膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠動(dòng)物模型的建立

膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠動(dòng)物模型的建立膿毒癥相關(guān)性腦病在膿毒癥患者是一種常見并發(fā)癥，合并膿毒癥相關(guān)性腦病者病死率明顯增加。目前臨床對(duì)于膿毒癥相關(guān)性腦病仍是排除性診斷，缺乏客觀的診斷指標(biāo)，如生化指標(biāo)、影像學(xué)指標(biāo)、電生理學(xué)指標(biāo)等，導(dǎo)致流行病學(xué)及發(fā)生機(jī)制均不明確，因此確立相對(duì)客觀統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)勢在必行。動(dòng)物模型的選擇建立對(duì)其機(jī)制及治療方法研究具有重要意義。研究人員應(yīng)用腦電圖和誘發(fā)電位監(jiān)測早期診斷膿毒癥相關(guān)性腦病，取得一定效果，但尚未形成統(tǒng)一結(jié)論。本研究根據(jù)已有膿毒癥相關(guān)性腦病模型研究的進(jìn)展，選用盲腸結(jié)扎法（CLP）建立膿毒癥模型，通過監(jiān)測大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變、腦電圖信號(hào)及體感誘發(fā)電位改變來早期診斷膿毒癥相關(guān)性腦病，并對(duì)所建立的大鼠膿毒癥腦病模型進(jìn)行分析，為以后的研究提供參考。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)成年雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量200～250g，由中南大學(xué)動(dòng)物學(xué)部提供。1.2主要藥品、試劑、儀器PBS購自鼎國生物工程公司，水合氯醛為中南大學(xué)湘雅醫(yī)院藥劑科化學(xué)分析室配制；多聚甲醛購置岳麓區(qū)鼎盛實(shí)驗(yàn)器材公司；戊二醛、無水乙醇、二甲苯、蘇木素、伊紅、鋨酸等由中南大學(xué)病理教研室提供。套管針購置BD公司。腦立體定位儀，RM6240生物信號(hào)記錄器，OlympusBX41型光學(xué)顯微鏡（日本），LKB-Ⅲ型超薄切片機(jī)（瑞典），H-7500型透射電鏡（日本），石臘切片機(jī)（美國），生化培養(yǎng)箱（廣東），格蘭士微波爐WP700，隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠），榮事達(dá)家用冷藏冰箱BCD-202，MIAS醫(yī)用圖像分析管理系統(tǒng)電子攝像。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1大鼠腦電及誘發(fā)電位監(jiān)測電極放置30只大鼠稱質(zhì)量、編號(hào)分別在造模前10d放置腦電監(jiān)測電極。水合氯醛腹腔注射麻醉后，大鼠頭部用立體定位儀固定，常規(guī)外科消毒，在頭顱中間矢狀位作3cm的皮膚切口，將前囟點(diǎn)和其他顱骨縫暴露。在顱骨面行局麻（10%利多卡因噴霧），移去骨膜。用牙科鉆在頭顱鉆三個(gè)孔，將3根0.6mm的不銹鋼螺絲輕輕置入直到到達(dá)腦功能定位處的硬腦膜：一個(gè)電極被安裝在軀體感覺皮質(zhì)處（記為S1電極）（前囟點(diǎn)后2.5mm，右側(cè)矢狀縫旁開2.5mm），剩余兩個(gè)電極被安裝在額竇上面（前囟點(diǎn)前10mm，矢狀面?zhèn)冗?mm），另外左側(cè)的電極用作接地電極。放置好電極后用牙托粉將電極固定在頭顱上，封閉骨孔，皮膚縫合。手術(shù)區(qū)域每6h呋喃西林涂抹1次。1.3.2腦電活動(dòng)評(píng)估大鼠頭部用立體定位儀固定，利用固定于額部的S1電極記錄腦皮層電圖，對(duì)側(cè)的額竇電極作為信號(hào)地線。通過腦電圖機(jī)記錄信號(hào)，0.5～3Hz（δ），4～8Hz（θ），8～13Hz（α）和13～30Hz（β）頻帶。SEF95（低于95%能量的頻率）和MF中位頻率（中頻=低于50%功率的頻率）分析出來。同時(shí)記錄每只大鼠出現(xiàn)棘波的最早時(shí)間。誘發(fā)電位監(jiān)測：兩個(gè)刺激電極固定在左側(cè)尾巴的中內(nèi)三分之一范圍內(nèi)，兩電極相隔2mm。通過這兩個(gè)電極的刺激大鼠后，可以產(chǎn)生軀體誘發(fā)電位。刺激是2ms的方形波脈沖，這些方形波脈沖由RM6240產(chǎn)生。S1電極記錄軀體誘發(fā)電位。身體同側(cè)的額竇電極作為參考電極。對(duì)側(cè)的額竇電極作為信號(hào)地線。測量結(jié)果由兩個(gè)正電位（p1和p2）與一個(gè)負(fù)電極位（N1）組成。峰值基線和峰值潛伏期被估量出來。1.3.3動(dòng)物模型制作及分組10d后，大鼠稱質(zhì)量、編號(hào)、隨機(jī)分組，術(shù)前禁食12h。10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，股靜脈置管開放靜脈通路，股動(dòng)脈置管后連接RM6240生物信號(hào)記錄器，持續(xù)監(jiān)測血壓、心率。大鼠用盲腸結(jié)扎穿孔模型（CLP）方法誘發(fā)膿毒癥，常規(guī)消毒鋪巾，在大鼠側(cè)腹開2cm的刀口，暴露出盲腸，然后在回盲腸連接處結(jié)扎。用22#注射針頭將盲腸刺穿兩次，輕輕擠壓盲腸使其內(nèi)的糞渣流進(jìn)腹膜。然后將盲腸送回腹腔，最后關(guān)閉腹腔。假手術(shù)組的動(dòng)物同樣開腹，除了結(jié)扎和穿刺操作外，盲腸也要被執(zhí)行其他同樣操作。所有手術(shù)動(dòng)物皮下注射生理鹽水（3ml/100g），手術(shù)結(jié)束后切口用絡(luò)合碘消毒液清洗。術(shù)后每6h需要用2%呋喃西林涂抹于手術(shù)區(qū)域。觀察大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變，監(jiān)測CLP后4、6、8、12、24h腦電圖，并記錄腦電波形改變及體感誘發(fā)電位數(shù)值。膿毒癥組大鼠按24h內(nèi)有無腦電圖和誘發(fā)電位改變分為膿毒癥無腦病組和膿毒癥相關(guān)性腦病組。1.3.4膿毒性腦病大鼠的診斷標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)定參照Siami等1的研究，膿毒癥大鼠出現(xiàn)神經(jīng)行為學(xué)改變，同時(shí)腦電圖監(jiān)測出現(xiàn)δ波明顯增加，誘發(fā)電位P1振幅明顯降低，S-P1和N1-P1潛伏期明顯延長判定為出現(xiàn)膿毒癥相關(guān)性腦病。1.4觀察和檢測指標(biāo)1.4.1大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變?cè)u(píng)價(jià)評(píng)價(jià)大鼠耳廓反射、角膜反射、翻正反射、甩尾反射和逃避反射改變。耳廓反射通過輕觸外耳道引起頭部有力轉(zhuǎn)動(dòng)為正常；角膜反射通過用棉簽輕觸大鼠角膜引起眨眼或頭部搖動(dòng)為正常；翻正反射通過將大鼠仰臥位放置，觀察其是否能翻身成俯臥位，并前后腳放平。甩尾反射和逃避反射通過短暫刺激大鼠尾部引起躲避或轉(zhuǎn)頭逃避傷害刺激的反應(yīng)。0分為無反射，1分為反射減弱（10s以內(nèi)缺乏反射），2分為正常反射。每只大鼠最高評(píng)分為10分。1.4.2腦電圖及誘發(fā)電位改變持續(xù)監(jiān)測大鼠從致傷開始后的腦電圖改變，并應(yīng)用RM6240生物信號(hào)記錄器分析0.5～3Hz（δ），4～8Hz（θ），8～13Hz（α）和13～30Hz（β）頻帶比例。同時(shí)監(jiān)測大鼠呼吸頻率、心率、血壓變化。1.4.3灌注固定與腦組織取材行病理學(xué)及透射電鏡檢查24h后存活大鼠給予水合氯醛0.3～0.4ml/100g腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，剪開胸部，經(jīng)左心室插入細(xì)導(dǎo)管，繼續(xù)向上推進(jìn)直至導(dǎo)管進(jìn)入主動(dòng)脈弓處，剪開右心耳。先以生理鹽水約200ml灌注至流出液無色，肝臟變白后，繼以4%多聚甲醛150ml灌注。灌注完畢后取腦組織，選取大腦額葉皮質(zhì)及海馬組織，一部分置于4%多聚甲醛中固定24h，經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋，制成4μm厚的連續(xù)切片。另一部分置于2.5%戊二醛固定24h以上，行透射電鏡檢測。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件在WindowsXP環(huán)境下處理，所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)。所有計(jì)量資料結(jié)果均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，均數(shù)間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)（Student-Newman-Keula，S-N-K法），計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1一般情況及膿毒癥相關(guān)性腦病發(fā)生率CLP大鼠出現(xiàn)蜷縮少動(dòng)、豎毛和呼吸急促（>自身對(duì)照值2倍）表現(xiàn)。心率由正常的（358.2±8.8）次/min升至（453.3±12.9）次/min，平均動(dòng)脈血壓由正的（107.60±3.85）mmHg（1mmHg=0.133kPa）降至（60.71±4.23）mmHg。30只大鼠（假手術(shù)組5只，CLP組25只）24h內(nèi)死亡12只，13只膿毒癥大鼠進(jìn)行了后續(xù)研究及統(tǒng)計(jì)，24h內(nèi)6只大鼠出現(xiàn)神經(jīng)行為學(xué)、腦電圖及誘發(fā)電位改變，確定為膿毒癥相關(guān)性腦病，其發(fā)病率為46%。2.2神經(jīng)行為學(xué)、腦電圖及體感誘發(fā)電位改變假手術(shù)組大鼠神經(jīng)生物學(xué)評(píng)分基本正常，24h時(shí)膿毒癥無腦病組及膿毒癥相關(guān)性腦病組神經(jīng)生物學(xué)評(píng)分明顯下降（P＜0.05），但膿毒癥無腦病組與膿毒癥相關(guān)性腦病組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。膿毒癥相關(guān)性腦病組24h時(shí)α波較假手術(shù)組和膿毒癥無腦病組明顯下降，δ波增加（P＜0.05），膿毒癥無腦病組與假手術(shù)組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與假手術(shù)組及膿毒癥無腦病組相比，膿毒癥相關(guān)性腦病組24h時(shí)P1振幅下降，S-P1和N1-P2潛伏期延長（P＜0.05），P1-N1無明顯改變（P>0.05）；而膿毒癥無腦病組與假手術(shù)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。膿毒癥相關(guān)性腦病組內(nèi)神經(jīng)生物學(xué)評(píng)分、腦電圖改變及體感誘發(fā)電位改變?cè)谛g(shù)后6h開始出現(xiàn)，24h時(shí)與術(shù)前相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表現(xiàn)為神經(jīng)生物學(xué)評(píng)分下降，α波降低，δ波增加，P1振幅下降，S-P1和N1-P2潛伏期明顯延長（P＜0.05）。見表1、2。2.3膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠的病理形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果光鏡下可見假手術(shù)組大鼠神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞大小正常，形態(tài)清晰，錐體細(xì)胞突起明顯，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰；膿毒癥無腦病組大鼠24h后可見部分神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清晰，但無明顯神經(jīng)元固縮及血管改變；膿毒癥相關(guān)腦病組大鼠可見明顯神經(jīng)元固縮、深染，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞周圍空隙明顯增大，膠質(zhì)細(xì)胞周圍間隙擴(kuò)大，空泡樣改變，血管周圍間隙擴(kuò)大（圖1）。2.4透射電鏡超微病理檢查結(jié)果透射電鏡結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠海馬和額葉區(qū)神經(jīng)元形態(tài)完整，結(jié)構(gòu)清晰，核膜完整，核形態(tài)正常，胞質(zhì)中細(xì)胞器豐富；線粒體形態(tài)正常，呈圓形或橢圓形，嵴較多而清晰可見。膿毒癥無腦病組大鼠海馬和額葉皮質(zhì)均見輕度神經(jīng)元水腫，核形態(tài)基本正常，核膜尚完整，染色質(zhì)均勻分布，細(xì)胞器豐富；胞質(zhì)內(nèi)有豐富的線粒體，大多數(shù)線粒體嵴完整，排列緊密規(guī)律，基質(zhì)顆粒極少量脫落。膿毒癥相關(guān)性腦病組大鼠額葉皮質(zhì)神經(jīng)元嚴(yán)重水腫，形態(tài)改變，細(xì)胞核不規(guī)則，核膜皺縮，胞質(zhì)高度水腫，細(xì)胞器數(shù)量明顯減少；線粒體呈氣球樣腫脹，大量空泡化，嵴斷裂、溶解、消失，同時(shí)伴有線粒體致密化改變，而海馬區(qū)亦見類似改變，程度較皮質(zhì)區(qū)稍輕（圖2）。3討論膿毒癥致病因素多種多樣，不同的因素導(dǎo)致了發(fā)病機(jī)制差別甚大，因此不同的動(dòng)物模型得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)論也可能不同。Hubband等2指出理想的動(dòng)物模型應(yīng)具備以下標(biāo)準(zhǔn)：膿毒癥存在毒血癥，血培養(yǎng)陽性，動(dòng)物表現(xiàn)出特征性代謝及生理紊亂，膿毒癥感染超過一定時(shí)間才使動(dòng)物產(chǎn)生相應(yīng)反應(yīng)；同時(shí)該動(dòng)物模型制作成本小，重復(fù)性好。湯耀卿和李磊3提出膿毒癥動(dòng)物模型都必須具有膿毒癥典型的高排低阻血流動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)和高代謝狀態(tài)；伴發(fā)多個(gè)器官功能障礙，出現(xiàn)器官功能障礙及動(dòng)物死亡距膿毒癥模型制備應(yīng)有一定的時(shí)間間距；有較高的自然病死率，根據(jù)膿毒癥的轉(zhuǎn)歸，要求動(dòng)物模型的自然病死率達(dá)到50%～70%。不同模型有不同的優(yōu)缺點(diǎn)，而在臨床上膿毒癥最常見同樣也最難治療的是腹腔感染，因此腹腔內(nèi)感染模型是最常用的膿毒癥模型。腹腔內(nèi)感染法可將膿毒癥血流動(dòng)力學(xué)和生化反應(yīng)成功復(fù)制，尤其是CLP堪稱為”金標(biāo)準(zhǔn)”。因此在本實(shí)驗(yàn)中，筆者選擇了盲腸結(jié)扎法制作膿毒癥動(dòng)物模型。在進(jìn)行盲腸結(jié)扎后大鼠出現(xiàn)蜷縮少動(dòng)、豎毛、呼吸急促、心率增快、血壓下降表現(xiàn)。25只CLP24h內(nèi)死亡12只，病死率達(dá)到48%，基本符合膿毒癥標(biāo)準(zhǔn)。膿毒癥相關(guān)性腦病在臨床上主要表現(xiàn)為精神狀態(tài)的急劇惡化，如認(rèn)知障礙、意識(shí)混亂、定向障礙、激動(dòng)、木僵或昏迷。研究認(rèn)為其與腦組織的缺血缺氧及腦細(xì)胞代謝障礙相關(guān)，但其機(jī)制非常復(fù)雜目前尚不明確4。膿毒癥發(fā)生時(shí)，同時(shí)會(huì)伴有肝腎衰竭、急性呼吸窘迫綜合征、電解質(zhì)紊亂、酸堿失衡、血糖異常、低血壓、低氧血癥、低溫、發(fā)熱或內(nèi)分泌異常等，且應(yīng)用鎮(zhèn)靜藥、機(jī)械通氣或神經(jīng)肌肉阻滯藥等治療措施比較普遍，這些均使神經(jīng)系統(tǒng)本身病變的癥狀和體征容易被掩蓋，而目前臨床判斷SAE大多還是根據(jù)其癥狀和體征，并沒有客觀輔助檢查的診斷標(biāo)準(zhǔn)，于是確立和早期診斷膿毒癥相關(guān)性腦病尤為重要，腦電活動(dòng)的改變可能成為重要的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。有研究認(rèn)為，SAE可以根據(jù)患者的意識(shí)狀態(tài)，認(rèn)知功能的改變?cè)u(píng)估和腦電圖記錄的腦電活動(dòng)來診斷5。腦電圖改變程度與臨床嚴(yán)重程度的相關(guān)性因素可以表現(xiàn)為從慢頻波的增加到額外的三相波出現(xiàn)甚至嚴(yán)重情況下的突發(fā)抑制6。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，對(duì)LPS模型的膿毒癥大鼠進(jìn)行腦電圖監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)在全身血流動(dòng)力學(xué)沒有顯著改變情況下，α波明顯下降，被認(rèn)為是腦部局部血流減少的跡象，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)腦部低灌注可能有重要意義7。在一項(xiàng)應(yīng)用盲腸結(jié)扎法制作膿毒癥大鼠模型監(jiān)測腦電圖改變研究中，發(fā)現(xiàn)24h內(nèi)大鼠的整體腦電波形和α波幅度都有可識(shí)別的降低，可是與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但研究分析中指出差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義可能由于監(jiān)測時(shí)間過短導(dǎo)致，該研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)24h監(jiān)測過程中，50%的大鼠出現(xiàn)δ波顯著增加，在假手術(shù)和非手術(shù)的對(duì)照組中沒有觀察到類似的δ波改變，所以這些大鼠δ波增加不是手術(shù)與麻醉的影響，而是受盲腸結(jié)扎穿刺引發(fā)的炎癥反應(yīng)影響，導(dǎo)致腦病發(fā)生。因此δ波增加可能可以作為SAE模型中腦功能障礙發(fā)展的早期指標(biāo)8。體感誘發(fā)電位（SEP）測試是一種非侵入性調(diào)查神經(jīng)系統(tǒng)針對(duì)刺激的功能和檢測從周邊到中樞神經(jīng)系統(tǒng)體感通路的完整性的方法。當(dāng)感官檢驗(yàn)是模棱兩可的時(shí)候，誘發(fā)電位所提供的功能障礙的客觀示范是非常有用的。SEP的記錄已經(jīng)被提出可以用作估計(jì)膿毒癥患者腦病的嚴(yán)重程度的技術(shù)。在胰腺炎誘發(fā)豬膿毒癥和LPS誘發(fā)大鼠膿毒癥的模型中，都已證實(shí)SEP記錄的改變可能是膿毒癥進(jìn)展的一個(gè)早期指標(biāo)的假設(shè)8。在膿毒癥模型基礎(chǔ)上通過監(jiān)測腦電圖和體感誘發(fā)電位改變制作膿毒癥相關(guān)性腦病模型取得一定進(jìn)展9。筆者的結(jié)果顯示，在整個(gè)24h監(jiān)測過程中部分CLP大鼠出現(xiàn)神經(jīng)功能改變，而腦電圖監(jiān)測6h即有大鼠出現(xiàn)α波明顯下降，δ波增加，12h變化部分顯著，同時(shí)伴有體感誘發(fā)電位變化，誘發(fā)電位P1振幅明顯降低，S-P1和N1-P1潛伏期明顯延長，在病理改變上可發(fā)現(xiàn)伴有神經(jīng)評(píng)分改變，腦電圖改變及體感誘發(fā)電位變化的大鼠出現(xiàn)明顯神經(jīng)元固縮、深染，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞周圍空隙明顯增大，膠質(zhì)細(xì)胞周圍間隙擴(kuò)大，空泡樣改變，血管周圍間隙擴(kuò)大。同時(shí)超微透射電鏡提示存在神經(jīng)元嚴(yán)重水腫，形態(tài)改變，細(xì)胞核不規(guī)則，核膜皺縮，胞質(zhì)高度水腫，細(xì)胞器數(shù)量明顯減少。線粒體呈氣球樣腫脹，大量空泡化，嵴斷裂、溶解、消失，同時(shí)伴有線粒體致密化改變，可早期診斷膿毒癥相關(guān)性腦病。而膿毒癥無腦病組盡管有少數(shù)大鼠也出現(xiàn)神經(jīng)生物學(xué)評(píng)分變化，但其腦電圖和體感誘發(fā)電位無明顯改變，同時(shí)其病理改變上僅見部分神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清晰，但無明顯神經(jīng)元固縮及血管改變；透射電鏡結(jié)果顯示，海馬和額葉皮質(zhì)均見輕度神經(jīng)元水腫，核形態(tài)基本正常，核膜尚完整，染色質(zhì)均勻分布，細(xì)胞器豐富。胞質(zhì)內(nèi)有豐富的線粒體，大多數(shù)線粒體嵴完整、排列緊密規(guī)律，基質(zhì)顆粒極少量脫落。腦部損害明顯輕于同時(shí)存在腦電圖和體感誘發(fā)電位改變組?？傊?，對(duì)CLP大鼠24h的研究中，24h內(nèi)15只大鼠中7只大鼠出現(xiàn)神經(jīng)行為學(xué)、腦電圖及誘發(fā)電位改變，同時(shí)病理及電鏡超微結(jié)構(gòu)改變提示出現(xiàn)明顯神經(jīng)元損傷，線粒體結(jié)構(gòu)損傷及凋亡改變，確定為膿毒癥相關(guān)性腦病，其發(fā)病率為46%。因此通過對(duì)CLP膿毒癥大鼠模型進(jìn)行神經(jīng)生物學(xué)評(píng)價(jià)，腦電監(jiān)測及體感誘發(fā)電位監(jiān)測可早期發(fā)現(xiàn)膿毒癥相關(guān)性腦病，可成功建立膿毒癥相關(guān)性腦病模型，為后續(xù)膿毒癥相關(guān)性腦病機(jī)制研究打好基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)[1]SiamiS，AnnaneD，SharsharT.Theencephalopathyinsepsis[J].CritCareClin，2008，24（1）：67-82.[2]HubbandWJ，ChoudhryM，SchwachaMG.Cecalligationandpuncture[J].Shock，2005，24Suppl1：S52-57.[3]湯耀卿，李磊.膿毒癥動(dòng)物模型制作方略及應(yīng)用[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2006，23（12）：1433-1434.[4]ChelazziC，ConsalesG，DeGaudio，etal.Sepsisassociatedencephalopathy[J].CurrAnaesthCritCare，2008，19（1）：15-21.[5]錢欣，鄭崢，湯羅嘉，等.早期膿毒癥大鼠腦氧代謝與乳酸的變化[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2011，20（5）：511-514.