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母羊地方流行性流產(chǎn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)操作規(guī)程效份視勻,4℃16h~18h感作,取出后37℃水浴30##+一 #一一一#溶溶溶效價(jià)效份視勻,4℃16h~18h感作,取出后37℃水浴30##+一一#一 一#溶溶溶7結(jié)果判定7.1在最后一次37℃水浴(或汽浴)30min后,立即進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果判定。7.2各組對(duì)照為如下結(jié)果時(shí)試驗(yàn)方成立,否則應(yīng)重復(fù)試驗(yàn):——被檢血清抗補(bǔ)體對(duì)照:完全溶血(一);——陽(yáng)性血清加抗原對(duì)照:完全抑制溶血(#);—陰性血清加抗原對(duì)照:完全溶血(一);——抗原抗補(bǔ)體對(duì)照:完全溶血(一);——溶血素對(duì)照;完全溶血(一);—生理鹽水對(duì)照;完全抑制溶血(#)7.3判定標(biāo)準(zhǔn);血清效價(jià)以50%溶血(++)為判定終點(diǎn)。被檢血清效價(jià);——1:4(+++)判為陰性:—-1:4(++)判為可疑;重復(fù)試驗(yàn)仍為可疑,則判為陽(yáng)性。23567134567一一一一一一一3#+ #+一 溶溶溶溶溶溶注:敏化紅組胞系由1%公綿羊紅細(xì)胞懸液加等量的2個(gè)工作單位的溶血(規(guī)范性附錄)1%綿羊紅細(xì)胞懸液的制備B.1頸靜脈采取成年健康公綿羊血液,以常規(guī)方法脫纖后,按1:1加入紅細(xì)胞保存液,混勻后分裝成3000r/min離心5min,按紅細(xì)胞泥容量加生理鹽水配成1%紅細(xì)胞懸液。B.2紅細(xì)胞保存液配方:葡萄糖20.5g,氧化鈉4.2g,檸檬酸三的8g,檸檬酸0.55g,燕餾水加至(規(guī)范性附錄)溶血素效價(jià)滴定C.1先將溶血素1:100稀釋(0.2mL含甘油的溶血素加9.8mL生理鹽水),按表C.1稀釋成不同倍數(shù),再按表C.2操作。表C.1溶血素稀釋123456789912345678111111111表C.2溶血素效價(jià)測(cè)定12356789000一一一一一一一+#一#C.2以完全溶血的溶血素最高稀釋倍數(shù)為一個(gè)溶血單位,表C.2所示為7000倍,正式試驗(yàn)時(shí),使用兩個(gè)溶血素單位,則本例溶血素稀釋倍數(shù)為7000÷2-3500倍。(規(guī)范性附錄)抗原、陽(yáng)性血清效價(jià)滴定方法D.1取80支試管,排成縱橫各9排的方陣(第9排缺1管)。D.2抗原和陽(yáng)性血清分別從1:8~1:512作倍比稀釋,陰性血清作1:4稀釋,設(shè)抗原、血清和生理鹽水對(duì)照。D.3每管按不同稀釋度的要求加入陽(yáng)性血清各0.1mL,抗原對(duì)照組一排不加血清,而用0,1mL.生理鹽水代替。D.4每管再按不同稀釋度的要求,各加入不同稀釋倍數(shù)的抗原0.1ml,血清對(duì)照不加抗原,面用0.1ml.生理鹽水代替。D.5每管中加入0.2ml.含2單位補(bǔ)體。D.6搖勻,置4℃冰箱感作16h~18h,次日取出放37℃水洛30min。D.7每管加入敏化紅細(xì)胞0.2mL。D.B混勻,置37℃水浴30min后,取出靜置2h~3h.判定結(jié)果。D.9效價(jià)判定;能與最高稀釋度的陽(yáng)性血清呈現(xiàn)完全抑制溶血(#)反應(yīng)的最高抗原稀釋度,即為抗原效價(jià)(一個(gè)工作量)如表D.1所示,抗原效價(jià)為1:128,陽(yáng)性血清效價(jià)為1:256(一個(gè)血清工作量)。表D
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