安捷倫液相色譜儀常見問題解決方案 液相色譜解決方案

第第頁安捷倫液相色譜儀常見問題解決方案液相色譜解決方案1、基線波動的原因？

基線波動有可能與試驗室的溫度及濕度變化有關(guān)系。需確保室溫及濕度穩(wěn)定，將安捷倫液相色譜儀從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管進(jìn)行隔熱保溫。

2、安捷倫液相色譜儀—什么原因?qū)е禄€毛刺？

這很有可能是流動池內(nèi)有氣泡。請先停泵來進(jìn)行確認(rèn),假如毛剌消失，則很有可能是由于流動池內(nèi)有氣泡。需要沖洗流動池。假如毛剌仍舊存在，則需檢查檢測器本身的電噪音有關(guān)。

3、如何削減基線噪音？

無規(guī)律噪音可能與污染有關(guān)。請沖洗色譜柱，對樣品做合適的前處理以避開污染，并使用HPLC級別的溶劑。連續(xù)噪音有可能由檢測器或泵造成。要確定問題是否發(fā)生在檢測器還是在泵，請先關(guān)泵停掉流量，監(jiān)測基線。假如此時基線平穩(wěn)，則噪音可能與泵有關(guān)系。使用ChemStation在線診斷或LC手持掌控器檢查泵方面的故障。假如停泵后噪音連續(xù)存在，則說明噪音與檢測器有關(guān)。首先，請嘗試更換燈。假如問題仍舊存在，則請廠家聯(lián)系聯(lián)系。

4、如何避開液相基線飄移？

基線向上飄移表明系統(tǒng)中有污染。請沖洗色譜柱，凈化樣品，然后使用新溶劑。向下飄移通常是由于檢測室或柱箱中的溫度波動的原因。減小室溫變化，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管保溫隔熱。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是HPLC級別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸取。

5、如何排出流動相/流動池中的氣泡？

避開流動相中產(chǎn)生氣泡的方式是將流動相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。假如沒有脫氣裝置，則可以在流動相溶劑瓶中通入氦氣進(jìn)行脫氣。也可以在檢測器的出口端加一根細(xì)管線以調(diào)整流動池中的背壓，但必需注意不要超過流動池的最大壓力，否則會造成流動池漏液或流動池?fù)p壞。假如流動池中顯現(xiàn)氣泡，則先摘下色譜柱，用一根管線直接將流動相接入檢測器的入口。將異丙醇以較大的流速注入流動池。直到基線上看不到尖峰為止。氣泡就應(yīng)當(dāng)清除掉了。液相色譜儀的原理就是利用待分別的各種物質(zhì)在兩相中的調(diào)配系數(shù)、吸附本領(lǐng)等親和本領(lǐng)的不同來進(jìn)行分別的。使用外力使含有樣品的流動相氣體、液體、通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。液相色譜儀的保養(yǎng)：1、至少每天進(jìn)行一次檢漏。2、泵正在帶壓工作時，不可拆卸其部件除非有閱歷的維護(hù)和修理人員在進(jìn)行故障處理、。3、配制兩種或兩種以上洗脫液時，確定要先脫氣再使用，保證流動相系統(tǒng)中不要形成氣泡。4、定期檢查泵的潤滑，只使用儀器說明書指定的潤滑油。5、定期檢查檢測器噪聲、漂移，定期進(jìn)行檢測器校正。6、除非實踐證明其它純度級別的溶劑可用，否則使用高效液相色譜流動相專用試劑。7、更換溶劑時，確定要對系統(tǒng)進(jìn)行沖洗。假如兩種溶劑互不相溶，則應(yīng)先用與這兩種溶劑都能互溶的溶劑進(jìn)行沖洗，再用新溶劑進(jìn)行沖洗。8、柱子不論何時都不能拆卸下接頭，以免損失柱效，廢掉柱子。高效液相色譜儀的構(gòu)成與特點

高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分構(gòu)成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的調(diào)配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附—解吸的調(diào)配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分別成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

高效液相色譜儀緊要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分別系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下面將分別敘述其各自的構(gòu)成與特點。

1.進(jìn)樣系統(tǒng)一般接受隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

2.輸液系統(tǒng)該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47～4.4X107Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動速度，這對提高辨別率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而更改，包括更改洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)（即使僅有一個基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分別。

3.分別系統(tǒng)該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內(nèi)徑為2～5mm，由優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）.固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達(dá)1000？）和比表面積大的特點，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機(jī)化合物。因此，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分別出來。

另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?；|(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶