直鏈淀粉含量試劑盒說(shuō)明書

第第頁(yè)直鏈淀粉含量試劑盒說(shuō)明書直鏈淀粉含量試劑盒說(shuō)明書微量法100管/96樣注意：正式測(cè)定前務(wù)必取23個(gè)預(yù)期差別較大的樣本做猜測(cè)定測(cè)定意義：直鏈淀粉是D葡萄糖基以a（1,4）糖苷鍵連接的多糖鏈，其含量測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有緊要意義。測(cè)定原理：利用80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，直鏈淀粉與碘形成的絡(luò)合物在620nm下有汲取峰。需自備的儀器和用品：酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、YI醚和蒸餾水。試劑的構(gòu)成和配制：試劑一：液體100mL×1瓶；4℃保管；試劑二：YI醚100mL×1瓶；（自備）試劑三：液體100mL×1瓶；4℃保管；試劑四：液體2mL×1瓶；4℃保管；試劑五：液體300uL×1瓶；4℃保管；淀粉提?。悍Q取0.01～0.02g烘干樣本（建議稱取約0.01g）于研缽中研碎，加入1mL試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑二（YI醚）振蕩5min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑三充分溶解，90℃水浴10min，冷卻后待測(cè)。測(cè)定步驟：1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)整波長(zhǎng)至620nm，蒸餾水調(diào)零。測(cè)定管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL樣本，14μL試劑四，120μL蒸餾水，2μL試劑五，44uL蒸餾水，混勻，測(cè)定620nm處吸光值，記為A測(cè)定。空白管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL試劑三，14μL試劑四，120μL蒸餾水，2μL試劑五，44μL蒸餾水，混勻，測(cè)定620nm處吸光值，記為A空白。直鏈淀粉含量計(jì)算：a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=1.755x+0.0062；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。1、依照蛋白濃度計(jì)算直鏈淀粉含量（mg/mgprot）=[（A測(cè)定A空白0.0062）×V1]÷1.755÷（V1×Cpr）=0.57×（A測(cè)定A空白0.0062）÷Cpr2、按樣本干重計(jì)算直鏈淀粉含量（mg/g干重）=[（A測(cè)定A空白0.0062）×V1]÷1.755÷（W×V1÷V2）=0.57×（A測(cè)定A空白0.0062）÷WV1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，gb.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=0.8775x+0.0062；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。1、依照蛋白濃度計(jì)算直鏈淀粉含量（mg/mgprot）=[（A測(cè)定A空白0.0062）×V1]÷0.8775÷（V1×Cpr）=1.14×（A測(cè)定A空白0.0062）÷Cpr2、按樣本干重計(jì)算直鏈淀粉含量（mg/g干重）=[（A測(cè)定A空白0.0062）×V1]÷0.8775/（W×V1÷V2）=1.14×（A測(cè)定A空白0.0062）÷WV1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL