機(jī)藥物化學(xué)名:《有機(jī)化學(xué)命名原則》凡例2.檢驗方法和限度按規(guī)定檢驗方法進(jìn)行檢驗。標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的各種限度數(shù)值的規(guī)定,最后一位為有效數(shù)字,計算時可多保留一位。凡例3.標(biāo)準(zhǔn)品對照品(1)標(biāo)準(zhǔn)品指用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量或效價測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),按效價單位（或μg）計,以國際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行標(biāo)定。

(2)對照品

指在用于檢測時,除另有規(guī)定外,均按干燥品（或無水物）進(jìn)行計算后使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

用于藥物含量測定、純度檢查和鑒別試驗。.

4.稱取樣品的要求試驗中的供試品與試液等“稱重”或“量取”的量均以阿拉伯?dāng)?shù)碼表示,其精確度可根據(jù)數(shù)據(jù)值的有效數(shù)位來確定。(1)“稱取”或“量取”的精密度凡例

稱取“0.1g”,系指稱取重量可為0.06-0.14g稱取“2g”,系指稱取重量可為1.5-2.5g稱取“2.0g”,系指稱取重量可為1.95-2.05g稱取“2.00g”,指稱取重量可為1.995-2.005g凡例規(guī)定“精密稱定”時,系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。規(guī)定“稱定”時,系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的百分之一。規(guī)定精密量取時,系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精密度要求.

凡例規(guī)定“量取”時,系指可用量筒或按照量取體積的有效數(shù)位選用量具.取用量為“約”若干時,系指取用量不得超過規(guī)定量的±10％.凡例

5.溫度

溫度以攝氏度（℃）表示：水浴溫度98～100℃

熱水70～80℃

微溫或溫水40～50℃

室溫10～30℃

冷水2～10℃

冰浴0℃

放冷系指放冷至室溫凡例2.正文（Monographys）是藥典的主要內(nèi)容，為所收載藥品或制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，主要內(nèi)容：名稱、性狀、物理常數(shù)、鑒別、檢查和含量測定等。

3.附錄（Appendix）附錄部分記載了制劑通則、檢查及測定方法、一般鑒別試驗、有關(guān)物理常數(shù)測定法、試劑配制法以及色譜法、光譜法等內(nèi)容。

4.索引（Index）中文索引（漢語拼音索引）和英文名稱索引。三、國外藥典

進(jìn)出口藥品檢驗、仿制國外藥品檢驗、趕超國際水平時，可供參考的國外藥典有：1．美國藥典與美國國家處方集美國藥典TheUnitedStatesPharmacopoeia，縮寫USP，目前為37版，即USP（38）

美國國家處方集TheNationalFormulary，縮寫NF，目前為33版，即NF（33）

二者合并為一冊，縮寫為USP（38）－NF（33）

2．英國藥典

BritishPharmacopoeia，縮寫B(tài)P，目前為2012

年版，即BP（2012）

3．日本藥局方縮寫JP，目前為16版，即JP（16）4．歐洲藥典EuropeanPharmacopoeia，縮寫Ph.Eup，目前為第六版。歐洲藥典對其成員國，與本國藥典具有同樣約束力，并且互為補(bǔ)充。

生物藥物質(zhì)量控制與管理（一）藥品質(zhì)量管理規(guī)范重要性一個有科學(xué)依據(jù)、切合實際的藥品質(zhì)量的控制涉及藥物的研制、生產(chǎn)、供應(yīng)、臨床以及檢驗等諸多環(huán)節(jié),需要多方面、多學(xué)科的密切配合,我國陸續(xù)公布了以下具有指導(dǎo)性作用的法令文件.（二）藥品質(zhì)量管理規(guī)范內(nèi)容《藥品臨床試驗管理規(guī)范》

GCP《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》

GMP《藥品經(jīng)營質(zhì)量管理規(guī)范》

GSP《藥品非臨床研究管理規(guī)范》GLP《藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》

GLP(GoodLaboratoryPractice)科研單位研制安全有效藥物必須按照GLP規(guī)定開展工作.嚴(yán)格控制藥物研制的質(zhì)量,確保實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠.《藥品臨床試驗管理規(guī)范》

GCP（GoodClinicalPractice）1在新藥研究中保護(hù)受試者和病人的安全和權(quán)利.2

新藥臨床研究人員保證藥品臨床試驗資料的科學(xué)性、可靠性、重視性.

《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》

GMP

(GoodManufacturePractice)

生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)出全面符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的藥物,必須按GMP規(guī)定組織生產(chǎn)、嚴(yán)格把關(guān).《藥品經(jīng)營質(zhì)量管理規(guī)范》GSP（GoodSupplyPractice）藥品供應(yīng)部門為了保證藥品運輸、貯存、銷售過程中藥品的質(zhì)量和效力，必須按照GSP進(jìn)行.GLPGCPGMPGSP

四個管理規(guī)范執(zhí)行,加強(qiáng)了藥品的全面質(zhì)量管理,有利于加速我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,提高藥品的國際競爭力.性狀鑒別檢查含量測定檢驗報告生物藥物分析與檢驗基本程序取樣

取樣—科學(xué)性、真實性、代表性

1取樣均勻性合理性取樣原則根據(jù)藥物性質(zhì)、不同劑型,采用不同的取樣方法及不同的取樣量。

1取樣

先進(jìn)行外觀檢查包括：品名、劑型、批號、保質(zhì)期及包裝情況等.取樣程序

1取樣

制劑分析片劑、膠囊劑（非均勻制劑）每批至少10

20片注射劑（均勻制劑）一般3

5支（測定３次）一般情況下，樣品數(shù)量應(yīng)為一次檢驗用量的三倍。

1取樣固體原料藥當(dāng)n≤3時，每件取樣；當(dāng)n≤300時,按+1當(dāng)n>300時,按/2+12性狀性狀分析記述藥品的外觀、臭、味和一般的穩(wěn)定性情況，溶解度以及物理常數(shù)等。1.外觀、臭、味和穩(wěn)定性；2.溶解度；

2性狀

3.物理常數(shù)物理常數(shù)包括相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、吸收系數(shù)、碘值、皂化值和酸值等；測定結(jié)果不僅對藥品具有鑒別意義，也反映藥品的純度，是評價藥品質(zhì)量的主要指標(biāo)之一。構(gòu)成法定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，測定方法收載于藥典附錄。3鑒

別

依據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，采用化學(xué)法、物理法及生物學(xué)方法進(jìn)行某些特殊反應(yīng)，或測試某些物理常數(shù)或光譜特征及,判斷已知藥物及其制劑的真?zhèn)?；采用一組（二個或幾個）試驗項目全面評價一個藥物。3鑒

別

專屬性強(qiáng)再現(xiàn)性好靈敏度高簡便快速鑒別方法要求

化學(xué)反應(yīng)法

色譜鑒別法

光譜鑒別法3鑒

別化學(xué)鑒別法(1)呈色反應(yīng)鑒別法(2)沉淀生成反應(yīng)鑒別法(3)熒光反應(yīng)鑒別法(4)氣體生成鑒別法

1紫外光譜鑒別法①

測定最大吸收波長,或同時測定最小吸收波長.乙胺嘧啶供試品在0.1mol/L鹽酸介質(zhì)中的紫外吸收在272nm處為峰,216nm處為谷.光譜鑒別法

光譜鑒別法②規(guī)定吸收波長和吸收度比值法兩性霉素在362nm、381nm、405nm波長處有最大吸收，規(guī)定362nm與381nm處吸收度比值不大于0.6、381nm與405nm波長比值不大于0.9.

光譜鑒別法

己稀雌酚注射液用供試品溶液250～450nm波長吸收光譜與對照品是否一致鑒別。③與對照品比較,對比吸收光譜的一致性

⑤經(jīng)化學(xué)處理后,測定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。④規(guī)定一定濃度供試品在最大吸收波長處的吸收度。光譜鑒別法

2紅外光譜法光譜鑒別法中國藥典采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照法BP采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照法、對照品法USP采用對照品法JP規(guī)定條件下測定一定波長處特征吸收峰。色譜譜鑒別法適用于復(fù)雜環(huán)境下藥物有效成分及雜質(zhì)鑒別,具有分離、分析同時進(jìn)行的特點。3色譜法（HPLCGCTLC)色譜譜鑒別法（1）高效液相色譜法(HPLC)

供試品和對照品色譜峰保留時間一致.（2）氣相色譜法

(GC)

同HPLC要求色譜譜鑒別法

（3）薄層掃描法(TLC)對照品比較法供試品斑點與對照品的Rf值及斑點的顏色應(yīng)一致。②化學(xué)法和儀器法相結(jié)合,每種藥品一般選用2~4種方法進(jìn)行鑒別試驗,相互取長補(bǔ)短。色譜譜鑒別法①方法要有一定的專屬性、靈敏性、且便于推廣。③盡可能采用藥典中收載的方法。

酶法

電泳法

生物法3鑒

別4雜質(zhì)

檢查檢查：包括有效性、均一性、純度要求及安全性四個方面。純度要求即藥物的雜質(zhì)檢查，亦稱限度檢查、純度檢查。藥物在不影響療效及人體健康的原則下,可以允許生產(chǎn)過程和貯藏期間引入的微量雜質(zhì)的存在.

檢查是判斷藥品純度是否符合限量規(guī)定的要求。5安全性檢查生物藥物應(yīng)保證符合無毒、無菌、無熱源、無致敏源和降壓物質(zhì)等一般安全性要求。（1）異常毒性試驗：用一定劑量的藥物按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)定體重的某種試驗動物，觀察其毒性反應(yīng)。反應(yīng)的判斷以試驗動物的死亡與否為終點。5安全性檢查5安全性檢查（2）無菌檢查：是檢查藥品及敷料是否染有活菌的一種方法，是藥典中比較重要的檢查項目之一。5安全性檢查（3）熱源檢查：本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)（家兔法），以其體溫升高的程度，判定該供試品中所含熱源是否符合規(guī)定，是一種限度試驗法5安全性檢查（4）過敏試驗：是檢查異性蛋白的實驗。藥物中若夾雜有異性蛋白，在臨床使用時易引起病人的多種過敏反應(yīng)。5安全性檢查（5）降壓物質(zhì)檢查：降壓物質(zhì)是指某些藥物中可能含有的能導(dǎo)致血壓降低的物質(zhì)。中國藥典采用貓（或狗）血壓法檢查藥物中所含的降壓物質(zhì)。6含量測定

鑒別用來判定藥物的真?zhèn)?。檢查和含量測定可判定藥物的優(yōu)劣。藥物在通過鑒別無誤、雜質(zhì)、安全檢查合格的基礎(chǔ)上,進(jìn)行含量測定。判斷一個藥物的質(zhì)量是否符合要求，必須全面考慮鑒別、檢查與含量測定三者的檢驗結(jié)果。6含量測定

準(zhǔn)確測定有效成分的含量。測定藥品的含量是評定藥品質(zhì)量,保證藥品療效的重要手段。采用化學(xué)分析方法或物理分析方法。含量測定

6含量測定

生物藥物的含量表示方法①用百分含量表示，適合于結(jié)構(gòu)明確的小分子藥物或經(jīng)水解后變成小分子藥物（理化方法測定）。②用效價