中藥制劑分析的一般程序

第二節(jié)中藥制劑分析的一般程序取樣鑒別含量測定檢查提取純化5/7/20241中藥制劑分析的一般程序一、取樣

1.取樣均勻、合理、代表性

2.按規(guī)定方法取樣

（中藥材、中藥制劑）5/7/20242中藥制劑分析的一般程序二、鑒別（一）顯微鑒別在下列情況中應用：藥材及炮制品的外形鑒別特征不明顯或外形相似難于鑒別而組織構造不同時；藥材破碎或呈粉末不易用肉眼辨認或區(qū)分時；含原藥材粉末的中藥制劑。

5/7/20243中藥制劑分析的一般程序丸劑、片劑、膠囊劑、散劑

快速，簡便，覆蓋面大

選擇原則

1、應選有專屬性的特征進行鑒別

2、多來源的藥材應選擇共有的特征進行鑒別

5/7/20244中藥制劑分析的一般程序安宮牛黃丸1、水牛角濃縮粉2、麝香3、珍珠4、朱砂5、雄黃6、黃連7、梔子8、郁金9、黃芩5/7/20245中藥制劑分析的一般程序顯微化學反應鑒別法：一般可取藥材切片或粉末，中成藥取粉末，置載玻片上，滴加各種試劑，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察產生的結晶、沉淀物，以及特殊的顏色變化，作為鑒別特征。該法可以確定基礎品種中特殊化學成分的存在及在組織中的分布。

5/7/20246中藥制劑分析的一般程序(二）化學鑒別抗干擾能力差顯色、↓、↑、熒光例

二妙丸中蒼術的鑒別蒼術酮蒼術炔5/7/20247中藥制劑分析的一般程序（三）色譜鑒別TLC法——應用最多（Rf、顏色、熒光）GC法——適用于含揮發(fā)性成分的藥物HPLC法——常與含量測定同時進行5/7/20248中藥制劑分析的一般程序鑒定有臨床療效的已知成分黃連小檗堿（抗菌消炎）麻黃麻黃堿（支氣管哮喘）烏頭烏頭堿（毒性）洋地黃強心苷（強心）延胡索延胡索乙素（鎮(zhèn)痛）5/7/20249中藥制劑分析的一般程序陰、陽對照法陽性對照將要鑒別的藥材按制劑工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液陰性對照把制劑中要鑒別的藥材除去，用剩下的各味藥按制劑工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液5/7/202410中藥制劑分析的一般程序

OO

O

O

O

OO

O

O

OO

×××

陰樣陽對品對例5/7/202411中藥制劑分析的一般程序大補陰丸黃柏的TLC法鑒別

樣品對照藥材小檗堿O

O

OO

O×××

例5/7/202412中藥制劑分析的一般程序薄層板的選擇

硅膠G板（可加0.3%～0.5%CMC-Na）——多用氧化鋁板——常用于生物堿類藥物聚酰胺板——常用于黃酮類及酚類藥物纖維素板——常用于氨基酸類藥物

5/7/202413中藥制劑分析的一般程序（四）中藥鑒別新技術－中藥指紋圖譜（色譜）1.定義：中藥材或中藥制劑經適當處理后，采用一定的色譜分析手段，得到的能夠標定該中藥材或中藥制劑特性的共有峰的色譜圖5/7/202414中藥制劑分析的一般程序2.色譜指紋圖譜的基本屬性a.整體性將指紋圖譜作為一個整體來分析和比較它的綜合特征以達到鑒別的目的。b.模糊性強調分析、比較指紋圖譜的相似性，而不是完全相同。是一種綜合的、量化的色譜鑒別手段。5/7/202415中藥制劑分析的一般程序色譜指紋圖譜在中藥質量評價中能夠盡可能多地反應中藥的全貌。不需要清楚每一個組分的化學結構；不需要對每一個組分都進行定量；只要求不同批號的同一種藥品的指紋圖譜保持一致。5/7/202416中藥制劑分析的一般程序3.指紋圖譜的應用5/7/202417中藥制劑分析的一般程序雅蓮云蓮味蓮雅蓮云蓮5/7/202418中藥制劑分析的一般程序IIIIII訶子小訶子大訶子絨毛訶子5/7/202419中藥制劑分析的一般程序人參須根人參主根5/7/202420中藥制劑分析的一般程序不同產地高良姜的氣相指紋圖譜5/7/202421中藥制劑分析的一般程序指紋圖譜研究過程中的注意事項：1、在藥效學指導下進行研究，保證指紋圖譜反映的化學成分包括中藥材中有效部位所含的絕大部分成分或有效成分的全部。2、樣品的預處理過程及測定方法應簡便、經濟、易行，且專屬性、準確度與重現(xiàn)性好。5/7/202422中藥制劑分析的一般程序三、雜質檢查水分總灰分和酸不溶性灰分重金屬砷鹽殘留農藥主要項目5/7/202423中藥制劑分析的一般程序雜質來源及檢查意義水分——結塊、霉變或有效成分水解灰分——控制藥物本身及泥土、沙石等無機雜質重金屬——環(huán)境污染和使用農藥引入砷鹽——劇毒，常由除草劑、殺蟲劑或化肥引入殘留農藥——有毒5/7/202424中藥制劑分析的一般程序（一）水分測定法烘干法（不含或少含揮發(fā)性成分）甲苯法（含揮發(fā)性成分）減壓干燥法（含揮發(fā)性成分貴重藥）GC法5/7/202425中藥制劑分析的一般程序酸不溶性灰分的測定△△（二）總灰分和酸不溶性灰分的測定總灰分的測定5/7/202426中藥制劑分析的一般程序WHO規(guī)定植物藥鉛≤10ppm鎘≤0.3ppm干法破壞濕法破壞硫代乙酰胺法（三）重金屬的測定5/7/202427中藥制劑分析的一般程序干法破壞（ChP）濕法破壞（USP）△△(調到中性)△5/7/202428中藥制劑分析的一般程序堿融法破壞濕法破壞堿融法H+（四）砷鹽的測定5/7/202429中藥制劑分析的一般程序（五）殘留農藥的測定1、總氯量的測定2、總磷量的測定3、GC法5/7/202430中藥制劑分析的一般程序

中國藥典中藥制劑含量測定所占比例版本%19771.4819855.3119908.73199512.81200062.09（HPLC36%TLCS24%GC3%)含量測定項目的選定四、5/7/202431中藥制劑分析的一般程序測定成分的選定原則1.首選君藥及貴重藥、劇毒藥建立含量、限量測定方法2.其次考慮臣藥及其他味藥3.有效成分明確的，可選有效成分5/7/202432中藥制劑分析的一般程序4.成分類別清楚的，可測某一類總成分的含量5.檢測成分應歸屬某單一藥味6.檢測成分應與中醫(yī)用藥的功能主治相近7.確無法含量測定的，可測定浸出物含量5/7/202433中藥制劑分析的一般程序化學分析法色譜法常用定量方法分光光度法5/7/202434中藥制劑分析的一般程序（一）化學分析法重量分析法容量分析法特點A、準確度、精密度高B、抗干擾能力差例5/7/202435中藥制劑分析的一般程序（二）分光光度法UV法比色法特點A、靈敏度高B、簡便、快速C、精密度稍低D、干擾多5/7/202436中藥制劑分析的一般程序蘆丁黃芩苷小檗堿丹皮酚5/7/202437中藥制劑分析的一般程序

（三）TLCS法測定薄層板上斑點對單色光的吸收或反射的強度而進行定量的方法特點A、分離效果好B、適用于無法用UV、HPLC法測定的組分C、準確度、精密度低于HPLC5/7/202438中藥制劑分析的一般程序2000年版中國藥典（2000年版）

薄層掃描法品種

品種數(shù)量TLCS數(shù)量占總數(shù)%534（藥材）203.74458（成藥）326.99978（總數(shù)）5210.735/7/202439中藥制劑分析的一般程序

1.選擇測定條件（1）薄層色譜條件分離好不拖尾（2）檢測方法吸收測定法熒光測定法反射法透射法外標法內標法（3）掃描方式單波長雙波長線性掃描法鋸齒掃描法5/7/202440中藥制劑分析的一般程序（4）散射參數(shù)SX薄層板的散射使Kubelka-Munk方程5/7/202441中藥制劑分析的一般程序2.注意事項（1）薄層板均勻、平整（2）點樣量準確（3）斑點應完全分離，不拖尾（4）顯色劑均勻、適當（5）保護斑點用相同大小潔凈玻璃蓋住薄層板，并用透明膠紙封住邊緣，以起固定和隔絕空氣作用5/7/202442中藥制劑分析的一般程序

××××××××××××

樣樣對對樣樣對對樣樣對對

低高

低高

低高

外標法（兩點校正法）5/7/202443中藥制劑分析的一般程序5/7/202444中藥制劑分析的一般程序（四）HPLC法外標法和內標法RP–HPLC色譜柱ODS流動相甲醇-水PIC反離子氫氧化四丁基銨RP-PIC反離子烷基磺酸鹽無機陰離子5/7/202445中藥制劑分析的一般程序離子對色譜法（PIC）極性流動相中加入離子對試劑，與被分析離子生成中性離子對，從而增加在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增大5/7/202446中藥制劑分析的一般程序2000年版中國藥典（2000年版）

HPLC法品種

品種數(shù)量HPLC數(shù)量占總數(shù)%534（藥材）5410.11458（成藥）4810.48978（總數(shù)）10220.595/7/202447中藥制劑分析的一般程序應用實例-小青龍合劑[處方]麻黃125g桂枝125g白芍125g干姜125五味子125g細辛62g甘草(蜜炙)法半夏188g生物堿桂皮醛芍藥甙揮發(fā)油三萜皂甙5/7/202448中藥制劑分析的一般程序應用實例-小青龍合劑

[制法]以上八味，細辛、桂枝提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與白芍、麻黃、五味子、甘草加水煎煮至味盡，合并煎液，濾過，濾液和蒸餾后的水溶液合并，濃縮至約1000ml。法半夏、甘姜照流浸膏劑項下滲漉法，用70%乙醇作溶劑，浸漬24小時后進行滲漉，漉液濃縮，與上述藥液合并，靜置，濾過，濾液濃縮至1000ml，加入苯甲酸鈉3g與細辛、桂枝揮發(fā)油，攪勻，即得。5/7/202449中藥制劑分析的一般程序[性狀]本品為棕黑色的液體；氣微香，味甜、微辛。[功能與主治]解表化飲，止咳平喘。用于風寒水飲，惡寒發(fā)熱，無汗，喘咳痰稀。[用法與用量]口服，一次10-20ml，一日3次，用時搖勻。5/7/202450中藥制劑分析的一般程序方藥分析：君麻黃—發(fā)汗為君臣桂枝—解表為臣佐甘草—恐發(fā)汗太過,佐以甘草緩之使白芍、干姜、細辛、法半夏、五味子—幾藥合力共為使。可外發(fā)汗，內行水，散表里之邪。5/7/202451中藥制劑分析的一般程序漢代張仲景《傷寒論》——小青龍湯近代由重慶桐君閣中藥廠該湯劑為合劑本方治療傷寒表不解，心下有水氣，干嘔，發(fā)熱而咳。近代也用于慢性支氣管炎，支氣管哮喘、肺氣腫，均見咳、喘、痰白清稀者。5/7/202452中藥制劑分析的一般程序供試品溶液與陰性對照液的制備：取合劑10ml，石油醚分3次萃取，合并石油醚萃取液[油層]，濃縮至1ml，為供試品溶液A；[水層]用Na2CO3調PH11-12，用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，殘渣用1ml甲醇溶解，為供試品溶液B；

陰性對照液如上法同步進行。5/7/202453中藥制劑分析的一般程序1.桂皮醛的鑒別取供試品液A、陰性對照液、桂皮醛對照液（1ug/ml）15ul，點于同一硅膠G板上，環(huán)己烷-乙酸乙酯（17：3）展開，晾干，噴2，4—二硝基苯肼乙醇T.S，供試品A與對照品在相應位置上顯相同的橙色斑點，而陰性對照液無此斑點。5/7/202454中藥制劑分析的一般程序2.細辛揮發(fā)油的鑒別取供試品液A、陰性對照液、細辛揮發(fā)油對照液（1：10乙醚液）5ul，點于同一硅膠G板上，環(huán)己烷展開，晾干，噴10%香草醛濃硫酸T.S，加熱至顯色，供試品A與對照品在相應位置上顯相同的粉紅色斑點，而陰性對照液無此斑點。5/7/202455中藥制劑分析的一般程序3.麻黃堿的鑒別取供試品液B，陰性對照液，麻黃堿對照品液（1mg/ml）各5ul，點于同一硅膠G，氯仿-甲醇-濃氨水（20：5：0.5）展開，晾干，噴茚三酮T.S，加熱至斑點顯色，供試品B與對照品在相應位置上顯相同的藍紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。5/7/202456中藥制劑分析的一般程序

取合劑5ml，上聚酰胺柱，DW洗脫，洗脫液水浴濃縮至干，用1ml甲醇溶解，為供試品溶液C；聚酰胺柱再用95%乙醇洗脫，棄取洗脫液，用3M氨乙醇液洗脫，收集洗脫液水浴蒸干，1ml甲醇溶解，為供試品溶液D。5/7/202457中藥制劑分析的一般程序4.芍藥甙的鑒別取供試品液C、陰性對照液、芍藥甙對照液（1mg/ml）10ul，點于同一硅膠G板上，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸-甲酸（8：1：2：0.04）展開，晾干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色，供試品C與對照品在相應位置上顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。5/7/202458中藥制劑分析的一般程序5.甘草酸的鑒別取供試品液D、陰性對照液、甘草酸銨對照液（2mg/ml）2ul，點于同一硅膠G板上，乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-蒸餾水（30：2：2：4）展開，晾干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色，UV燈365nm觀察，供試品D與對照品在相應位置上顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。5/7/202459中藥制劑分析的一般程序含量測定HPLC法測定芍藥甙的含量儀器與色譜條件BECKMAN332型高效液相色譜儀163型可變波長紫外檢測儀，220nm427型記錄及數(shù)據(jù)處理儀色譜柱為YWGC18流動相乙腈-水（15：85）5/7/202460中藥制劑分析的一般程序標準曲線制備精密稱取芍藥甙5.08mg，溶于水至50ml量瓶中，定容，分別吸取0.50、1.00、1.50、2.00ml于10ml量瓶中定容?；厥章蕼y定精密吸取除去白芍制成的合劑（即陰性對照液）0.3ml與適量芍藥甙對照品液，通過0.5g聚酰胺柱，用水洗脫至50ml量瓶中至刻度，依前述條件測定，平均回收率為99.42%，RSD為0.23%（n=3）。5/7/202461中藥制劑分析的一般程序樣品測定取自制小青龍合劑搖勻，用濾紙過濾，精密吸取0.3ml濾液通過聚酰胺柱，以不同回收率測定條件進行測定。5/7/202462中藥制劑分析的一般程序5/7/202463中藥制劑分析的一般程序

分析實例—萬氏牛黃清心丸[處方]牛黃10g朱砂60g黃連200g黃芩120g梔子120g郁金80g5/7/202464中藥制劑分析的一般程序分析實例—萬氏牛黃清心丸[制法]以上六味，除牛黃外，朱砂水飛或粉碎成極細粉；其余黃連等四味粉碎成細粉；將牛黃研細，與上述粉末配研，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜100-200g制成大蜜丸，即得。古方為糊丸，亦有水丸5/7/202465中藥制劑分析的一般程序[性狀]本品為紅棕色至棕褐色的大蜜丸；氣特異，味甜、微澀、苦。[功能主治]清熱解毒，鎮(zhèn)驚安神。用于熱邪內閉，煩躁不安，神昏譫語，小兒高熱驚厥。5/7/202466中藥制劑分析的一般程序[方藥分析]本方來源于明.?痘疹世醫(yī)》心法，本方為清心開竅劑，主治熱邪內陷心包所致竅閉神昏癥。方中牛黃，清心解毒，豁痰開竅為君藥；黃連、黃芩、梔子清熱瀉火，為臣藥；朱砂清心，重鎮(zhèn)安神，郁金行氣開竅共為佐使藥，合用以奏透邪瀉熱，開竅安神之效。5/7/202467中藥制劑分析的一般程序[方藥分析]牛黃—清熱解毒藥，主含膽酸類成分。黃連—清熱燥濕藥，主要為小檗堿。黃芩—清熱燥濕藥，主要為黃酮類。梔子—清熱瀉火藥，主含梔子甙。朱砂—安神藥，主含硫化汞（HgS）。郁金—活血去瘀藥，主含揮發(fā)油。

5/7/202468中藥制劑分析的一般程序鑒別

顯微鑒別郁金—糊化淀粉團塊幾乎無色。梔子—種皮石細胞。黃芩—纖維淡黃色，梭形，厚壁，孔溝細。黃連—纖維鮮黃色，壁稍厚，紋孔明顯。朱砂—不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或棕黃色。5/7/202469中藥制劑分析的一般程序郁金—糊化淀粉團塊梔子—種皮石細胞黃芩—纖維黃連—纖維朱砂—不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或棕黃色5/7/202470中藥制劑分析的一般程序化學鑒別1.朱砂的鑒別取本品3g，加水適量，研勻，反復洗去懸浮物，可得少量朱紅色沉淀，取出，加入鹽酸1ml及銅片少量，加熱煮沸，銅片由黃色變?yōu)殂y白色。HgS+2HCl+Cu

CuCl2+Hg+H2S

在酸性條件下，朱砂與銅片發(fā)生置換反應析出金屬汞，在銅片表面形成銀白色汞齊。5/7/202471中藥制劑分析的一般程序2.人工牛黃的鑒別取本品，剪碎，加硅藻土0.6g，研勻，加氯仿10ml、冰醋酸0.5ml，加熱回流30min,放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成1ml含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。5/7/202472中藥制劑分析的一般程序TLC法CMC-Na，硅膠G展開劑醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇（32:6:1:1）顯色劑10%磷鉬酸乙醇液，1100C,10min5/7/202473中藥制劑分析的一般程序人工牛黃供試品牛黃空白豬去氧膽酸膽酸5/7/202474中藥制劑分析的一般程序3.黃芩的鑒別供試品溶液的制備：取本品3g，剪碎，加硅藻土0.5g，研勻，加甲醇20ml，加熱回流1hr,放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。對照品溶液的制備：黃芩甙對照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。5/7/202475中藥制劑分析的一般程序TLC法CMC-Na，硅膠G（4%醋酸鈉）展開劑醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）顯色劑2%三氯化鐵乙醇液使斑點更為集中-OH與Fe+3絡合5/7/202476中藥制劑分析的一般程序黃芩甙供試品黃芩空白5/7/202477中藥制劑分析的一般程序4.梔子的鑒別供試品溶液的制備：取本品3g，加乙醚15ml，研磨，棄去乙醚。殘渣揮干乙醚，加醋酸乙酯30ml，加熱回流1hr,放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇3ml溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。對照品溶液的制備：梔子甙對照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。5/7/202478中藥制劑分析的一般程序TLC法CMC-Na，硅膠G展開劑醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水（10:7:2:0.5）顯色劑10%硫酸乙醇1050C,10min5/7/202479中藥制劑分析的一般程序梔子甙供試品梔子空白5/7/202480中藥制劑分析的一般程序5.黃連的鑒別供試品溶液的制備：取含量測定項下剩余的鹽酸-甲醇提取液4ml，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，使成1ml作為供試品溶液。5/7/202481中藥制劑分析的一般程序

對照藥材溶液的制備：黃連對照藥材50mg，加甲醇10ml，回流加熱15min,濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液。對照品溶液的制備：再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。5/7/202482中藥制劑分析的一般程序TLC法硅膠G