進(jìn)出口食品中異稻瘟凈殘留量的檢測(cè)方法

進(jìn)出口食品中異稻瘟凈殘留量的檢測(cè)方法5試樣制備與保存5.1試樣制備5.1.1水果或藍(lán)菜取有代表性樣品500g,將其可食用部分切碎后不可用水洗滌，用搗碎機(jī)將樣品加工成案狀?；靹颍b入潔凈的盛樣容器內(nèi)，密封并標(biāo)明標(biāo)記。5.1.2茶葉及糧谷取有代表性樣品500g.用粉碎機(jī)粉碎并通過2.0mm圓孔篩?；靹?裝入潔凈的盛樣容器內(nèi)，密封并標(biāo)明標(biāo)記。5.1.3肉及肉制品取有代表性樣品500g,將其切碎后，用搗碎機(jī)將樣品加工成漿狀，混勻，裝入潔凈的盛樣容器內(nèi)，密封并標(biāo)明標(biāo)記。茶葉、蜂產(chǎn)品、調(diào)味品及糧谷類等試樣于0C～4C保存；水果蔬菜類和肉及肉制品類等試樣于-18℃以下冷凍保存。在制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。6測(cè)定步驟對(duì)于茶葉、板粟、蜂蜜、大米樣品·稱取1g均勻試樣《精確至0.001g),對(duì)于菠菜、葬頭、蘋果、食醋、雞肉、牛肉、魚肉樣品，稱取2g均勻試樣(精確至0.001g)。將稱取的試樣置于15mL.離心管中，加入1g氯化的，加入2mL蒸餾水，于混勻器上混勻30s,放置15min。加入3mL丙酮+正已烷混合液(3.5),在混勻器上混勻2min。2500r/min離心1min,吸取上層正已烷萃取液于另一試管中。再分別加入3mL丙酮+正已烷混合液重復(fù)提取兩次，合并提取液。6.2.1茶葉、菠菜、養(yǎng)頭、蘋果、板栗、蜂蜜樣品：將石墨化碳黑固相萃取柱(柱內(nèi)填約1cm高的無水硫酸的層)安裝在固相萃酸的真空抽濾裝置上，先用1ml×3丙酮預(yù)淋洗萃取柱，再用1mL×3正已烷預(yù)淋洗萃取柱，棄去全部預(yù)淋洗波。將正己烷提取液加入到石墨化碳黑固相萃取柱中，待提取液全部流出后，再用3mL.丙酮+正己烷混合液(3.6)洗脫萃取柱，保持流速1.5mL/min.收集全部流出液，于45℃下，氮?dú)饬鞔抵两伞Ｗ詈笥谜和槎ㄈ葜?.5mL,供GC-MS分析。6.2.2食醋、大米、雞肉、牛肉，魚肉樣品；將中性氧化鋁固相苯取柱(柱內(nèi)填約1cm高的無水硫酸鈉層)安裝在固相苯取的真空抽濾裝置上，先用3mL丙酮預(yù)淋洗萃取柱，再用3ml.正己烷預(yù)淋洗萃取柱，棄去全部預(yù)淋洗液。將正已烷提取液加入到中性氧化鋁固相萃取柱中，待提取液全部流出后，再用3mL.丙酮十正已烷混合液(3.6)洗脫萃取柱，保持流速1.5ml./min,收集全部流出液，于45℃下，氮?dú)饬鞔抵两?。最后用正己烷定容?.5ml,,供GC-MS分析。6.3.1氣相色譜-質(zhì)譜條件a)色諧柱：HP-5MS石英毛細(xì)管柱.30m×0.25mm《內(nèi)徑),膜厚0.25μm,或相當(dāng)者；b)色譜柱溫度；初始溫度80℃,以7C/min升至205℃,再以25℃/min升至280℃保持5min;e)進(jìn)樣口溫度；280℃;d)色譜-質(zhì)諧接口溫度；270℃;e)載氣：氮?dú)?，純度大于等?9.995%,0.8mL/mint允許范圍內(nèi)(允許范圍見表1)則可判定樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。在第6.3.1條規(guī)定的色譜條件下，異稻癌凈的參考保留時(shí)間是17.70min,其監(jiān)測(cè)離子(m/z)豐度比是203:204:246:288=17:100;15:19。色譜圖和質(zhì)譜圖參見附錄A。表1使用定性氣相色譜-質(zhì)譜時(shí)相對(duì)離子豐度最添加濃度和回收率見表2。添加濃度/(mg/kg)表2(續(xù))梁加濃度/(mg/kg)86.8~110.M9-03.本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中異稻癌凈殘留量的氣相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米、菠菜、蘋果、牛肉、雞肉、魚肉、蜂蜜、板栗、茶葉、食醋等食品中異稻瘟凈殘留量在制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。13測(cè)定步驟13.1提取與凈化13.1.1對(duì)于大米、板栗，蜂蜜樣品，稱取2g(精確至0.001g)均勻試樣于10ml.離心試管中，加人2mL.水，加入無水硫酸鈉使之飽和，加入2ml.丙酮十正已烷混合液(10,4)振蕩提取兩次，每次2min,然后離心3min(離心速度為2000r/min),吸取上層提取液于刻度離心管；殘?jiān)儆?mL正己烷提取兩次，合并提取液于刻度離心管中.在多功能微量化樣品處理儀或其他相當(dāng)?shù)膬x器上，于40℃下用氮?dú)饬鞔抵?.0mL.供進(jìn)樣分析。13.1.2對(duì)于菠菜、蘋果、食酷樣品，稱取2g(精確至0.001g)均勻試樣于10ml.離心試管中。對(duì)于茶葉樣品，稱取0.5g(精確至0.001g)均勻試樣于10mL離心試管中，加入2mL水，加入無水硫酸鈉使之飽和，用2mL丙酮十正己烷混合液(10.4)振蕩提取兩次，每次2min,然后離心3min(離心速度為2000r/min),吸取上層提取液于另一離心試管中。殘?jiān)儆?mL正已烷提取兩次，合并上層提取液，待凈化。在石墨化碳黑固相萃取柱上端裝入1cm高的無水硫酸鈉，先用4ml.丙酮十正已烷混合液(10.4)預(yù)淋洗固相萃取柱，棄去全部預(yù)淋洗液，然后將上述提取液頓入固相萃取柱中，待提取液全部流出固相萃取柱后，再用4ml.丙酮十正己烷混合液(10,4)洗脫，收集全部流出液于刻度離心管中，最后在多功能微量化樣品處理儀或其他相當(dāng)?shù)膬x器上，于40℃下用氮?dú)饬鞔抵?.0mL,,供進(jìn)樣分析。13.1.3對(duì)于牛肉、雞肉、魚肉樣品·稱取2g(精確至0.001g)均勻試樣于10mL.離心試管中，加入無水硫酸鈉使之飽和，用6mL丙酮+正己烷混合液(10.4)振蕩提取一次，時(shí)間2min.然后離心3min(離心速度為2000r/min),收集上層提取液于另一試管中。殘?jiān)儆?mL正已烷提取兩次，合并上層提取液，待凈化。在中性氧化鋁固相萃取柱上端裝入1cm高的無水硫酸鈉，先用4ml.丙酮十正己烷混合液(10.4)預(yù)淋洗固相萃取柱，棄去全部預(yù)淋洗液，然后將上述提取液傾入固相苯取柱中，待提取液全部流出固相萃取柱后，再用4mL.丙酮十正已烷混合液(10.4)洗脫，收集全部流出液于刻度離心管中，最后在多功能微量化樣品處理儀或其他相當(dāng)?shù)膬x器上，于40℃下用氮?dú)饬鞔抵?.0mL,供進(jìn)樣分析。13.2.1色譜條件a)色譜柱：EQUTTYI-1701毛細(xì)管桂，30m×0.32mm(內(nèi)徑)×1.0pm或相當(dāng)者；b)升溫程序；初始溫度100℃,以10℃/min升至220℃,保持10min;c)進(jìn)樣口溫度；250℃,d)檢測(cè)器溫度；250℃;e)載氣：氮?dú)猓兌却笥诘扔?0.99%,流量5.0mL/minti)進(jìn)樣方式：無分流進(jìn)樣，1.0min后開閥；13.2.2色譜測(cè)定根據(jù)樣液中異稻癌凈含量情況.選定與樣液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。異稻瘟凈標(biāo)菲工作溶液和樣液中異稻疽凈響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液等體積穿插進(jìn)樣測(cè)定，以保留時(shí)間定性，測(cè)量峰面積與標(biāo)準(zhǔn)工作液比較進(jìn)行定量。在上述色譜條件下，異稻瘟凈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖參見附錄B中圖B.1。除不加試樣外，按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。 添加濃度/(mg/kg)表3(續(xù))梁加濃度/(mg/kg)(資料性附錄)異稻瘟凈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色請(qǐng)圖圖B.1異稻癌凈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖DeterminationofThefirstmethodGaschromatography-massThisstandardspecifiesthedeterminstionandraphy-massspectrometryiThisstandardisapplicabletothedeterminatitea,leek.Alliumchinese,apple,chestnut,beehoney,vinegar,rice,beef,chicken,fish.TheiprobenfosresiduesinthetestsampleareextractedwithacetobypassingthroughagraphitizedcarbonblackcartridgeelutessolutionisevaporatedandmmadebymeansofgaschromatographequippedwithmassselectivedeUnlessotherwisespecified,thereagentsshouhdbeanalyticallypure3.4Anhydroussodiumsul3.5Acatone-n-hexanesolution;Acetone+n-hexane(1+2).3.6Acatone-n-hexanesolution;Acetone+n-hexane(3.7lprobenfosstandard(CgH,O?PS,CAS;26087-47-8);Pur3.8lprobenfosstandardstocksolution:Accuratelard,dissolveinasmallvolumeofacetone.Dilutew1000pg/mLinconcerntration.Thconcerntrationasthestandardworkingsolution.Thestand3.9Graphitizedcarbonblackcar3.10Neutralaluminumoxidecart4.1Gaschromatograph,equippedwithmass4.6Multifunctionalsampletrestmentunitformicro-chemica4.8Centrifugetu5PreparationandstoraTherepresentativesamplesroot,coronal(donotwanizedthoroughlyinahighspeedblender,aTherepresentativesamplesisreducedtocaTherepresentativesamplesisreducedtoca5mogenizedinameatgrinThetestsamplesoftea,beeproducts.grainsorcerealssamplesoffreshfruits,vegetables,meatandmeatproductsshouldcourseofsamplingandsamplepreparatfactorswhichmaycausethechangeofresicentrifugetube,Forleek,Alliumchinense,apple,vinegar,beef,chicken,fish,weighca20.001g)ofthetestsadistilledwater,blendfor30s,standforinvortexmixer,centrifugefor1minundintoanother15mLgraduatedtube.Repeattheproce6.2.1Tea,leek,Alliumchinense.apple,chestnut,beehoney;Setupcummanifoldandmechanicalpump(about1cmgraphitizedcarbonblackcartridge).Firstwashthegracetone,thenwashitwith1mL×3n-hexane,kTransfertheextractsintothecartridge.Washthetesttubewith(3.6)andaddintothecartridge.Collectthe6.2.2Vinegar,rice,beef,chicken,fish;Setupthesolidphasechanicalpump(about1cmoxidecartridge).Firstwashneutralaluminumoxidecartr3mLn-hexane,keepflowspeedat1.5mL/min.Dcartridge.Washthetesttubewith3mLacetome+n-hexantridge.Collectthetotaleluentandblowmearlyanddiluteexactlyto0.5ma)Column;HP-5MSfusedquartzcapillarycolumn.30m×0.25mm(b)Columntemperature;Initialtemperature80℃,rampat7℃/mintd)GC/MSinterface)Carriergas;Helium,purity>99.995%,0.8j)Acquistionmode;Sk)Monitorion(m/z):203.204,246,288;quantAccordingtotheapproximateconcentrationofiprobanfosinthetestsamplenitoringions(m/z)is203120412461288=17Table1—Maximumpermittedtolera10.5lprobenfosstandard(CwH,O?PS,CAS12608710.6lprobenfosstandardsolution:Accuratelyweightanadequateamountdissolveinasmallvolumeofacetone.Dilutewithacetonetoforma1000pg/mLinconcerntration.Thendilutethestandardquiredconcerntrationasthestandardworkingso10.7Graphitizedcarbonblackcartridge10.8Neutralaluminumoxidecartridge;11Apparatusa11.2Vortexmixer.11.4Multifunctionsampletreatmentunitformicro11.5Centrifugetubewit11.8Micro-adjustablevolunmeTherepresentativesamplesiroot,coronal(donotwanizedthoroughlyinahighspeedblender,a4mLacetona+hexane(10.4).Discardedthealuent.Transferallaxtractsblackcartridge,thenelutethecartridgewith4mLacecentrifugetubewithgroundstoptratedsolutionisreadyforgas13.1.3Forbeef,chicken,fish,weigh2gofthetefugetube,Add2mLwater,thensaturateth