DB11／T 987-2013-鱘魚(yú)種質(zhì)鑒定規(guī)范

備案號(hào):38199-2013DB11北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 1 2 3 5 7 81鱘魚(yú)種質(zhì)鑒定規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)適用于西伯利亞鱘（Acipenserbaerii）種質(zhì)的檢屬鱘形目（Acipenseriformes）,鱘科（Acipenseridae）,鱘屬(A4生物學(xué)特征4.1外部形態(tài)色相似；腹骨板與背骨板間具有許多星狀薄骨板或微小顆粒，吻須4根，介于吻突與口裂之間，稍靠近24.2可數(shù)性狀第一鰓弓（左）外側(cè)鰓耙數(shù)：20～49，4.3可量性狀比例全長(zhǎng)/體長(zhǎng)a5.1生長(zhǎng)3在人工養(yǎng)殖條件下,不同年齡組的西伯利亞鱘魚(yú)體長(zhǎng)和體重年齡a12345雄魚(yú)為5齡以上。繁殖周期：野生狀態(tài)下為2年以上；采用流式細(xì)胞儀測(cè)定西伯利亞鱘魚(yú)細(xì)胞中DNA含量為N=8.98±0.1西伯利亞鱘肝臟酯酶（EST）同工酶有6條酶帶，電RAPD引物（CCGCCCAAAC）PCR擴(kuò)增的結(jié)果4F:TATCCCCTCCACTGGAAATR:GTTAAACATCCCTGCCTTF:CGATTTGATTGGCTCTTGTAR:TGCAAATAAATTGGAGCF:GGCAGGATTACATCTCCTGAR:TTACTAACTGCTAGATAATACCTCTF:ACCCGAGCTGTCACATTACTR:AAAATAACGCGAATTCCF:GCAATTCGTGTTATGTTCATTTR:TGCATTCAGAGAATAACCF:TGCATGACACAGGACTTACCR:TGCCTCTCAATAGCAACAF:ACCCGCAATTATTAGGACR:CAGGACAAACTCAGAF:TCACGCAGTCTCACAAGGR:TTCAATGGCAAACAGF:ACACTATCCCGCCACAATR:CCACTGAAGCCATCAAfu19F:CATCTTAGCCGTCTGTGGTACR:CAGGTCCCTAATACAATAfu22F:TCCACAATCCTGAATAATGACR:GCACCATCTAATACGAAATAfu39F:TTCTGAAGTTCACACATTGR:ATGGAGCATATTGGAAfu54F:CTCTAGTCTTTGTTGATTACAGR:CAAAGGACTTGAAACTAAfu68F:TTATTGCATGGTGTAGCTAAACR:AGCCCAACACAGACAAT57.2.3將處理過(guò)的樣品用細(xì)絹布過(guò)濾后，加入適量的同樣處理的雞血紅細(xì)胞，上流式細(xì)胞強(qiáng)度，計(jì)算西伯利亞鱘魚(yú)與雞血細(xì)胞（N=2.剪斷魚(yú)的尾動(dòng)脈，放血。隨后解剖，迅速摘取肝組織0.5g左右，置于0℃生理鹽水中，用生理鹽水6保存?；蚣羧∥鞑麃嗺\鰭條約0.5g，置于75%酒精利用常規(guī)苯酚/氯仿法抽提個(gè)體基因組DNA，利用紫外分光光度法確定DNA濃度，將個(gè)體基因組DNA微衛(wèi)星DNA法反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃變性45s、退火45s（各引物退火溫度詳見(jiàn)表4）、72℃延伸45s，401015175202381861217Afu195Afu22519Afu3914Afu5422Afu68217預(yù)電泳之后，在每個(gè)加樣孔中加入5μL解鏈后樣品，1800V恒壓電泳1.水漂洗30s，浸入在顯影液中顯影至帶型清晰，再用蒸餾水漂洗5min。晾干長(zhǎng)板后，使用熒光微衛(wèi)星引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，直接使用基因分析儀使用軟件STRUCTURE2.3對(duì)基因型數(shù)8Acipenseriforms.AULA-VerlagWiesb