土壤中性木聚糖酶（S-NEX）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

第第頁(yè)土壤中性木聚糖酶（S—NEX）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)土壤中性木聚糖酶（SoilNeutralXylanase，SNEX）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)微量法100T/48S注意：正式測(cè)定之前選擇23個(gè)預(yù)期差別大的樣本做猜測(cè)定。測(cè)定意義：木聚糖酶（EC3.2.1.8）緊要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱(chēng)為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原材料子細(xì)胞壁以及β葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸取利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，NEX一般分別自最適生長(zhǎng)pH為68的微生物。測(cè)定原理：NEX在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸取峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在540nm吸光值加添速率，可計(jì)算NEX活力。自備試驗(yàn)用品及儀器：天平、常溫離心機(jī)、震蕩儀、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。試劑構(gòu)成和配制：緩沖液：液體10mL×1瓶，4℃保管。試劑一：液體3mL×1瓶，4℃避光保管。試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保管。樣品處理：新鮮土樣風(fēng)干，過(guò)3050目篩。測(cè)定操作表：1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)整波長(zhǎng)至540nm。2、操作表對(duì)照管測(cè)定管土樣（g）0.020.02緩沖液（μL）150100試劑一（μL）50混勻，50℃震蕩反應(yīng)30min，趕忙90℃水浴10min，8000g，25℃離心10min，取上清100μL試劑二（μL）100100混勻，90℃水浴中顯色5min，取180μL于微量石英比色皿/96孔板測(cè)定540nm處吸光值A(chǔ)，分別記為A對(duì)照管、A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管A對(duì)照管。SNEX計(jì)算公式：a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=1.6904x+0.0058，R2=0.9989酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。SNEX活力（μmol/d/g土樣）=（△A0.0058）÷1.6904×V反總×103÷W÷T÷150=28.4×（△A0.0058）÷WV反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d；1000：1mmol/L=103μmol/L；150：木糖分子量。b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=0.8452x+0.0058，R2=0.9989酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。SNEX活力（μmol/d/g土樣）=（△A0.0058）÷0.8452×V反總×103÷W÷T÷150=56.8×（A5400.0058）÷WV反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d；1000：1mmol/L=103μmol/