《DB32T 3762.15-2021新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范 第15部分血清血漿IgM和IgG抗體化學發(fā)光法檢測程序》

ICS13.100

C50

DB32

江蘇省地方標準

DB32/T3762.15—2021

新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范

第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁

微?；瘜W發(fā)光法檢測程序

TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detection

Part15:Serum/PlasmaIgMandIgGantibodiestestprocedurebyMCLIA

2021-12-09發(fā)布2022-01-09實施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3762.15—2021

I

DB32/T3762.15—2021

新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范

第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁微?；瘜W發(fā)光法檢測程序

1范圍

本文件規(guī)定了新型冠狀病毒血清/血漿IgM和IgG抗體磁微粒化學發(fā)光法的檢測程序。

本文件適用于新型冠狀病毒確診病例、無癥狀感染者、疑似病例、密切接觸者以及一般人群血清/

血漿樣本中新冠特異性IgM和IgG抗體磁微?；瘜W發(fā)光法檢測的實驗操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19489實驗室生物安全通用要求

WS233微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則

DB32/T3762.1新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范第1部分：生物樣本采集、運輸和保存

新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）

可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定原中華人民共和國衛(wèi)生部

3術語和定義

本文件沒有界定的術語和定義。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件。

IgG：免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG）

IgM：免疫球蛋白M（ImmunoglobulinM）

MCLIA：磁微?；瘜W發(fā)光法（MagneticChemiluminescenceEnzymeImmunoassay）

RLU：相對發(fā)光單位（RelativeLightUnit）

5原理

磁微?；瘜W發(fā)光法綜合了磁微粒載體技術和化學發(fā)光免疫檢測技術。人血清/血漿中待測的新型冠

狀病毒IgM、IgG抗體與熒光素標記的重組抗原結合，隨后加入包被著抗熒光素抗體的磁微粒，通過

抗熒光素抗體與熒光素的特異性結合使抗原抗體復合物連接在磁微粒上。在外加磁場中直接沉淀，去上

清后清洗沉淀的復合物，加入酶標抗體，形成磁微粒－抗原－抗體－酶標抗體夾心免疫復合物。再次清

洗后，加入酶促化學發(fā)光底物。底物在堿性磷酸酶作用下被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當

激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時便發(fā)出光子，形成發(fā)光反應，通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄光子能量，并通過計算

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DB32/T3762.15—2021

機處理系統(tǒng)將光能量強度在標準曲線上RLU轉換為待測抗體的濃度，樣本的RLU與其中的新型冠狀

病毒IgM、IgG抗體濃度呈正相關，從而檢測人血清/血漿中的新型冠狀病毒IgM、IgG抗體。

6實驗室生物安全防護要求

6.1實驗室資質及級別

檢測工作應在BSL-2級實驗室內進行。生物安全應遵照GB19489和WS233對生物安全2級

（BSL-2）實驗室的生物安全要求。

6.2操作人員資質及防護

實驗中的個人防護遵照GB19489和新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）。

6.3廢棄物的處理

實驗室使用過的實驗用品應遵照GB19489對廢棄物的處理要求進行無害化處理。

7準備

7.1實驗室

生物安全防護二級（BSL-2）或以上等級實驗室和相應的配套設施。

7.2儀器設備

常用儀器設備如下：

——生物安全柜

——化學發(fā)光免疫分析儀

——離心機

——移液器

——高壓鍋

——生物安全運輸箱

——水浴鍋

7.3試劑

常用試劑如下：

——磁性顆粒-抗熒光素抗體

——熒光素標記新型冠狀病毒重組抗原

——堿性磷酸酶標記鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體

——清洗液

——底物液

——樣本稀釋液

8樣本采集、要求、保存和運輸

8.1樣本采集

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DB32/T3762.15—2021

血清/血漿樣本按照DB32/T3762.1中5.3的要求采集。

8.2樣本要求

出現嚴重黃疸、溶血、脂血和微生物污染的樣本，均不可進行檢測。

8.3樣本保存

血清/血漿樣本可于2℃～8℃條件下保存3d、-20℃及以下條件下可長期保存，并避免反復凍

融。用于存放樣本的冰箱應當專用。

8.4樣本運輸

按照可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定、DB32/T3762.1中6.1、

6.2的要求。

9檢測方法

9.1血清/血漿IgM抗體磁微?；瘜W發(fā)光法

9.1.1試劑制備

將新型冠狀病毒陰陽性對照和底物液在室溫18℃~25℃下平衡30min。用純水將清洗液稀釋到

工作濃度。若清洗液有結晶，可將清洗液置于室溫或37℃待結晶溶解后再進行稀釋。

9.1.2磁微?；瘜W發(fā)光法反應體系和反應程序

取1mL樣本稀釋液，加入20μL樣本（至少15μL），用漩渦混勻儀混勻5s，靜止15min后

開始實驗。根據實驗需要，如質量控制，設置陰性、陽性對照各2管及處理后樣本若干。分別加入50

μL磁性顆粒-抗熒光素抗體、75μL處理后樣本或陰性對照/陽性對照、50μL熒光素標記新型冠狀病

毒重組抗原、75μL堿性磷酸酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體。反應時間35min；完成第二次清洗后每

管加入底物液200μL，避光檢測，反應5s讀數。磁微?；瘜W發(fā)光法反應體系的總體積可根據不同廠

家、型號的化學發(fā)光儀做相應調整。

9.1.3結果分析

根據RLU自動計算Cutoff值，樣本檢測的結果以S/CO值進行判定：

a)陰性（－）：S/CO＜1.000，待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgM抗體；

b)陽性（＋）：S/CO≥1.000，待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgM抗體。

9.1.4質量控制

根據不同廠家、型號的化學發(fā)光儀和配套試劑的要求，陽性、陰性對照S/CO應在規(guī)定的范圍內。

以上要求不符合，應重新進行試驗，重新進行的試驗應從試劑制備開始。

9.1.5結果表述

當質量控制符合要求：

a)S/CO＜1.000，結果表述為“待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgM抗體”。

b)S/CO≥1.000，結果表述為“待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgM抗體”。

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DB32/T3762.15—2021

9.2血清/血漿IgG抗體磁微?；瘜W發(fā)光法

9.2.1試劑制備

將新型冠狀病毒陰陽性對照和底物液在室溫18℃~25℃下平衡30min。用純水將清洗液稀釋到

工作濃度。若清洗液有結晶，可將清洗液置于室溫或37℃待結晶溶解后再進行稀釋。

9.2.2磁微?；瘜W發(fā)光法反應體系和反應程序

取1ml樣本稀釋液，加入20μL樣本（至少15μL），用漩渦混勻儀混勻5s，靜止15min后

開始實驗。根據實驗需要，在質量控制時，設置陰性、陽性對照各2管及處理后樣本若干。分別加入

50μL磁性顆粒-抗熒光素抗體、75μL處理后樣本或陰性對照/陽性對照、50μL熒光素標記新型冠狀

病毒重組抗原、75μL堿性磷酸酶標記鼠抗人IgG單克隆抗體。反應時間35min；完成第二次清洗后

每管加入底物液200μL，避光檢測，反應5s讀數。磁微粒化學發(fā)光法反應體系的總體積可根據不同

廠家、型號的化學發(fā)光儀做相應調整。

9.2.3結果判讀

根據RLU自動計算Cutoff值，樣本檢測的結果以S/CO值進行判定

a)陰性（－）：S/CO＜1.000，待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgG抗體；

b)陽性（＋）：S/CO≥1.000，待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgG抗體。

9.2.4質量控制

根據不同廠家、型號的化學發(fā)光儀和配套試劑的要求，陽性、陰性對照S/CO應在規(guī)定的范圍內。

以上要求不符合，應重新進行試驗，重新進行的試驗應從試劑制備開始。

9.2.5結果表述

當質量控制符合要求時，