2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

動(dòng)物細(xì)胞工程-----------動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是由免疫細(xì)胞的激活引起，釋放出一系列細(xì)胞因子，通過增加組織蛋白酶的產(chǎn)生和激活破骨細(xì)胞而引發(fā)關(guān)節(jié)滑膜炎癥的慢性自身免疫性疾病，主要病癥為關(guān)節(jié)軟組織腫脹、關(guān)節(jié)骨損傷。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明了

？為研究RA的發(fā)生與細(xì)胞因子的關(guān)系，研究人員分別測定了多例健康志愿者和RA患者血清中細(xì)胞因子的平均含量，結(jié)果如下圖。注：腫瘤壞死因子（TNF）：由活化的巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生的細(xì)胞分子（小分子多肽）白細(xì)胞介素--4/10（IL-4/IL-10）：由肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子對照組癥狀期緩解期資料1：作為炎癥因子的代表—TNF，

能夠激活滑膜成纖維細(xì)胞過表達(dá)組織蛋白酶，分解骨骼和軟骨中的膠原蛋白，進(jìn)而導(dǎo)致軟骨和骨骼破壞關(guān)節(jié)侵蝕。另外TNF也能激活破骨細(xì)胞形成，進(jìn)而溶解骨質(zhì)。

請研發(fā)一種治療藥物，為患者帶來希望。TNF受體TNF受體抗TNF抗體二、傳統(tǒng)的血清抗體制備抗原缺陷：產(chǎn)量低、純度低、且特異性差反復(fù)注射動(dòng)物體內(nèi)B淋巴細(xì)胞漿細(xì)胞抗體Q：如何解決上述缺陷呢？單一的B淋巴細(xì)胞克隆B淋巴細(xì)胞群產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)、靈敏度高的抗體（單克隆抗體）單個(gè)B淋巴細(xì)胞壽命有限，大約為3~5天，在體外不能無限增殖Q:能否培養(yǎng)出一種既能分泌特異抗體，又能在體外大量增殖的細(xì)胞？英國米爾斯坦美國科勒1975年成功獲得單克隆抗體1984年諾貝爾生理學(xué)/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)任務(wù):小組合作，請嘗試建構(gòu)制備抗TNF單克隆抗體的流程三、抗TNF單克隆抗體的制備多種B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞純化TNF作為抗原注射小鼠體內(nèi)Q：誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法有哪些呢？物理方法（離心、振動(dòng)、電激）化學(xué)方法（聚乙二醇）生物方法（滅活的病毒）Q:如何篩選雜交瘤細(xì)胞?Q:誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞，是否都是雜交瘤細(xì)胞？未融合的B淋巴細(xì)胞未融合的骨髓瘤細(xì)胞B—B雜交細(xì)胞瘤—瘤雜交細(xì)胞B—瘤雜交瘤細(xì)胞B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合免疫小鼠三、抗TNF單克隆抗體的制備資料2：已知細(xì)胞合成DNA有D(全合成途徑)和S（補(bǔ)救合成途徑）兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤（A）阻斷。B淋巴細(xì)胞中這兩種DNA的合成途徑都有，但B淋巴細(xì)胞不能無限增殖。而鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑，

但它能不斷分裂增殖。

任務(wù)：請根據(jù)以上信息，設(shè)計(jì)一種方法，從培養(yǎng)液中篩選出雜交瘤細(xì)胞。注：次黃嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）篩選雜交瘤細(xì)胞Q:如何篩選能產(chǎn)生抗TNF抗體的雜交瘤細(xì)胞？B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合免疫小鼠特定的選擇培養(yǎng)基三、抗TNF單克隆抗體的制備篩選產(chǎn)生抗TNF抗體的雜交瘤細(xì)胞Q：分泌的抗體都是抗TNF的嗎？如何檢測？雜交瘤細(xì)胞抗原—抗體雜交技術(shù)TNF篩選雜交瘤細(xì)胞篩選產(chǎn)生抗TNF抗體的雜交瘤細(xì)胞B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合免疫小鼠Q:如何獲得大量的單克隆抗體？特定的選擇培養(yǎng)基抗原-抗體雜交技術(shù)三、抗TNF單克隆抗體的制備體內(nèi)培養(yǎng)（注射小鼠腹腔內(nèi)）體外培養(yǎng)抗TNF單克隆抗體抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞三、抗TNF單克隆抗體的制備M:GAPDH(廣泛分布于各種細(xì)胞的一種酶)1.裸鼠單核細(xì)胞全細(xì)胞裂解物2.純化的TNF蛋白3.牛單核細(xì)胞全細(xì)胞裂解物4.人單核細(xì)胞全細(xì)胞裂解物資料3：研究人員從擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)液中，提取抗TNF單克隆抗體與不同抗原進(jìn)行雜交檢測，結(jié)果如下圖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抗TNF單克隆抗體不能與1、3結(jié)合，具有

，可以用于后續(xù)TNF所引發(fā)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等相關(guān)疾病的研究.特異性資料3：為驗(yàn)證抗TNF單克隆抗體作為治療藥物的效果，研究人員以小鼠為實(shí)驗(yàn)對象進(jìn)行研究。由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，抗TNF單克隆抗體是否可以作為治療RA的一種候選藥物_____________，判斷依據(jù)是_____________。時(shí)間/天數(shù)關(guān)節(jié)腫脹增加體積正常鼠+生理鹽水RA模型鼠+抗TNFRA模型鼠+