酶免疫測(cè)試eia技術(shù)

酶免疫測(cè)試eia技術(shù)酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第1頁

酶免疫分析技術(shù)（enzymeimmunoassay,EIA）是繼熒光免疫技術(shù)和放射免疫技術(shù)之后建立一個(gè)非放射性免疫技術(shù)，是將抗原抗體反應(yīng)高度特異性和酶高效催化作用相結(jié)合，發(fā)展建立一個(gè)非放射性標(biāo)識(shí)免疫性標(biāo)識(shí)分析方法。酶免疫分析系統(tǒng)則屬于開放式，符合標(biāo)準(zhǔn)各種品牌ELISA試劑盒均可應(yīng)用，且有靈敏度高、特異性強(qiáng)、酶免疫試劑性質(zhì)比較穩(wěn)定、操作方法簡(jiǎn)便、快速、無放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點(diǎn)。酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第2頁酶免疫分析技術(shù)非均相酶免疫分析均相酶免疫分析非均相液相酶免疫分析非均相固相酶免疫分析以聚苯乙烯制品作為載體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)---ELISA一、酶免疫測(cè)試（EIA）技術(shù)分類

酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第3頁二、ELISA技術(shù)方法與原理

（1）ELISA特點(diǎn)：在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"；酶標(biāo)識(shí)免疫活性物質(zhì)，進(jìn)行信號(hào)放大；有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過程；靈敏度特異性相對(duì)較高。（2）ELISA不足：只能檢測(cè)到ng水平，精密度差（批內(nèi)CV15-20%）；線性范圍窄（一個(gè)數(shù)量級(jí)）。（3）依據(jù)檢測(cè)目標(biāo)和操作步驟不一樣有三種基礎(chǔ)方法：雙抗體（原）夾心法；間接法；競(jìng)爭(zhēng)法酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第4頁ELISA測(cè)試原理

1）將鏈霉親合素包被聚苯乙烯塑料試管安置固定。2）將生物素標(biāo)識(shí)特異性抗體和待測(cè)抗原加入鏈霉親合素包被小管內(nèi)，經(jīng)溫育，生物素和親和素發(fā)生連接，待測(cè)抗原和特異性抗體發(fā)生結(jié)合，形成固相包被親合素-生物素-特異性抗體-待測(cè)抗原復(fù)合物，然后進(jìn)行洗滌，除去未結(jié)合抗原和生物素標(biāo)識(shí)抗體。3）加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)識(shí)特異性抗體(酶標(biāo)抗體)，經(jīng)溫育形成固相包被鏈酶親合素-生物素-特異性抗體-待測(cè)抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，再次進(jìn)行洗滌，除去多出酶標(biāo)抗體。4）加入底物ABTS和H2O2，經(jīng)溫育，ABTS在辣根過氧化物酶作用下顯色，然后經(jīng)波長(zhǎng)450nm光度計(jì)測(cè)定取得A值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測(cè)抗原含量。酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第5頁三、自動(dòng)化酶標(biāo)儀基礎(chǔ)工作原理

光源光路微孔板觸摸屏電源

單

A/D轉(zhuǎn)換程控放大器多路開關(guān)光電檢測(cè)顯示器

片打印機(jī)步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動(dòng)步進(jìn)電機(jī)送樣機(jī)構(gòu)電源

機(jī)

圖2工作原理方框圖電源酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第6頁四、ELISA操作步

（1）試劑準(zhǔn)備（2）加樣（3）保溫使用恒溫水箱使用保溫箱（4）洗滌（5）比色酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第7頁五、ELISA質(zhì)量控制

（一）測(cè)試前標(biāo)本采集和保留

（1）可作標(biāo)本廣泛，體液（如血清，血漿，各種積液），分泌物（如唾液）和排瀉物（如糞便，尿液）均可。（2）標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)盡可能防止溶血，不然造成假陽性；長(zhǎng)菌標(biāo)本一樣道理易產(chǎn)生假陽性。（3）抗凝不完全標(biāo)本因纖維蛋白元干擾而造成假陽性，提議盡可能不用抗凝血尤其是用肝素抗凝劑。（4）標(biāo)本保留：血清置4℃冰箱5天內(nèi)完成測(cè)試；一周以上則要-20℃冰凍保留，融解時(shí)應(yīng)上下顛倒充分混勻。（5）ELISA靈敏度>1ng/ml水平上,標(biāo)本間污染要盡可能防止，尤其不應(yīng)與生化試驗(yàn)用同一管標(biāo)本，最起碼應(yīng)先做免疫后做生化。酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第8頁（二）儀器質(zhì)控

（1）移液器：ELISA加樣量?。?-100ｕl），其準(zhǔn)確性直接影響試驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢驗(yàn)，普通應(yīng)在±10%以內(nèi)；（2）水浴箱：經(jīng)常檢驗(yàn)水浴箱溫度計(jì)所表示溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測(cè)溫度是否一致，允許有±1℃誤差；（3）洗板機(jī)：每個(gè)廠家設(shè)置洗板后殘留液有各自要求普通不超出2ul，人工扣板時(shí)，墊紙不濕，定時(shí)檢驗(yàn)管孔是否堵塞；（4）酶標(biāo)儀：經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)個(gè)別，預(yù)防濾光片霉變，定時(shí)檢測(cè)校正，使其保持良好工作性能。酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第9頁（三）分析中質(zhì)控

（1）加樣（2）溫育（3）洗滌（4）顯色（5）酶標(biāo)儀判讀結(jié)果酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第10頁六、ELISA操作注意事項(xiàng)

（1）測(cè)試之前，冰箱內(nèi)試劑一定要復(fù)溫（至室溫），并檢驗(yàn)是否已經(jīng)變質(zhì)，同時(shí)用雙蒸水稀釋濃縮洗滌液和稀釋液，若用不合格蒸餾水則可使空白值增高。（2）微量加液器應(yīng)注意保養(yǎng)并定時(shí)校正，不然結(jié)果誤差較大，同時(shí)加樣時(shí)不可出現(xiàn)氣泡，以免反應(yīng)物間不能充分混勻反應(yīng)。（3）溫育時(shí)要力爭(zhēng)受熱均勻，同時(shí)防止液體蒸發(fā)。（4）洗滌時(shí)力爭(zhēng)次數(shù)足夠，且防止形成氣泡，不然洗滌不完全。（5）比色時(shí)反應(yīng)管內(nèi)不能留有氣泡，管底不能存有水滴，不然出現(xiàn)較大誤差。酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第11頁七、影響ELLSA測(cè)試結(jié)果常見問題原因及處理方法

1.選擇試劑2.加樣3.孵育4.洗板5.顯色6.終止7.讀板酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第12頁八、、RT-2100C型多功效酶標(biāo)儀儀器特點(diǎn)：

1、RT-2100C可廣泛應(yīng)用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、血液病、艾滋病、內(nèi)分泌障礙測(cè)定等臨床論斷領(lǐng)域。2、大屏幕漢化界面，利用觸摸屏和筆作為輸入方式，極大地方便了用戶操作輸入。3、100個(gè)可編程檢驗(yàn)項(xiàng)目。4、各種定量、定性計(jì)算方法5、96孔可視化布板，空白位、對(duì)照位、樣本位、標(biāo)準(zhǔn)品位任意設(shè)置，同一板上可同時(shí)進(jìn)行最多12個(gè)項(xiàng)目標(biāo)測(cè)試。6、8通道檢測(cè)快速準(zhǔn)確(<5秒/板)，測(cè)試前震動(dòng)混勻功效。酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第13頁7、大容量歷史數(shù)據(jù)保留，最多可保留500個(gè)項(xiàng)目，1000個(gè)病人，10000條樣本統(tǒng)計(jì)。8、形式多樣綜合漢字匯報(bào)輸出，支持各種品牌系列外置打印機(jī)。9、強(qiáng)大網(wǎng)絡(luò)功效：可與醫(yī)院內(nèi)部計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)、質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心及雷杜用戶服務(wù)中心聯(lián)網(wǎng)，為工作帶來極大便捷。10、配合使用雷杜酶標(biāo)試驗(yàn)室管理系統(tǒng)，能夠在聯(lián)網(wǎng)計(jì)算機(jī)上進(jìn)行數(shù)據(jù)管理和分析。11、輔助管理功效：內(nèi)置科室數(shù)據(jù)庫、醫(yī)生數(shù)據(jù)庫和系統(tǒng)日志數(shù)據(jù)庫。酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第14頁九、RT-2100C型多功效酶標(biāo)儀常見測(cè)試項(xiàng)目（1）肝炎類：甲肝抗體IgM、乙肝兩對(duì)半、丙、丁、戊、庚性肝炎抗體等（2）傳染病類：愛滋病、衣原體、肺炎支原體、腺病毒、幽門螺旋桿菌、腮腺炎、麻疹、水痘、百日咳桿菌、流行性出血熱、狂犬病等。（3）腫瘤標(biāo)志物類：卵巢癌、乳腺癌、胃腸道癌、癌胚抗原、甲胎蛋白、膀胱癌、鐵蛋白等。（4）內(nèi)分泌類：T3、T4、促卵泡生成素(FSH)、黃體生成素(LH)、泌乳素(PRL)、人絨毛促性腺激素(HCG)、睪酮(TESTO)、孕酮(PROG)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、生長(zhǎng)素(HGH)、促甲狀腺素(TSH)、皮質(zhì)醇或皮質(zhì)酮(C)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)等。（5）本身抗體類：ENA全套6項(xiàng)篩選、抗核抗體、抗Sm抗體、抗精子抗體、抗雙鏈/單鏈DNA、紅斑狼瘡篩選等。（6）Torch類、病毒感染類：弓形蟲、巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒、單純皰疹病毒等。（7）細(xì)胞因子類：白細(xì)胞介素、可溶性CD抗原。酶免疫測(cè)試eia技術(shù)第15頁十