抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義

抗核抗體基本概念及臨床檢測1抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024傳統(tǒng)定義針對細胞核成分的自身抗體的總稱。廣義定義針對細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱靶抗原存在于包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂結(jié)構(gòu)等部位抗核抗體的定義2抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024ANA可見于多種疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標(biāo)在非結(jié)締組織病中也可出現(xiàn)陽性。正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病目前，ANA檢測已成為臨床上的一個極重要的自身免疫病的篩查實驗。ANA檢測的臨床意義3抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期非活動期藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡混合性結(jié)締組織病（MCTD、Sharp綜合征）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎進行性系統(tǒng)性硬化癥多發(fā)性肌炎及皮肌炎干燥綜合征慢性活動性肝炎潰瘍性結(jié)腸炎其它風(fēng)濕病正常人95－10080－10010010020－4020－5085－9530－5070－8030－40265-10ANA檢測的臨床意義4抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/20245抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024ANA間接免疫熒光法篩查實驗6抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024間接免疫熒光法檢測ANA—基本原理間接免疫熒光法包被HEp-2細胞的基質(zhì)玻片樣本中ANA-IgGFITC標(biāo)記的抗人IgG抗體7抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024抗原譜完整(細胞核、細胞漿中近百種自身抗原)人源細胞，無種屬非特異熒光干擾腫瘤細胞，易于培養(yǎng)及商品化生產(chǎn)核質(zhì)比大，可觀察到多種不同熒光核型ANA篩查的經(jīng)典和標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì):HEp-28抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024均質(zhì)型核點型著絲點型核仁型Scl-70粗顆粒型細顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型高爾基體溶酶體肌動蛋白波形蛋白基于Hep-2細胞為基質(zhì)的ANA初篩實驗9抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024ANA間接免疫熒光法篩查試驗的實際價值初步甄別自身免疫性疾病患者（陰陽性結(jié)果）盡可能判斷熒光核型（縮小靶抗原確認(rèn)實驗范圍）獲取抗體滴度信息（判斷病情進展、預(yù)后等）考慮到熒光法篩查試驗存在主觀性強的特點，因此應(yīng)以一種客觀和現(xiàn)實的態(tài)度去面對篩查試驗結(jié)果10抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024幾個相對常見且重要的熒光核型均質(zhì)型核點型著絲點型核仁型粗顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型肌動蛋白常見且重要核型的標(biāo)準(zhǔn)核型表現(xiàn)相對典型陽性率相對較高靶抗原相對明確11抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024應(yīng)重視ANA滴度的檢測抗體滴度的臨床意義1、明確界定自身免疫性疾病患者；2、作為疾病進程、臨床療效和病情預(yù)后及轉(zhuǎn)歸等的判斷指標(biāo)當(dāng)前國際主流ANA間接免疫熒光法檢測系統(tǒng)廣泛采用的起始稀釋度為1:40。即該檢測系統(tǒng)的正常參考范圍為1:40。梯度稀釋時的稀釋因子為1:2。HOB公司產(chǎn)品推薦按照1:80開展稀釋。12抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024熒光強弱及血清稀釋度熒光強弱判讀觀察標(biāo)本的特異性熒光強度一般用“+”號表示?！啊睘闊o或僅見極微弱熒光；“+”為熒光較弱但清楚可見；“++”為熒光明亮；“+++”為耀眼的強熒光。臨床上根據(jù)特異性熒光強度達“+”以上判定為陽性抗體梯度稀釋起始稀釋：1:80梯度稀釋（稀釋因子2）1:1601:3201:6401:12801:2560…直至抗體轉(zhuǎn)陰13抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024各稀釋度的反應(yīng)性抗體滴度臨床意義1:801:640陽性+—1:80陽性，需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷陽性++—1:160陽性，提示可能存在相關(guān)疾病陽性++弱+1:320明確陽性，提示可能存在相關(guān)疾病陽性+++陽性+1:640中等陽性，提示可能存在相關(guān)疾病陽性+++陽性++1:1280強陽性，高度提示存在相關(guān)疾病陽性++++陽性+++1:2560極強的陽性，高度提示存在相關(guān)疾病。ANA熒光滴度判讀舉例14抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024HOB公司間接免疫熒光法產(chǎn)品系列產(chǎn)品系列基質(zhì)檢測項目ANA篩查HEp-2細胞ANA各種不同核型dsDNA綠蠅短膜蟲抗dsDNA抗體AKA大鼠食管抗角蛋白抗體ANCA中性粒細胞乙醇和甲醛固定抗中性粒細胞胞漿抗體組織器官大鼠肝/腎/胃ASMA\PCA\AMA\LKM-1\LC-1HEp-2細胞產(chǎn)品系列（舉例）16×6孔10×10孔8×12孔15抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024ANA靶抗原確認(rèn)實驗16抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024條帶酶免分析法檢測ANA—基本原理LIA檢測方法原理底物顏色反應(yīng)硝酸纖維膜IgG抗體堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG抗體17抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024ANA譜系列18抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024U1-nRNP和Sm抗原SLE:5-30%SLE:15-40%MCTD:95-100%功能:參與mRNA前體的剪切19抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024SS-A(Ro-60),Ro-52和SS-BAnti-SS-A(60kDa)干燥綜合征.: 40-95%SLE: 20-60%新生兒狼瘡: 96%Anti-SS-B干燥綜合征.: 40-95%SLE: 10-20%新生兒狼瘡: 78%Anti-Ro-52(52kDa)非特異功能:調(diào)控RNA翻譯功能:RNA聚合酶III輔助蛋白X20抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024Scl-70(DNA-拓?fù)洚悩?gòu)酶I)功能:在DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中完成雙鏈解螺旋疾病: 硬化癥:50%-75%21抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024Anti-Scl-70特點局限型和彌散型硬化癥病中的陽性率分別為10%和48%?？筍cl-70抗體陽性的患者通常病情發(fā)展快、預(yù)后差、多器官累及。22抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024PM-Scl抗原:幾種多肽復(fù)合物(分子量間于20-100kDa)，主要的靶抗原為100kDa

相關(guān)疾病: 硬化癥: 2%-5%

肌炎: 8%

重疊綜合征: 24%

23抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024Jo-1抗原: 組氨酰tRNA合成酶(50kDa),

細胞漿中的磷蛋白

相關(guān)疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清學(xué)標(biāo)志，陽性率為25-35%，當(dāng) 伴有肺間質(zhì)纖維化的多肌炎，陽性率可高達70%。

24抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024著絲點抗原：動粒中的4種蛋白：A(17kDa),B(80kDa),C(140kDa),D蛋白(50kDa)。

著絲點蛋白B為主要的靶抗原

(與IIF：100%)

功能: 分裂期紡垂體的附著點

相關(guān)疾病: 硬化癥: 18%

局限型: 80%-95%

(CREST綜合征)

25抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024PCNA:細胞增殖相關(guān)核抗原I型抗原: DNA聚合酶δ的輔助蛋白發(fā)揮控制細胞周期的作用

相關(guān)疾病: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，但其發(fā)生率僅為3%。

26抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024染色體結(jié)構(gòu)示意圖DNA核小體染色體染色質(zhì)組蛋白27抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024dsDNA抗原： 雙鏈DNA，天然DNA(脫氧核糖核酸骨架)

相關(guān)疾?。?

dsDNA:

為SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，陽性率為60-90%，不同的檢測方法診斷特異性差別較大。抗體滴度與疾病的活動性、狼瘡腎炎的發(fā)病風(fēng)險具有相關(guān)性。28抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024組蛋白抗原: H1,H2A,H2B,H3,H4，H2A-H2B，H3-H4

(主要的靶抗原為H1和H2B)

相關(guān)疾病: 藥物誘導(dǎo)性LE:100%(抗組蛋白抗體是該病唯一的標(biāo)志性抗體)

各種結(jié)締組織?。?SLE: 30-80%

SSc: 30%

SS:10%

29抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024核小體抗原: 組蛋白和DNA形成的復(fù)合物

相關(guān)疾病:

SLE：高特異性指標(biāo)，陽性率為50-95%，特異性幾乎100%，抗核小體抗體可獨立于抗dsDNA抗體單獨出現(xiàn)，因而抗核小體抗體與抗dsDNA抗體聯(lián)合檢測，可提高SLE的血清學(xué)檢出率。30抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/202440S亞基60S亞基P0P1P1P2P2

抗原: 核糖體60S亞基中的3種蛋白質(zhì):

P0,P1,P2.具備相同的碳端抗原位點核糖體P蛋白相關(guān)疾病: SLE: 為SLE的高特異性指標(biāo)，陽性率為5-15%，常見于神經(jīng)狼瘡。31抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述教學(xué)講義5/8/2024AMA與AMA-M2靶抗原: