藥物分析學(xué) 第六章 藥物的含量測(cè)定

總論第六章藥物的含量測(cè)定藥物分析學(xué)目錄第一節(jié)概述1第二節(jié)容量分析2第三節(jié)分光光度法3第四節(jié)色譜法4第五節(jié)含量測(cè)定方法驗(yàn)證52本章學(xué)習(xí)要求熟悉藥物及其制劑的含量限度表示方法掌握容量分析滴定反應(yīng)原理與含量計(jì)算方法；熟悉常用滴定劑、相應(yīng)的基準(zhǔn)物質(zhì)和指示劑掌握HPLC法和GC法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、含量計(jì)算；熟悉常用HPLC、GC色譜柱、檢測(cè)器、條件的選擇掌握UV法測(cè)定藥物含量的原理與計(jì)算方法；熟悉紫外-可見分光光度儀的檢定方法；了解熒光分光光度法和原子吸收分光光度法測(cè)定藥物含量的原理與應(yīng)用熟悉藥物含量測(cè)定分析方法的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)3第一節(jié)概述藥物的含量是藥物質(zhì)量的主要指標(biāo)含量測(cè)定（assay）——理化方法測(cè)定效價(jià)測(cè)定（assayofpotency）——生物學(xué)方法或酶學(xué)方法測(cè)定化學(xué)原料藥的含量測(cè)定：強(qiáng)調(diào)測(cè)定結(jié)果的精密度制劑的含量測(cè)定：偏重方法的選擇性4藥典對(duì)藥物的含量限度的表示方法原料藥：以%表示（一般以干燥品計(jì)）

凡未規(guī)定上限的，藥典凡例中規(guī)定，其含量上限不得超過101.0%①按原料藥本身形式計(jì)算其含量②由于藥物組成不定，需以另一種穩(wěn)定形式計(jì)算含量zhuo5舉例地塞米松磷酸鈉

——按干燥品計(jì)算，含C22H28FNaO8P應(yīng)為96.0%-102.0%。硫酸慶大霉素

——按無水物計(jì)算，每1mg的效價(jià)不得少于590慶大霉素單位。阿司匹林——含C9H6O4不得少于99.5%

氫氧化鋁——含氫氧化鋁按Al2O3計(jì)算，不得少于48.0%。6制劑的含量限度表示方法：①按標(biāo)示量計(jì)算②直接用%含量規(guī)定范圍③以重量規(guī)定含量范圍 標(biāo)示量=規(guī)格量=處方量例：維生素B1注射液含維生素B1

應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%～105.0%例：復(fù)方碘溶液含I應(yīng)為4.50%～5.50%

含KI應(yīng)為9.5%～10.5%例：復(fù)方磺胺甲噁唑片磺胺甲噁唑0.360～0.440g/片甲氧芐氨嘧啶72.0～88.0mg/片7常用含量測(cè)定方法(2005年版ChP）儀器法容量法其他法HPLC29.4%非水法15.3%生物學(xué)8.1%VIS-UV21%酸堿法7.5%重量法0.8%旋光0.5%銀量法3.4%原子吸收0.3%碘量法3.3%GC0.3%EDTA法2.9%熒光0.1%亞硝酸鈉法2.1%其他容量法5%8一、含量計(jì)算原料藥及以%表示的制劑

直接滴定法樣品%=V×F×T/W×100%滴定度T——與1ml規(guī)定（理論）濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)物的mg數(shù).T=（M被測(cè)物

/a）×mol/L標(biāo)準(zhǔn)液（理論）a為與1摩爾被測(cè)物相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液摩爾數(shù)。第二節(jié)容量分析法濃度校正因子F=N實(shí)/N理9剩余滴定法樣品%=（V空白－V樣

)×F×T/W×100%方法：樣品+標(biāo)準(zhǔn)液1（過量定量）剩余的標(biāo)準(zhǔn)液1+標(biāo)準(zhǔn)液2回滴定→V2樣空白+標(biāo)準(zhǔn)液1（同樣量）剩余的標(biāo)準(zhǔn)液1+標(biāo)準(zhǔn)液2回滴定→V2空白10片劑：V×F×T/W××100%針劑：

V×F×T/W××100%以重量/片計(jì)的計(jì)算公式

V×F×T/W×平均片重=重量/片相當(dāng)于標(biāo)示量%的計(jì)算公式平均片重標(biāo)示量標(biāo)示量1片粉重注射液體積11例1異煙肼含量測(cè)定稱取異煙肼約0.25g，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取25mL，加水50mL與鹽酸20mL，加甲基橙指示液1滴，用溴酸鉀滴定液(0.01667mol/L)緩緩滴定至粉紅色消失。已知：異煙肼取樣0.2545g，消耗溴酸鉀滴定液(F=1.005)18.30mL，每1mL溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當(dāng)于3.429mg異煙肼。樣品%=V×F×T/W×100%

18.30×1.005×3.4290.2545/100×25×1000

×100%=99.1%=12取本品約0.1g,精密稱定（0.1022g)，置250ml碘量瓶中，加水10mL，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25mL，再加鹽酸5mL，立即密塞并振搖1分鐘，暗處?kù)o置15分鐘后，微開瓶塞，加碘化鉀試液10mL，立即密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。已知：樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）15.73mL，空白試驗(yàn)消耗23.21mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于13.01mg的司可巴比妥鈉，硫代硫酸鈉滴定液F=1.038。例2司可巴比妥鈉的含量測(cè)定：樣品%=（V空白－V樣

)×F×T/W×100%

(23.21-15.73)×1.038×13.010.1022×1000

=98.8%×100%=13思考題溴滴定液是如何配制的？在本方法中需要標(biāo)定嗎？在滴定反應(yīng)中，加鹽酸后溴滴定液起了怎樣的化學(xué)反應(yīng)？空白試驗(yàn)在本方法中起什么作用？為什么要待近終點(diǎn)時(shí)加入淀粉指示液？滴定度T=13.01mg的由來？14取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于葡萄糖酸鈣1g），置100ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加水75ml,加氫氧化鈉試液15ml，用EDTA滴定液（0.05mol/L）滴定。每1mLEDTA滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于22.42mg的C12H22CaO14·H2O。已知：20片重12.0640g，取片粉1.2058g，消耗EDTA滴定液(0.0501mol/L)11.22mL，規(guī)格0.5g/片例3葡萄糖酸鈣片含量測(cè)定規(guī)定取樣量/規(guī)格=應(yīng)稱取片粉/平均片重可稱取范圍：應(yīng)稱取量

10%11.22×22.42×(0.0501/0.05)12.064/201.2058×25/100

×10000.5

×100%=100.9%×1315二、酸堿滴定法滴定類型——多為強(qiáng)酸強(qiáng)堿滴定弱堿弱酸藥物，以鹽酸、硫酸、氫氧化鈉為滴定劑溶劑——根據(jù)藥物的酸堿性、溶解度、穩(wěn)定性等性質(zhì)，選用水、中性乙醇等為溶劑應(yīng)用——以水為溶劑：枸櫞酸以中性乙醇為溶劑：芳酸類、磺酰胺類藥物指示劑、滴定劑——酚酞，氫氧化鈉滴定液16三、非水溶液滴定法本法主要用于測(cè)定有機(jī)堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或有機(jī)酸鹽，以及有機(jī)酸堿金屬鹽類藥物的含量，也用于測(cè)定某些有機(jī)弱酸的含量藥典收載了兩種方法：第一法為測(cè)定有機(jī)弱堿及其鹽類第二法為測(cè)定有機(jī)弱酸及其鹽類17常用非水溶劑種類溶劑種類最常用溶劑特性酸性溶劑冰醋酸，醋酐，甲酸可增強(qiáng)有機(jī)弱堿的相對(duì)堿度堿性溶劑乙二胺、乙醇胺、二甲基甲酰胺可增強(qiáng)有機(jī)弱酸的相對(duì)酸度兩性溶劑甲醇、乙醇兼有酸堿兩性，用作不太弱的酸堿物質(zhì)的介質(zhì)惰性溶劑苯，三氯甲烷，二氧六環(huán)無酸堿性，常與上述溶劑混合使用，增加滴定突躍和試樣的溶解性18第一法（非水堿量法）精密稱取供試品適量[約消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）8mL]，加冰醋酸10～30mL使溶解，加各藥品項(xiàng)下規(guī)定的指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。終點(diǎn)顏色應(yīng)以電位滴定時(shí)的突躍點(diǎn)為準(zhǔn)，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正影響因素：溫度、水分、溶劑的選擇、指示終點(diǎn)方法以及被測(cè)物酸根等19溫度影響滴定與標(biāo)定時(shí)的溫度差別：超過10℃，則應(yīng)重新標(biāo)定若未超過10℃，根據(jù)公式校正冰醋酸的膨脹系數(shù)t1為滴定時(shí)溫度t0為標(biāo)定時(shí)溫度N0為t0時(shí)高氯酸滴定液的濃度N1為t1時(shí)高氯酸滴定液的濃度20水分影響反應(yīng)體系中不應(yīng)有水，因?yàn)樗仁琴|(zhì)子的受體，又是質(zhì)子的供體，可與弱酸弱堿發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)，影響終點(diǎn)判斷21溶劑選擇對(duì)于不同堿性的雜環(huán)類藥物只有選擇合適的溶劑和指示終點(diǎn)方法才能獲得滿意的滴定結(jié)果雜環(huán)類藥物Kb10-8～

10-1010-10～10-12<10-12合適的溶劑冰醋酸冰醋酸-醋酐醋酐冰醋酸中加入不同量甲酸也能增大突躍范圍22常用指示劑（結(jié)晶紫）結(jié)晶紫為多元弱堿，在不同pH中顯示不同的顏色變化，滴定不同強(qiáng)度的堿性藥物時(shí)終點(diǎn)顏色不同滴定堿性較強(qiáng)的藥物時(shí)，終點(diǎn)以藍(lán)色或藍(lán)綠色為主滴定堿性較弱的藥物時(shí)，一般以綠色為終點(diǎn)滴定更弱的堿性藥物時(shí)，終點(diǎn)顏色為黃色在確定指示劑的終點(diǎn)顏色變化時(shí)應(yīng)以電位法為對(duì)照

黃→黃綠→綠→藍(lán)綠→藍(lán)→藍(lán)紫→紫pH低---------------------------------→高堿式色酸式色23各種酸根的影響冰醋酸溶液中各酸根的酸性強(qiáng)弱如下：高氯酸﹥

氫溴酸﹥硫酸﹥鹽酸﹥

硫酸氫根﹥硝酸﹥磷酸、有機(jī)酸采取措施：HX——加HgAc2→HgX2

H2SO4——生物堿的硫酸鹽通常為2分子生物堿與1分子硫酸成鹽,可直接滴定至HSO-4

（注意摩爾比）HNO3

——可氧化指示劑，改用電位法磷酸、有機(jī)酸——無需處理，直接滴定24應(yīng)用胺類藥物：鹽酸利多卡因，重酒石酸去甲腎上腺素，鹽酸克侖特羅、硫酸沙丁胺醇等含氮雜環(huán)類藥物：氫溴酸東莨菪堿、硫酸奎寧、硝酸毛果蕓香堿、馬來酸氯苯那敏等；維生素類藥物：維生素B125第二法（酸量法）滴定液——甲醇鈉、甲醇鋰、氫氧化四丁基胺溶劑——二甲基甲酰胺注意——滴定過程中應(yīng)防止溶劑和堿滴定液吸收大氣中的二氧化碳和水蒸氣，以及滴定液中溶劑的揮發(fā)應(yīng)用——異維A酸、芐氟噻嗪、環(huán)吡酮等26銀量法碘量法和溴量法亞硝酸鈉法絡(luò)合滴定法直接滴定、剩余滴定、置換滴定27費(fèi)休氏水分測(cè)定法（KarlFischerTitration）

本法為非水氧化還原滴定反應(yīng)，采用的滴定液稱費(fèi)休氏試液，由碘、二氧化硫、吡啶和無水甲醇組成。利用碘氧化二氧化硫時(shí)需要一定的水分參加反應(yīng)反應(yīng)可逆，用吡啶吸收生成的HI和SO3，形成氫碘酸吡啶和硫酸酐吡啶。但硫酸酐吡啶不穩(wěn)定，無水甲醇可使其轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的甲基硫酸氫吡啶28方法與計(jì)算測(cè)定方法：精密稱取供試品適量（約消耗費(fèi)休氏試液1

5ml），除另有規(guī)定外，溶劑為無水甲醇，用水分測(cè)定儀直接測(cè)定?；?qū)⒐┰嚻分酶稍锏木呷Ｆ恐校尤軇?

5ml，在不斷振搖（或攪拌）下用費(fèi)休氏試液滴定至溶液由淺黃色變?yōu)榧t棕色，或用永停滴定法指示終點(diǎn)，另作空白試驗(yàn)，按下式計(jì)算：供試品中水分(%)=（VaVb）FW

100%本法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，適用于受熱易被破壞的藥物的水分測(cè)定，如抗生素類藥物的水分測(cè)定2629注意事項(xiàng)：（1）每1ml新配的費(fèi)休氏試液約相當(dāng)于5mg的水，由于試液不穩(wěn)定，逐漸變質(zhì)，因此費(fèi)休氏試液需在臨用前1h內(nèi)標(biāo)定。一般F值應(yīng)在4.0mg/ml以上，當(dāng)F值降低到3.0mg/ml以下時(shí)，滴定終點(diǎn)不敏銳，不宜再用。（2）本法測(cè)定結(jié)果的精確度取決于多種因素，如試劑成分的相對(duì)濃度、溶解樣品的溶劑性質(zhì)、操作技術(shù)、空氣濕度等，尤其是測(cè)定系統(tǒng)中的水分。因此必須嚴(yán)格規(guī)范操作，所用儀器必須干燥，并能避免空氣中水分的侵入，操作宜在干燥處進(jìn)行，并注意避光，整個(gè)操作應(yīng)迅速，不應(yīng)在陰雨天或空氣濕度太大時(shí)進(jìn)行測(cè)定。30第三節(jié)光譜分析紫外分光光度法（一）儀器校正與檢定

波長(zhǎng)校正：用汞燈中的較強(qiáng)譜線或儀器中氚燈的486.02nm、656.10nm譜線進(jìn)行校正吸收度的準(zhǔn)確度檢定：測(cè)定重鉻酸鉀的硫酸溶液在規(guī)定波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)進(jìn)行檢定雜散光的檢查：用碘化鈉，亞硝酸鈉溶液測(cè)定規(guī)定波長(zhǎng)處的透光率（二）對(duì)溶劑的要求

——以空氣為空白（空白光路中不置任何物質(zhì)）測(cè)定溶劑的吸光度（使用波長(zhǎng)附近應(yīng)符合規(guī)定）31（三）測(cè)定法測(cè)定波長(zhǎng)核對(duì)（規(guī)定波長(zhǎng)

2nm內(nèi)），并以吸光度最大波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)吸收度讀數(shù)范圍（0.3

0.7）同批溶劑為空白試驗(yàn)（校正比色皿和空白溶劑的吸收）測(cè)定方法吸收系數(shù)法對(duì)照品比較法計(jì)算分光光度法比色法32百分吸收系數(shù)法A=E1%cm×C×LC（%）=A/E1%cm

樣品%=F=稀釋倍數(shù)和濃度換算因子，W=取樣量A×FE1%cm×WE值的大小反映了藥物對(duì)某一波長(zhǎng)光的吸收能力，也反映了測(cè)定反應(yīng)的靈敏度。采用E法測(cè)定含量時(shí)，一般取三位有效數(shù)字表示，E值小于100的一般不宜采用330.390×10×100393×0.0105=含量%×100例1己酸孕酮稱取己酸孕酮0.0105g,加無水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加無水乙醇稀釋至刻度,置1cm吸收池內(nèi)進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)下列已知條件,求出按干燥品計(jì)算的己酸孕酮百分含量。A=0.390,E1%1cm=393×100%34吸收系數(shù)（E1%cm）測(cè)定方法精密稱取被測(cè)物對(duì)照品適量（雙份），加溶劑制成一定濃度的溶液，使吸光度在0.6～0.8之間精密吸取適量，用同批溶劑將溶液稀釋一倍在規(guī)定波長(zhǎng)分別測(cè)定高低濃度的溶液，計(jì)算吸收系數(shù)（E）值，要求：在五種不同型號(hào)的紫外儀上測(cè)定同一臺(tái)儀器測(cè)定二份間結(jié)果的偏差應(yīng)不超過1.0%各臺(tái)儀器測(cè)得的E值，RSD應(yīng)不超過1.5%取平均值為該藥物的吸收系數(shù)（注明測(cè)定時(shí)溫度）35對(duì)照品比較法A樣/A對(duì)

=C樣/C對(duì)樣品%=A樣/A對(duì)

×C對(duì)×F/W×100%F=稀釋倍數(shù)，W=取樣量雙波長(zhǎng)法，差示法，熒光法，均可應(yīng)用此公式，以△A，熒光強(qiáng)度代替吸收度A36例2鹽酸嗎啡片與注射液本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸嗎啡10mg)置100ml量瓶中，加水溶解至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液15ml，置50ml量瓶中，加0.2mol/L氫氧化鈉25ml，用水稀釋至刻度，搖勻，UV法測(cè)定。另取嗎啡對(duì)照品適量，精密稱定，用0.2mol/L氫氧化鈉稀釋至每ml中約含20ug的溶液，同法測(cè)定。計(jì)算，結(jié)果乘以1.317，即得C17H19NO3·HCl·3H2O的含量.(規(guī)格5mg)A樣×C對(duì)×50×100×1.317×片重

A對(duì)×15×取樣×1000×5×100%1.317=M

3H2O/M=375.85/285.3437方法的特點(diǎn)與影響因素特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、靈敏（10-4～10-7g/ml）、有一定專屬性和準(zhǔn)確度（相對(duì)誤差2%左右），應(yīng)用范圍廣（制劑含量、溶出度、含量均勻度測(cè)定），儀器價(jià)廉易普及影響因素：溶劑、溶液pH值普魯卡因去氧腎上腺素38（三）計(jì)算分光光度法雙波長(zhǎng)分光光度法（復(fù)方磺胺類藥物的測(cè)定）三點(diǎn)校正法（維生素A的）解線性方程組法等使用時(shí)應(yīng)注意，當(dāng)在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定吸光度時(shí)，波長(zhǎng)的微小變化可對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響

39（四）比色法在藥物分析中應(yīng)用的比色法：酸性染料比色法（含氮堿性藥物如：硫酸阿托品片、氫溴酸東莨菪堿片的測(cè)定）四氮唑比色法、異煙肼比色法和Kober反應(yīng)法（甾體激素類藥物）蛋白質(zhì)的雙縮脲反應(yīng)（硫酸軟骨素的測(cè)定）總黃酮、總生物堿的測(cè)定（中藥制劑）40二、熒光分光光度法（FluorescenceSpectrophotometry）

熒光法測(cè)定的是物質(zhì)分子的發(fā)射光譜。在一定條件下，物質(zhì)的濃度與其熒光（也稱發(fā)射光）強(qiáng)度成正比關(guān)系，可用于定量分析測(cè)定方法

——對(duì)照品對(duì)照法

Cx=Rx－RxbRr－Rrb×Cr熒光分析中，藥物的濃度與相應(yīng)的熒光讀數(shù)之間的線性范圍較窄，故(Rx－Rxb)/(Rr－Rrb)應(yīng)在0.5～2，如超出此范圍，應(yīng)調(diào)節(jié)溶液濃度后再測(cè)定41熒光分析法的特點(diǎn)靈敏（檢測(cè)限可達(dá)10-10～10-12g/ml）專屬（

ex和

em）適于低濃度溶液分析。濃度過大，熒光會(huì)發(fā)生“自熄滅”現(xiàn)象，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度與溶液濃度不成正比干擾因素多，如溶劑種類與純度、溶液pH、溫度，共存物質(zhì)、溶液中的懸浮物、玻璃儀器的潔凈度等，因此必須做空白試驗(yàn)常用基準(zhǔn)溶液校正儀器，如：硫酸奎寧的稀硫酸溶液（藍(lán)色熒光）熒光素鈉水溶液（黃綠色熒光）羅丹明B水溶液（紅色熒光）42三、原子吸收分光光度法（AtomicAbsorptionSpectrophotometry，AAS）原理——由待測(cè)元素作為陰極的空心陰極燈發(fā)出的特征譜線，通過供試品經(jīng)原子化產(chǎn)生的原子蒸氣時(shí)，被蒸氣中待測(cè)元素的基態(tài)原子所吸收，測(cè)定該特征譜線輻射光強(qiáng)度減弱的程度，求出供試品中待測(cè)元素的含量遵循一般分光光度法的吸收定律。用于呈原子狀態(tài)的金屬元素和部分非金屬元素的測(cè)定含量測(cè)定方法采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)加入法43標(biāo)準(zhǔn)曲線法制備含待測(cè)元素的對(duì)照品溶液至少3份，濃度依次遞增，并分別加入各品種項(xiàng)下制備供試品溶液的相應(yīng)試劑，同時(shí)以相應(yīng)試劑制備空白對(duì)照液依次測(cè)定空白對(duì)照液和各濃度對(duì)照品溶液的吸光度，記錄讀數(shù)（3次），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線制備供試品溶液，測(cè)定吸光度，取3次讀數(shù)的平均值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的濃度，計(jì)算元素的含量44標(biāo)準(zhǔn)加入法取同體積按規(guī)定制備的供試品溶液4份，分別置4個(gè)同體積的量瓶中除1號(hào)量瓶外，其他量瓶分別精密加入不同濃度的待測(cè)元素對(duì)照品溶液,分別用去離子水稀釋至刻度制成從零開始遞增的一系列溶液供試液取用量中待測(cè)元素的含量45AAS法的局限性主要是工作曲線的線性范圍較窄，一般為1個(gè)數(shù)量級(jí)；每測(cè)一種元素需要更換1個(gè)燈，對(duì)于多種元素同時(shí)測(cè)定時(shí)非常不便4246第四節(jié)色譜分析一、HPLC法根據(jù)固定相與流動(dòng)相的極性大小，分為：

NP-HPLC——以吸附機(jī)理為主

RP-HPLC——以分配機(jī)理為主RP-HPLC法適合于中等極性或非極性的弱酸、弱堿和中性化合物的分離分析絕大部分藥物均可用RP-HPLC法進(jìn)行分析47色譜柱與流動(dòng)相RP-HPLC色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS或C18、C8柱、氨基柱、氰基柱等流動(dòng)相：甲醇-水（或緩沖鹽）、乙腈-水（或緩沖鹽）、四氫呋喃-水（或緩沖鹽）（過濾脫氣）洗脫力強(qiáng)弱依次為四氫呋喃

乙腈

甲醇

水化學(xué)鍵合固定相適用pH2

8的流動(dòng)相；C18鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展?fàn)顟B(tài)，故流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例應(yīng)不低于5%，否則C18鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值的變化，造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定用過緩沖鹽或酸堿流動(dòng)相后，色譜柱必須用低濃度甲醇液沖洗，以除去酸堿鹽，然后再用甲醇沖洗48色譜條件選擇調(diào)節(jié)流動(dòng)相中有機(jī)溶劑比例可調(diào)整被測(cè)物的保留時(shí)間，近似規(guī)則：流動(dòng)相中有機(jī)溶劑降低10%，溶質(zhì)的容量因子約增加3倍40%甲醇的強(qiáng)度

33%乙腈

23%四氫呋喃也可用三種、四種混合溶劑作為流動(dòng)相例如

×49NP-HPLCNP-HPLC——硅膠柱流動(dòng)相溶劑有：正己烷-異丙醇；正己烷-乙醇；正己烷-二氯甲烷等洗脫力強(qiáng)弱依次為乙醇

異丙醇

二氯甲烷

正己烷正

反相色譜相互轉(zhuǎn)換時(shí)，須用過渡溶劑依次沖洗如由反相→正相時(shí)，依次用甲醇

異丙醇

正己烷沖洗而由正相→反相時(shí)，則以反方向進(jìn)行沖洗50檢測(cè)器選擇性檢測(cè)器紫外、二極管陣列（DAD）、熒光、電化學(xué)響應(yīng)值與待測(cè)液濃度有關(guān)，還與化合物結(jié)構(gòu)有關(guān)通用型檢測(cè)器示差折光、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)所有的化合物均有響應(yīng)更專屬、更靈敏的檢測(cè)器——質(zhì)譜不同檢測(cè)器對(duì)流動(dòng)相的要求不同，如紫外檢測(cè)器應(yīng)考慮有機(jī)溶劑的截止使用波長(zhǎng)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器不允許使用含不揮發(fā)鹽組分的流動(dòng)相51柱效分離度拖尾因子重復(fù)性取對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD應(yīng)小于2.0%(T=0.95～1.05)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)的精密度：每次開機(jī)后，首先要做的日常工作，不能作為分析方法學(xué)研究中的精密度試驗(yàn)52色譜參數(shù)測(cè)量為滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，可以改變一些條件，如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、組成比例、柱溫等，但不能改變固定相種類，流動(dòng)相組成和檢測(cè)器類型53測(cè)定方法與應(yīng)用定量方法——內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法HPLC法是藥物制劑、多組分樣品分析的首選方法，是各國(guó)藥典收載的方法中應(yīng)用最廣的方法在原料藥的含量測(cè)定中，HPLC法主要用于多組分抗生素或生化藥品，或因所含雜質(zhì)的干擾測(cè)定，而常規(guī)方法又難以分離或分離手段繁雜的化學(xué)品種。如：慶大霉素的組分測(cè)定，

-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類等抗生素的含量測(cè)定甾體激素類藥物的含量測(cè)定54例醋酸氫化可的松的含量測(cè)定取對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇定量稀釋成每1mL中約含0.35mg的溶液。精密量取該溶液和內(nèi)標(biāo)溶液（0.30mg/mL炔諾酮甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10

L注入液相色譜儀。另取本品適量，同法測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。已知：對(duì)照品取樣36.2mg，樣品取樣35.5mg，測(cè)得對(duì)照液中醋酸氫化可的松和內(nèi)標(biāo)的峰面積分別為5467824和6125843，樣品液中兩者的峰面積分別為5221345和6122845，求本品含量？5221345/61228455467