微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)原創(chuàng)

關(guān)于微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)原創(chuàng)微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞第2頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)第3頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天一.培養(yǎng)基：1.基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽⑴碳源無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)異養(yǎng)⑵氮源無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源對(duì)

不同需要，配置供生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)“吃”什么？第4頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)2.特殊營(yíng)養(yǎng)：生長(zhǎng)因子（維生素、堿基等）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無(wú)凝固劑瓊脂分離鑒定工業(yè)生產(chǎn)細(xì)菌偏堿，真菌偏酸第5頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方(最廣泛)1000mlH2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g第6頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天5.配制原則⑴目的明確：⑵營(yíng)養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)⑶適宜的pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產(chǎn)科研第7頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、關(guān)于微生物的營(yíng)養(yǎng)，說法正確的是A、同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B、凡是碳源都能提供能量C、除水外的無(wú)機(jī)物僅提供無(wú)機(jī)鹽D、無(wú)機(jī)氮源也能提供能量答案：D2、自養(yǎng)微生物和異養(yǎng)微生物最常用的碳源分別是A、CO2和CO2B、CO2和碳酸鹽C、碳酸氫鈉和含碳有機(jī)物D、CO2和含碳有機(jī)物答案：D第8頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天一）內(nèi)容：1、對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具、培養(yǎng)基進(jìn)行3、為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在附近進(jìn)行4、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免二.無(wú)菌技術(shù)：防止外來(lái)雜菌的污染關(guān)鍵技術(shù)是什么？清潔和消毒滅菌酒精燈火焰已經(jīng)滅菌處理的材料和用具與周圍的物品接觸超凈工作臺(tái)第9頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天耐高溫需保持干燥的物品，160～170℃1～2小時(shí)接種環(huán)、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法（日常）巴氏消毒法（如：牛奶）化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌（玻璃器皿）酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121℃、15～30min二.無(wú)菌技術(shù)：防止外來(lái)雜菌的污染.二）消毒與滅菌的區(qū)別：第10頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天芽孢在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。煮沸3小時(shí)才死。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.第11頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天孢子在生物體的一定部位產(chǎn)生一種特殊的生殖細(xì)胞叫孢子。孢子的特點(diǎn)是能直接長(zhǎng)成新個(gè)體。第12頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天判斷是否需要消毒或滅菌,請(qǐng)選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思考高壓蒸汽干熱滅菌酒精擦拭第13頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天單個(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體第14頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天S型：菌落表面光滑，不被免疫系統(tǒng)識(shí)別，有多糖莢膜，使人患肺炎或小鼠得敗血癥，有毒性。R型：菌落表面粗糙，被免疫系統(tǒng)識(shí)別，沒有莢膜，無(wú)毒性。肺炎雙球菌光滑的粗糙的第15頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落不斷攪拌第16頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天倒平板約50℃防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基用手摸剛不燙手第17頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：⑴平板劃線法：菌種劃3個(gè)平板1個(gè)不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對(duì)照）外焰冷卻試管口通過火焰冷卻第18頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天問題討論1、為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？第一步劃線前灼燒目的：消滅接種環(huán)上可能存在的微生物每次劃線前灼燒目的：殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。結(jié)束時(shí)灼燒的目的：及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第19頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。第20頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量移液器第21頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天第22頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍注意：沾有酒精并灼燒第23頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天問題討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？

應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。第24頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑴平板劃線法：四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑵稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h后，觀察并記錄第25頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天五、課題成果評(píng)價(jià)

培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄第26頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天六.菌種的保藏：1.臨時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上4℃2.長(zhǎng)期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃第27頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、關(guān)于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備錯(cuò)誤的是A、操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B、將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C、待培養(yǎng)基冷卻50℃至左右時(shí)進(jìn)行倒平板D、待平板冷卻凝固約5-10min后將平板倒過來(lái)放置

4、無(wú)菌技術(shù)包括以下幾方面的敘述，其中錯(cuò)誤的是A、對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行滅菌B、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌C、未避免周圍環(huán)境微生物的污染，實(shí)驗(yàn)室操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行D、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸答案：A答案：A第28頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天5．下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是A.防止雜菌污染B.消滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D.滅菌必須在接種前解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。答案：B第29頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：滴稀釋菌液不超過0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍第30頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天第31頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天包器材第32頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天包器材第33頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天/v_show/id_XMTE2NTU5ODAw.html微生物培養(yǎng)教學(xué)視頻/v_show/id_XMjU4NTEwNjg4.html微生物介紹/v_show/id_XMTQ3ODE4MzY=.html微生物科學(xué)片/news/society/201105/edc502a8-cb2a-42b3-b8f1-29c31d3ca46a.shtml大腸桿菌第34頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天大腸桿菌大腸桿菌：是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一種細(xì)菌，周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無(wú)芽孢。分布：主要生活在大腸內(nèi)。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入