免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用

免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第1頁緒言免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第2頁

第一節(jié)免疫學技術(shù)范圍與應(yīng)用一、免疫學技術(shù)范圍二、免疫學技術(shù)應(yīng)用特點免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第3頁免疫學技術(shù)范圍1、對含有免疫活性物質(zhì)定性、定量測定2、對免疫系統(tǒng)組成成份數(shù)量、狀態(tài)測定免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第4頁

免疫學技術(shù)應(yīng)用特點1、對象——“包羅萬象”2、方法——“兼容并蓄”免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第5頁

第二節(jié)相關(guān)免疫學基礎(chǔ)概念一、抗原概念與屬性二、免疫細胞概念與分類三、免疫應(yīng)答概念與過程免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第6頁免疫原性——可識別、可反應(yīng)性（誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答特征）免疫反應(yīng)性

——選擇結(jié)合性（和免疫應(yīng)答產(chǎn)物特異性結(jié)合特征）抗原概念與屬性免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第7頁免疫細胞概念與分類免疫細胞（Immunecells）泛指全部參加免疫應(yīng)答及與免疫應(yīng)答活動相關(guān)細胞。免疫活性細胞（Immunecompetentcell，ICC）能夠接收抗原刺激、產(chǎn)生特異性活化、增殖、分化并形成效應(yīng)產(chǎn)物淋巴細胞。免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第8頁

免疫細胞類型

紅細胞血小板肥大細胞中性粒細胞巨噬細胞樹突狀細胞漿細胞T細胞NK細胞免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第9頁免疫應(yīng)答概念與過程免疫應(yīng)答（immuneresponse）免疫系統(tǒng)接觸抗原后，免疫細胞反抗原進行識別；并使特異性淋巴細胞活化、增殖；表現(xiàn)出免疫效應(yīng)過程。免疫應(yīng)答階段1、抗原識別階段（antigen-recognizingphase）2、淋巴細胞活化階段（lymphocyte-activatingphase）

3、抗原去除階段（antigen-eliminatingphase）免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第10頁

第三節(jié)抗原抗體反應(yīng)基礎(chǔ)原理一、抗原抗體反應(yīng)原理二、抗原抗體反應(yīng)特點三、影響抗原抗體反應(yīng)原因免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第11頁抗原抗體反應(yīng)原理1、抗原抗體結(jié)合作用力2、抗原抗體結(jié)合物析出原因免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第12頁引發(fā)抗原抗體結(jié)合作用力1、電荷引力（庫侖引力）2、電子云引力（VanderWaals力）3、氫鍵結(jié)協(xié)力4、疏水作用力免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第13頁抗原抗體結(jié)合物析出原因析出+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—電解質(zhì)+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第14頁

抗原抗體反應(yīng)特點1、特異性2、可逆性3、適合百分比性免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第15頁特異性抗原A抗原C抗原B特異性反應(yīng)交叉反應(yīng)無反應(yīng)免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第16頁可逆性K（親和常數(shù)）=Ag+AbAgAb免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第17頁適合百分比性抗體含量抗原含量前帶后帶等價帶免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第18頁網(wǎng)格學說（latticetheory）抗體過?？乖^?？贵w抗體百分比適當免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第19頁

抗原抗體反應(yīng)影響原因1、電解質(zhì)2、酸堿度（pH值6-8）3、溫度（37-42。C）免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第20頁

第四節(jié)免疫學檢測技術(shù)評價一、評價標準

二、特異性與敏感性關(guān)系免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第21頁評價標準Specificity（特異）Sensitivity（敏感）Simplicity（簡便）Safety（安全）Saving（節(jié)約）免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第22頁特異性與敏感性關(guān)系特異性高、敏感性低

敏感性高、特異性低免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第23頁抗原提取與制備免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第24頁

第一節(jié)抗原/免疫原制備基礎(chǔ)概念一、抗原制備目標二、抗原“純度”三、抗原制備主要技術(shù)路徑免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第25頁抗原制備目標免疫原：激活T、B細胞半抗原：檢測對應(yīng)抗體免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第26頁抗原“純度”免疫原：保留足夠可被T、B細胞識別抗原決定簇半抗原：盡可能降低影響反應(yīng)特異性抗原決定簇免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第27頁抗原制備主要技術(shù)路徑天然抗原——分離、純化半抗原——人工合成、載體聯(lián)接抗原肽——合成、基因工程制備免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第28頁

第二節(jié)完全抗原/免疫原制備方法一、顆粒性抗原制備二、可溶性抗原制備免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第29頁顆粒性抗原制備1、采集、分離抗原2、無害化處理免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第30頁可溶性抗原制備與純化1、處理與粉碎2、蛋白質(zhì)分離3、單一組分提取4、抗原純度判定

免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第31頁處理與粉碎組織粉碎：機械、生物

細胞破碎：物理、化學、生物

免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第32頁蛋白質(zhì)分離選擇性沉淀：鹽析有機溶劑沉淀水溶性非離子型聚合物沉淀

透析技術(shù)：超濾技術(shù)：

免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第33頁單一組分提取層析技術(shù)：凝膠過濾離子交換親和層析

離心技術(shù)：差速離心密度梯度離心電泳技術(shù)：電泳洗脫等電聚焦免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第34頁凝膠層析（分子篩）免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第35頁離子交換層析+++———————++++++++——+++——++免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第36頁親和層析免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第37頁抗原純度判定方法：層析性質(zhì)測定電泳法免疫法指標：電泳純免疫純免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第38頁

第三節(jié)半抗原免疫原制備方法一、載體選擇二、半抗原與載體聯(lián)接免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第39頁載體選擇蛋白質(zhì)載體：BSA、HAS、OVA、KLH聚合多肽載體：多聚賴氨酸高分子聚合物載體：PVP、羧甲基纖維素免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第40頁半抗原與載體聯(lián)接1、連接方式：物理法（吸附）化學法2、化學連接方法：直接聯(lián)接法：間接聯(lián)接法：免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第41頁半抗原與載體直接聯(lián)接碳化二亞胺法蛋白質(zhì)-COO—+R-N+=CN-R`

H-N+-R蛋白質(zhì)-COO-C-NH-R`+半抗原-NH2

O蛋白質(zhì)-C-NH-半抗原+R-NH-CO-NHR`免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第42頁半抗原與載體直接聯(lián)接

戊二醛法蛋白質(zhì)-NH2

+半抗原-NH2+COH-（CH2）

3-

COH蛋白質(zhì)-N=CH-（CH2）

3–

CH=N-半抗原免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第43頁半抗原與載體直接聯(lián)接

氯甲酸異丁酯法半抗原-COOH

+Cl-COO-CH2CH（CH3）2

OO半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2+蛋白質(zhì)-NH2

半抗原-CO-NH-蛋白質(zhì)+HO-CH2CH（CH3）2

免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第44頁半抗原與載體間接聯(lián)接琥珀酸酐法

OO半抗原-CH2–OH+C-O-CCH3CH3O半抗原-CH2–O-C-(CH2)2-COOH免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第45頁半抗原與載體間接聯(lián)接O-（羥甲基）羥胺法半抗原-C=O

+H2N-O-CH2-COOH

半抗原-C=N-O-CH2-COOH

免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第46頁半抗原與載體間接聯(lián)接一氯醋酸鈉法半抗原--OH

+Cl-CH2-COONa半抗原--CH2-COOH免疫學技術(shù)的范疇與應(yīng)用第47頁半抗原與載體間接聯(lián)接重氮化對氨基苯甲酸法HOOC--NH2

+NaNO2HOOC--N=N半抗原--OH

+HOOC--N=N半抗原--N=N-