藥物的含量測(cè)定的方法與驗(yàn)證

藥物的含量測(cè)定的方法與驗(yàn)證第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)第二節(jié)樣品分析的前處理第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證內(nèi)容：練習(xí)與思考第2頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天基本要求

一、掌握測(cè)定藥物含量的容量、光譜和色譜分析法，滴定度與含量計(jì)算，色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的內(nèi)容、要求及相關(guān)計(jì)算。藥物分析方法驗(yàn)證與內(nèi)容。二、熟悉定量分析樣品的前處理方法。

第3頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)定量分析方法的分類和特點(diǎn)測(cè)定藥物的含量是評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要手段，其測(cè)定方法多種多樣，而容量分析法、光譜法和色譜法是中國(guó)藥典收載最多的方法。一般而言：化學(xué)原料藥的含量測(cè)定，首選容量分析法

藥物制劑的含量測(cè)定，多采用色譜分析法藥物制劑的定量檢查，選用光譜分析法第4頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.1特點(diǎn)：根據(jù)滴定液的濃度和等當(dāng)點(diǎn)（滴定誤差）時(shí)消耗的滴定液體積，計(jì)算被測(cè)藥物的含量。容量分析通常用于測(cè)定高含量或中含量組分，即被測(cè)組分的含量在1％以上，容量分析法比較準(zhǔn)確，一般情況下相對(duì)誤差可達(dá)0.2％以下。容量分析法操作簡(jiǎn)便、快速、比較準(zhǔn)確，所用儀器普通易得，在藥品檢驗(yàn)工作中具有很大的實(shí)用價(jià)值。

第一節(jié)定量分析方法的分類和特點(diǎn)一、

容量分析法第5頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

1.2計(jì)算1.滴定度：指每1ml藥典規(guī)定摩爾濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量。2.滴定度（T）的計(jì)算：在容量分析中，被測(cè)藥物（B）與滴定液（T1）之間都按一定的摩爾比進(jìn)行反應(yīng)的，反應(yīng)可表示為：aT1+bB→產(chǎn)物

ab

T(mg/mL)=m×b/a×M

實(shí)際滴定度T’＝T×FF=實(shí)際摩爾濃度/藥典規(guī)定的摩爾濃度第6頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.含量的計(jì)算：在測(cè)定藥物含量時(shí)，常用直接滴定法和回滴定法（剩余滴定法）。（1）直接滴定法：W——供試品的稱取量；mg；V——消耗的滴定液體積，ml；T——藥典規(guī)定的滴定度，

mg/ml；F——校正因數(shù)

含量(％)＝V×T’/W

×100%

＝V×T×F/W×100%第7頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）間接滴定法：包括生成物滴定法和剩余量滴定法。1）生成物滴定法：

指被測(cè)藥物D與化合物A作用，定量生成化合物B，再用滴定液T滴定化合物B。計(jì)算公式同直接法。滴定度計(jì)算時(shí)考慮D/B,B/T之間的關(guān)系P146示例4-3第8頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天2）剩余量滴定法（回滴定法）加入定量過量的滴定液T1，使其與被測(cè)藥物定量反應(yīng)，待反應(yīng)完全后，再用滴定液T2回滴反應(yīng)中剩余的滴定液T1。

t11T1+bD→產(chǎn)物1+剩余T1（D與T1反應(yīng)）

t2T2+t12T1→產(chǎn)物2

（T2回滴T1）①

不做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算方法計(jì)算公式1：含量(％)＝（VT1×FT1–VT2×FT2)×T1/W

×100%

注意：T1與T2的濃度是相當(dāng)?shù)牡?頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天②做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算方法含量(％)＝（VT20–VT2S)×FT2×T1/W

×100%

W——供試品的稱取量mgVT20

——空白實(shí)驗(yàn)時(shí)消耗滴定液T2的體積mL

VT2S——樣品測(cè)定時(shí)消耗滴定液T2的體積mL

FT2——滴定液T2的濃度校正因數(shù)

T1——藥典規(guī)定的滴定液T1滴定度，mg/mL第10頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

二、光譜分析法

（一）紫外-可見分光光度法（200nm～760nm)

①靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml～10-7g/ml

1.特點(diǎn)②準(zhǔn)確度高，RSD（%）為2%～5%

③儀器價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，易普及

④應(yīng)用廣泛。許多化合物都可采用

2.朗伯-比耳定律

A=ECL吸收系數(shù)(E)用摩爾吸收系數(shù)(ε)或百分吸收系數(shù)(E1%1cm)兩種方式表示。兩者關(guān)系為：E1%1cm＝ε×100/ME1%1cm：指在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度(C)為1％(W/V)，L＝1cm時(shí)的吸收度。第11頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.儀器校正和檢定（1）波長(zhǎng)：

波長(zhǎng)校正用汞燈中較強(qiáng)譜線237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm與576.96nm或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm進(jìn)行校正。（2）吸收度的檢定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液定容至1000ml

波長(zhǎng)(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

E1%1cm124.5144.048.62106.6

第12頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）雜散光檢查：

試劑濃度(g/ml)測(cè)定波長(zhǎng)透光率(%)

NaI1.00220nm＜0.8NaNO25.00340nm＜0.8（4)對(duì)溶劑的要求:220～240nm241～250nm251～300nm300nm以上溶劑+吸收池A＜0.41＜0.20＜0.10＜0.05第13頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天(5)測(cè)定法要求供試品溶液的A應(yīng)在0.3～0.7【對(duì)照品比較法】用相同溶劑分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)物的量應(yīng)為供試品液中被測(cè)物規(guī)定量的100％±10％，在規(guī)定波長(zhǎng)下測(cè)定兩溶液吸收度后，按下式計(jì)算供試品溶液中被測(cè)物的濃度：

Cx=(Ax/Ar)Cr

原料藥百分含量%=Cx×D/W×100%W——供試品的稱取量；mg；Cx——供試品溶液的濃度，mg/ml；D——稀釋體積

第14頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天【對(duì)照品比較法】固體制劑含量相當(dāng)于標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù)：

標(biāo)示量（%）=Cx×D/W×W平均/B×100%W——供試品的稱取量；mg；Cx——供試品溶液的濃度，mg/ml；D——稀釋體積

W平均——單位制劑的平均重量（或裝量）B——制劑的標(biāo)示量第15頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天(5)測(cè)定法要求供試品溶液的A應(yīng)在0.3～0.7【吸收系數(shù)法】配制供試品溶液，在規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度（A），再將供試品在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量

Cx=Ax/100E1%1cm

原料藥百分含量%=Cx×D/W×100%W——供試品的稱取量；mg；Cx——供試品溶液的濃度，mg/ml；D——稀釋體積

第16頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天【對(duì)照品比較法】固體制劑含量相當(dāng)于標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù)：

注射液標(biāo)示量（%）=Cx×D/V×V平均/B×1000×100%Cx——供試品溶液的濃度，mg/mL；D——稀釋體積

V

——供試品取樣量；mLV平均——注射液規(guī)格（mL/支）B——標(biāo)示量（mg/支）第17頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

（二）熒光分光光度法特點(diǎn)靈敏度高，可達(dá)10-10g/ml～10-12g/ml在低濃度進(jìn)行測(cè)定，防止F與C不成正比及自熄滅作用

用基準(zhǔn)物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減靈敏度高，但干擾因素多。

制備熒光衍生物，可提高其靈敏度和選擇性。用樣品量少，操作簡(jiǎn)單，方法快速，應(yīng)用范圍較廣。

第18頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.熒光分析儀有二個(gè)單色光器—激發(fā)單色光器與發(fā)射單色光器；且激發(fā)光源、樣品池和檢測(cè)器成直角。含量測(cè)定常用的方法對(duì)照品比較法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)×Cr

Ch.P收載地高辛片、利血平片、洋地黃毒苷片。

標(biāo)示量（%）=Cx×D/W×W平均/B×100%第19頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

三、色譜分析法

按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜方法分類按分離方法分為：PC；TLC；柱色譜；GC；HPLC。（一）HPLC法1.對(duì)HPLC儀器一般要求色譜柱、流動(dòng)相按品種項(xiàng)下要求。色譜柱的理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wh/2)22.系統(tǒng)性試驗(yàn)

分離度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5

拖尾因子：T=W0.05h/2d1

應(yīng)在0.9～1.05

第20頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量3.測(cè)定方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量外標(biāo)一點(diǎn)法

應(yīng)用示例：RP-HPLC法測(cè)定鹽酸黃酮哌酯片含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法如頭孢拉?。活^孢羥氨芐；頭孢唑啉鈉用外標(biāo)一點(diǎn)法第21頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天（1）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量?jī)?nèi)標(biāo)法：將一個(gè)已知重量，樣品中不含有的純物質(zhì)，加至待測(cè)樣品溶液中，以此純物質(zhì)的量為標(biāo)竿，對(duì)比測(cè)定待測(cè)i組分的含量的方法謂內(nèi)標(biāo)法。優(yōu)點(diǎn)：定量結(jié)果與進(jìn)樣量無關(guān)（不超載條件下）。對(duì)內(nèi)標(biāo)物的要求：1、內(nèi)標(biāo)物是原樣品中不含有的組分。2、內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間應(yīng)與待測(cè)成分相近，分離度R≥1.5。3、內(nèi)標(biāo)物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。第22頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

精密稱（量）取藥物對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子（f）測(cè)定用的含內(nèi)標(biāo)的對(duì)照品溶液。取一定量注入儀器，記錄色譜圖。測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算校正因子：校正因子（f）＝（As/Cs）內(nèi)標(biāo)/（Ai/Ci）對(duì)照第23頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

再精密稱取供試品，配成溶液，精密量取供試品溶液和上述內(nèi)標(biāo)溶液，同法配成供含測(cè)的含內(nèi)標(biāo)的供試品溶液，取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量供試品中待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高（A或h），按下式計(jì)算含量：

f＝（A’s/C’s）內(nèi)標(biāo)/（A’i/C’i）供含量（C’i）供＝f?（A’i）供/（A’s/C’s）內(nèi)標(biāo)

第24頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

（2）外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量：外標(biāo)法是以供試品的對(duì)照品或標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照物質(zhì)，相比較以求得供試品的含量。外標(biāo)法可分為標(biāo)準(zhǔn)曲線法和外標(biāo)一點(diǎn)法。1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法：配制一系列已知濃度的對(duì)照品或標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在同一操作條件下，按同量注入色譜儀，測(cè)其峰面積（峰高），作出峰面積（或峰高）與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后在相同條件下，注入同量供試品溶液，獲得待測(cè)組分的峰面積（或峰高），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或其回歸方程，計(jì)算供試品中待測(cè)組分的濃度。第25頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

A＝aC+br＝0.9999

線性范圍g?ml-1～g?ml-1

若待測(cè)組分的峰面積為Ax，則由上述線性方程可計(jì)算出對(duì)應(yīng)的待