2019年臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師考試《微生物檢驗(yàn)》輔導(dǎo)講義 弧菌科及檢驗(yàn)

弧菌科及檢驗(yàn)

?考點(diǎn)

＞弧菌屬

＞氣單胞菌屬

＞鄰單胞菌屬

【內(nèi)容講解】

共同特點(diǎn)：

＞G,直或微彎的桿菌

＞氧化酶陽性

＞具有極端鞭毛、動(dòng)力陽性

＞發(fā)酵葡萄糖

弧菌科細(xì)菌及其初步鑒定

弧菌屬氣單胞菌屬鄰單胞菌屬發(fā)光桿菌屬

極端鞭毛+---

甘露醇++--

脂酶++-+/-

NaCl+--+

0129敏感+-十+

一、弧菌屬

WTO腹瀉病控制中心將弧菌分為四類：

①01群霍亂弧菌；

②不典型01群霍亂弧菌；

③非01群霍亂弧菌；

④其他弧菌(副溶血性弧菌)。

(-)霍亂弧菌

霍亂的病原菌，該病為一種急性烈性腸道傳染病，發(fā)病急，傳染性強(qiáng)，死亡率高。

1.生物學(xué)特性

(1)形態(tài)染色

＞弧形或逗點(diǎn)狀；無芽胞、有菌毛、有些菌株有莢膜；一端有一根粗而長的鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。

＞取患者米上水樣糞便作懸滴觀察,可見該菌呈穿梭樣或流星狀運(yùn)動(dòng)。

＞液體培養(yǎng)物滴片染色鏡檢，可見排列如“魚群狀”革蘭陰性弧菌。

(2)培養(yǎng)特性

＞需氧或兼性厭氧菌；營養(yǎng)要求低；耐堿不耐酸，可在無鹽環(huán)境生長。

A堿性蛋白陳水：形成菌膜.

＞堿性瓊脂平板：較大、圓形、扁平、無色透明或半透明似水滴狀菌落。

＞硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂平板(續(xù))：較大黃色菌落。

＞含亞硫酸鉀瓊脂平板：菌落中心呈灰褐色。

＞慶大霉素瓊脂：菌落中心呈嬴花丁

(3)生化反應(yīng)

＞分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

＞遲緩發(fā)酵乳糖，不分解阿拉伯糖。

＞氧化酶、明膠酶試驗(yàn)和ONPG試驗(yàn)均陽性。

＞能產(chǎn)生靛基質(zhì)，霍亂紅反應(yīng)（即亞硝基靛基質(zhì)試驗(yàn)）陽性。

（4）抗原結(jié)構(gòu)與分型

＞耐熱的特異性0抗原：特異性高，具有群特異性和型特異性，是分群和分型的基礎(chǔ)。

＞不耐熱的非特異性H抗原：H抗原為弧菌屬所共有。

分類-血清學(xué)：

廠稻葉型（AC）

01群霍亂弧菌一小川型（AB）

—彥島型（ABC）

與01群抗血清瀚集4v

不典型01群霍亂弧菌

一非01群霍亂弧菌（02?0138）

I

0139群霍亂取菌

分類-生物學(xué):

性狀古典生物型ElTor生物型

溶血（羊紅細(xì)胞）-D

血凝（雞紅細(xì)胞）-+

V-P試驗(yàn)-+

多粘菌素B敏感+-

噬菌體IV組裂解+-

噬菌體V組裂解-+

（5）變異性

＞形態(tài)變異

＞菌落變異

＞溶血性變異

＞毒力變異

（6）抵抗力

＞對(duì)熱、干燥、日光、酸、消毒劑很敏感。但耐堿力較強(qiáng)。

2.微生物學(xué)檢驗(yàn)

（1）標(biāo)本采集

標(biāo)本以糞便為主，盡可能在患者用藥之前采取。一般米常水樣便采取1?3ml,成形便采取蠶豆大小。

注：采集的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)接種適宜培養(yǎng)基。不能及時(shí)接種者，要接種于保存或運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)盡快送檢。

（2）檢驗(yàn)方法及鑒定

米潛水樣便、腸拭子、嘔吐物等

噌菌培養(yǎng)快速診斷直接涂片鏡檢、

(堿性蛋白凍水)

分離培養(yǎng)(戚性瓊脂或TCBS、

慶大霉素瓊脂)

血清、生化鑒定

確診報(bào)告

3.臨床意義

致病物質(zhì)：

＞霍亂腸毒素，鞭毛，菌毛等。

所致疾?。?/p>

＞霍亂。表現(xiàn)為劇烈的腹瀉和嘔吐，導(dǎo)致嚴(yán)重脫水、代謝性酸中毒、休克和死亡。

免疫性：

＞病后獲得牢固免疫力，再感染者少見。小腸內(nèi)有slgA形成。

(-)0139型霍亂弧菌

＞屬非01群霍亂弧菌，可與0139抗血清凝集。

＞治療原則：

輸液，糾正電解質(zhì)紊亂，選用合適的抗菌藥物。

(三)副溶血性弧菌

?-種嗜鹽性弧菌。它是我國沿海地區(qū)最常見的食物中毒病原菌。

1.生物學(xué)特性

(1)形態(tài)染色：

＞G,桿菌，隨培養(yǎng)基不同菌體形態(tài)差異較大，有卵圓形、棒狀、球桿狀、梨狀、弧形等多種形態(tài);

兩極濃染。

＞單端單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。無芽胞、無莢膜。

(2)培養(yǎng)特性：

＞需氧，營養(yǎng)要求不高；NaCl最適濃度為35要L,在無鹽培養(yǎng)基中不生長。所需pH為7.0?9.5,最

適pH為7.7。

＞不耐熱，不耐冷，不耐酸，對(duì)常用消毒劑抵抗力弱。

＞液體培養(yǎng)基：形成菌膜。

＞35g/LNaCl瓊脂平板上：蔓延生長，菌落邊緣不整齊，凸起、光滑濕潤,不透明。

＞副溶血性弧菌專用選擇培養(yǎng)基：形成1?2.5mm,稍隆起、混濁、無粘性、綠色菌落。

＞SS平板：不生長或長出1?2mm扁平無色半透明的菌落，不易挑起，挑起時(shí)呈黏絲狀。

＞羊血瓊脂平板：形成2?3mm、圓形、隆起、濕潤、灰白色菌落，某些菌株可形成B溶血或a溶血。

＞TCBS瓊脂：不發(fā)酵蔗糖，菌落綠色。

(3)生化反應(yīng)：

＞在70g/LNaCl中生長，在無鹽或100g/LNaCl中不生長。

＞能分解葡萄糖、麥芽糖、甘露醉、淀粉產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、蔗糖,但分解阿拉伯糖。

＞靛基質(zhì)、甲基紅試驗(yàn)陽性，V-P,尿素酶試驗(yàn)陰性。

H2S＞

＞神奈川試驗(yàn)：致病菌株能使人或兔紅細(xì)胞發(fā)生溶血，對(duì)馬紅細(xì)胞不溶血，稱神奈川試驗(yàn)陽性。

2.微生物檢驗(yàn)

(1)標(biāo)本采集：主要是患者的糞便、可疑食物、炊事用具的洗滌液等。

(2)檢驗(yàn)方法及鑒定

1)增菌培養(yǎng)

2)分離培養(yǎng)：菌落濕潤、混濁無黏性，呈綠色；

3)初步鑒定：

＞形態(tài)、染色、多形性、活潑動(dòng)力等特點(diǎn)。

＞選擇培養(yǎng)基上的菌落特征。

＞氧化酶試驗(yàn)陽性，在KIA上斜面不產(chǎn)酸，底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生HzS。在MIU上有動(dòng)力，靛基質(zhì)陽

性，尿素酶陰性。

＞嗜鹽試驗(yàn)和血清學(xué)分型。

4)最后鑒定：作進(jìn)一步生化試驗(yàn)及毒力試驗(yàn)。

3.臨床意義

致病因子：黏附因子(主要為菌毛)、毒素(如耐熱性溶血素、TDH類毒素)。

所致疾?。菏澄镏卸炯凹毙晕改c炎。

4.治療原則

選用合適的抗生素及其他抗菌藥物，嚴(yán)重病例需輸液及補(bǔ)充電解質(zhì)。

二、氣單胞菌屬

廣泛分布于自然界，可從水源、土壤以及人的糞便中分離。

本屬細(xì)菌有的種可引起人類腹瀉等多種感染。

1.生物學(xué)特性

(1)形態(tài)染色：

＞G,短桿菌，菌體兩端鈍圓。

＞單極鞭毛，運(yùn)動(dòng)極為活潑(除殺鯉氣單胞菌外)。無芽胞，有窄的莢膜。

(2)培養(yǎng)特性：

＞需氧或兼性厭氧，最適生長溫度30℃,但在。?45℃皆可生長；

＞營養(yǎng)要求不高；

＞普通培養(yǎng)基：1?3mm大小，微白色半透明的菌落；

＞血瓊脂：灰白、光滑、濕潤、凸起直徑約2mm的菌落，多數(shù)菌株有B溶血環(huán)，3?5天后菌落呈垣

綠色;

＞腸道選擇培養(yǎng)基：大多數(shù)菌株形成乳糖不發(fā)酵菌落；

＞TCBS瓊脂：生長不良；

＞液體培養(yǎng)基：呈均勻混濁。

(3)生化反應(yīng)：

＞發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣；

＞氧化酶和觸酶試驗(yàn)陽性；

＞在65g/LNaCl中不生長。

2.微生物檢驗(yàn)

（1）標(biāo)本采集：

不同疾病采集糞便或肛拭子、血液、膿汁、腦脊液、尿液等標(biāo)本。

（2）檢驗(yàn)方法及鑒定

1）直接涂片：革蘭陰性短桿菌；懸滴標(biāo)本運(yùn)動(dòng)活潑。

2）分離培養(yǎng)：觀察菌落。

3）鑒定：

①初步鑒定：

＞KIA：K/A、產(chǎn)氣+/一、H2S-；

＞MIU：++-；氧化酶陽性；

②最后鑒定：

＞氧化酶試驗(yàn)陽性可與腸桿菌科細(xì)菌鑒別。

＞發(fā)酵葡萄糖可與非發(fā)酵菌鑒別。

3.