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文檔簡介

化學(xué)制藥工藝柱層析技術(shù)又稱為柱色譜技術(shù),是色譜法中使用最廣泛的一種分離提純方法。當(dāng)被分離物質(zhì)不能以重結(jié)晶純化時(shí),柱層析往往是最有效的分離手段。柱層析由兩相組成,在圓柱形管中填充不溶性基質(zhì),形成固定相,洗脫溶劑為流動(dòng)相。(二)柱層析吸附色譜法系利用吸附劑對混合物中各組分吸附能力的差異,實(shí)現(xiàn)對組分的分離。混合物在吸附色譜柱中移動(dòng)速度和分離效果取決于固定相對混合物中各組分的吸附能力和洗脫劑對各組分的解吸能力的大小。物質(zhì)與固定相之間吸附能力與吸附劑的活性以及物質(zhì)的分子極性相關(guān)。1.吸附色譜法(1)吸附劑的活性對色譜行為的影響:硅膠和氧化鋁是最為常見的固定相吸附劑。(2)被分離物質(zhì)對色譜行為的影響:通常來講,分子中所含極性基團(tuán)越多,極性基團(tuán)越大,化合物極性越強(qiáng),吸附能力越強(qiáng)。常見基團(tuán)的吸附能力順序如下:一Cl,-Br,-1<-C=C-<-OCH3<-COOR<-CO-<-CHO<-SH<-NH2<-OH<-COOH。(3)流動(dòng)相對色譜行為的影響:流動(dòng)相的洗脫作用實(shí)質(zhì)上是洗脫劑分子與樣品組分競爭占據(jù)吸附劑表面活性中心的過程。常用溶劑的極性大小順序?yàn)槭兔眩辑h(huán)己烷<四氯化碳<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮乙醇<水。離子交換色譜系利用被分離組分與固定相之間離子交換能力的不同實(shí)現(xiàn)分離純化。理論上講,凡是在溶液中能夠電離的物質(zhì)都可以用離子交換色譜分離,因此,它不僅可用于無機(jī)離子混合物的分離,也可用于有機(jī)鹽、氨基酸、蛋白質(zhì)等有機(jī)物和生物大分子的分離純化,應(yīng)用范圍廣泛。2.離子交換色譜法(1)使用柱層析分離的關(guān)鍵是發(fā)展一種能夠使產(chǎn)物和雜質(zhì)之間洗脫時(shí)間最大化的層析系統(tǒng)。最優(yōu)的條件是雜質(zhì)在最初的位置基本不動(dòng)而產(chǎn)品有較好的流動(dòng)性,只需少量的溶劑即可分離產(chǎn)物與雜質(zhì)。3.使用柱層析應(yīng)注意的問題(2)為了加快色譜操作,用惰性氣體對色譜柱加壓,或者在柱的收集端進(jìn)行抽氣。(3)制備型色譜需要放置在通風(fēng)良好的位置,當(dāng)大量使用易

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