血液檢驗(yàn)課件

第一章血液一般檢查

一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（redbloodcellcount）

［要求］通過實(shí)習(xí)較熟練地掌握末梢采血技術(shù)，熟悉細(xì)胞計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)及用法，能進(jìn)行

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，并記住參考值、臨床意義。

［原理］一定量的血液，經(jīng)一定量的等滲性溶液稀釋后，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)室中，于顯微

鏡下計(jì)數(shù)一定體積的紅細(xì)胞，并求的每升血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)。

［儀器試劑］

1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，為一特制的長(zhǎng)方形硬質(zhì)玻璃板，中間1/3部分具有“H”形漕溝，

橫漕溝上下的平臺(tái)部分各深0.1mm,成為二個(gè)計(jì)數(shù)臺(tái)（池），每臺(tái)有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)域，分

為9個(gè)大方格，每一個(gè)大方格的面積為Imm：四角的每個(gè)大方格又劃分為16個(gè)中方格，

供白細(xì)胞計(jì)數(shù)用。中央的一個(gè)大方格用雙線劃分為25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又劃分為

16個(gè)小方格，共為400個(gè)小方格，供紅細(xì)胞計(jì)數(shù)用。計(jì)數(shù)臺(tái)之上覆以特制的蓋片（厚度

0.4mm、表面平直、質(zhì)地較硬）后構(gòu)成計(jì)數(shù)室。每個(gè)大方格的體積是0.Imm'QmmXlmmX

0.1mm），參閱圖1,2,3

灰，蓋片

計(jì)數(shù)板

7丫？，7

萩森堤

圖2血.細(xì)胞計(jì)數(shù)池側(cè)面圖

圖3血細(xì)胞計(jì)數(shù)池劃線

2.容量準(zhǔn)確的微量吸管（具有10ul及20ul刻度）

3.紅細(xì)胞稀釋液（Hayem稀釋液）

氯化鈉1.0g

硫酸鈉（Na2so4.12H20）5.0g

氯化高汞5.0g

蒸偏水加至200ml過濾后備用

此稀釋液為等滲性溶液，比重較大，使紅細(xì)胞易于懸浮，并有防腐作用。

4.光學(xué)顯微鏡。

5.消毒、穿刺用具為75%酒精棉球、干棉球、消毒刺血針。

［方法］

1.準(zhǔn)確加紅細(xì)胞稀釋2ml于一中號(hào)試管中，塞緊管口，并拭凈血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及蓋玻片。

2.用75%的酒精棉球消毒被檢人左手無名指尖側(cè)腹部。

3.待酒精揮發(fā)后，由左手捏緊取血部位，以右手持消毒穿刺針快速刺入約2~3mm深。拭

去第一滴血后，用微量吸管準(zhǔn)確吸血到10ul處，拭去管尖余血，將吸管插到稀釋液

中迅速的把血液放出，并用上清夜洗凈洗管內(nèi)殘存血液，立即輕輕振蕩混勻，用消毒

干棉球按壓穿刺傷口。

4.進(jìn)一步混勻紅細(xì)胞懸液，然后用尖吸管吸取數(shù)滴（或用細(xì)玻璃醮取一滴），充入計(jì)數(shù)

室內(nèi)準(zhǔn)備計(jì)數(shù)。充細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)防止產(chǎn)生氣泡，要一次充好，液量多少適宜。水平位

靜置2~3min待細(xì)胞沉下。

5.將計(jì)數(shù)板平放于顯微鏡載物臺(tái)上，用低倍鏡找出紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，如紅細(xì)胞分布均勻

即可于低倍鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)中央大方格中的四個(gè)角和中心的五個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)

胞。為保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確，凡在中方格雙線上的紅細(xì)胞按壓左側(cè)及上側(cè)線者計(jì)入，按右

側(cè)及下側(cè)線者棄去的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)（圖4）

圖4紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方式

6.將五個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)X5X10X200X1（）6=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)X10'°=紅細(xì)胞數(shù)

/L,報(bào)告方式：△、△△10“/L。

上式中

X5表示把5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)折算為1個(gè)大方格的紅細(xì)胞。

X10表示把一個(gè)大方格容積(0.lul)折算成lulo

X200表示血液稀釋倍數(shù)。

XIO"表示將ul換算成L。

△△10'L表示將紅細(xì)胞數(shù)以小數(shù)點(diǎn)前保留1位數(shù)字乘以IO',形式報(bào)告。如數(shù)得紅細(xì)

胞為450個(gè)則報(bào)告為4.5X1012/LO

［注意事項(xiàng)］

1.取血部位的皮膚必須正常，凡局部有水腫、發(fā)炎、紫絹或凍瘡等均不可穿刺采血。

2.…人一針，防止交插感染。穿刺必須夠深，使血液自行流出或僅施壓力即可流出。

3.微量吸管的容量必須準(zhǔn)確，內(nèi)腔一定要干燥，否則會(huì)影響吸血量和導(dǎo)致溶血。

4.取血?jiǎng)幼鞅仨氀杆?，否則常易凝固。若作血紅蛋白或紅細(xì)胞計(jì)數(shù)兩項(xiàng)時(shí)，應(yīng)先取紅細(xì)

胞計(jì)數(shù)的標(biāo)本，后取血紅蛋白的標(biāo)本。

5.充液之前務(wù)必充分混勻，否則因久置而紅細(xì)胞下降，導(dǎo)致計(jì)數(shù)值錯(cuò)誤的偏低。

6「?般于低倍鏡下計(jì)數(shù)即可。為區(qū)別異物或殘?jiān)瑢⒖梢赡繕?biāo)置低倍鏡視野中心，然后

轉(zhuǎn)高倍鏡觀察。

7.在紅細(xì)胞稀釋中，白細(xì)胞仍然存在。但因在正常人血液中，紅細(xì)胞于白細(xì)胞之比是750：

1,又經(jīng)200倍稀釋故對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)影響不大。但如遇白血病患者，其白細(xì)胞明顯增

多時(shí)，則應(yīng)進(jìn)行校正，可從上法所得的紅細(xì)胞數(shù)值(內(nèi)含較多白細(xì)胞)中減去白細(xì)胞

計(jì)數(shù)值。

8.如遇高球蛋白血癥病人，其血液加稀釋液后，迅速出現(xiàn)顆粒狀混濁，乃因氯化高汞將

球蛋白沉淀所致。此時(shí)可換用生理鹽水作稀釋液，但應(yīng)及時(shí)計(jì)數(shù)。

9.如遇含高效價(jià)冷凝集素的病人，當(dāng)血加入稀釋液后，其紅細(xì)胞即凝集成紅色顆粒狀，

此時(shí)應(yīng)事先將紅細(xì)胞稀釋液管加溫后再放入血液或?qū)⒓t細(xì)胞懸液管置溫箱內(nèi)待冷凝

現(xiàn)象消失后再迅速混勻計(jì)數(shù)。

［參考值］

成年男性(4.0—5.5)X1012/L

成年女性(3.5—5.0)X10lz/L

初生兒(6.0—7.0)X10I2/L

二血紅蛋白測(cè)定(hemoglobindetermination)

［要求］通過實(shí)習(xí)熟練掌握采血技術(shù)，能進(jìn)行血紅蛋白測(cè)定。并記住參考值和臨床意義。

［原理］血紅蛋白被高鐵氟化鉀氧化為高鐵血紅蛋白(Hi),再與鼠結(jié)合成穩(wěn)定的棕紅色

氟化高鐵血紅蛋白(HiCH)o在特定波長(zhǎng)和光徑(比色杯內(nèi)徑)條件下具有一定的吸光

度，據(jù)此即可求的血紅蛋白濃度(g/L)。

［儀器、試劑］

儀器微量吸管

粗口徑清潔試管

消毒采血用具

721分光光度計(jì)

試劑VanKampen-ZijIstra(文齊氏)液(HiCH轉(zhuǎn)化液)

氟化鉀(KCN)0.05g

高鐵氟化鉀［K3Fe(CN)6］0.20g

無水磷酸二氫鉀(KH2P04)0.14g

TritonXT00(或其他非離子表面活性劑)1.0g

蒸儲(chǔ)水加到1000ml

上述試劑為淡黃色溶液儲(chǔ)存棕色瓶中室溫妥善保存，其中非離子表面活性劑可加速

溶血?？s短轉(zhuǎn)化時(shí)間，防止因血漿蛋白改變引起的渾濁。

［方法］

1.取轉(zhuǎn)化液5ml于粗口徑試管中加血20ul混勻，室溫(20℃-25℃)靜置5min。

2.以校正過波長(zhǎng)和靈敏度的分光光度計(jì)，波長(zhǎng)為540nm,光徑1cm,以轉(zhuǎn)化液為空白，

測(cè)定吸光度(A)

3.血紅蛋白g/LA’,o/44X1.OX64458/1OOOX251=A5.1OX367.7

上式中：

(1)44為國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)公布的血紅蛋白在540nm波長(zhǎng)下的毫

克分子消光系數(shù);540nm(Lmmol-lCm-1)0

(2)1.0為比色杯光徑(CM)o

(3)64458為Hb分子量，64458/1000為將血紅蛋白毫摩爾折算為克。

(4)251為血液稀釋倍數(shù)。

由于血紅蛋白不是單一品種，各種血紅蛋白分子量不完全一致，所以不用IS制

mmol/L表示，而報(bào)告質(zhì)量濃度g/L。

［注意事項(xiàng)］

（1）分光光度計(jì)的波長(zhǎng)和靈敏度必須經(jīng)過校準(zhǔn)。

（2）若轉(zhuǎn)化濃度渾、變綠即不可再用。

（3）轉(zhuǎn)化液不能偏酸，也不能用聚乙烯瓶裝，否則KCN易分解失效。

（4）丙種球蛋白或白細(xì)胞數(shù)值明顯增高的血液，可出現(xiàn)渾濁，可按15g/L甚至50g/L

加入氯化鈉以防止。

（5）關(guān)于轉(zhuǎn)化液中KCN毒性問題由于濃度很低僅50mg/L,故只要分散處理隨時(shí)流

水沖洗棄去危險(xiǎn)性不大，但不可積存處理。

（6）若用疊氮鈉、澳代十六烷三甲氨法測(cè)定血紅蛋白時(shí)-，均需依本法進(jìn)行校準(zhǔn)。

三、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（reticulocytecount）

［要求］了解網(wǎng)織紅細(xì)胞的活體染色過程、形態(tài)學(xué)特點(diǎn)、計(jì)數(shù)方法并記住其參考值和臨

床意義。

［原理］網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟的紅細(xì)胞之間的過程型細(xì)胞。由于

其胞質(zhì)中尚殘存核糖體等嗜堿性物質(zhì)，故經(jīng)煌焦油藍(lán)染液活體染色后，可見有藍(lán)綠色的

點(diǎn)狀、線狀或網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)，故名網(wǎng)織紅細(xì)胞。

［儀器、試劑］

1.光學(xué)顯微鏡

2.現(xiàn)煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液

煌焦油藍(lán)1g

枸椽酸鈉0.4g

氯化鈉0.85g

蒸儲(chǔ)水加到100ml

3.消毒、穿刺取血用具。

4.香柏油。

5.小口徑試管（（6mm內(nèi)徑），載玻片及推片，目鏡縮小視野用紙片或米勒氏窺盤。

［方法］

1.小試管中放入1%煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液1滴，加入病人血液1滴后混勻緊塞管口，待

15min后混勻，傾出1小滴以15度角制備薄涂片。

2.干后，低倍鏡下選細(xì)胞分布均勻，著色清晰處油浸鏡下進(jìn)行觀察。為便于計(jì)數(shù)，可與

接目鏡筒中放一縮小視野用的有一直徑為3mm圓孔的紙片。計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞，記

錄其中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，即可得出網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)值。如1000個(gè)紅細(xì)胞見到6

個(gè)網(wǎng)織紅細(xì)胞，則百分率為0.6吼

3.也可用米勒氏窺盤(Milleroculordisc)置入接目鏡內(nèi)進(jìn)行計(jì)數(shù)(圖5)。具體方法

是以窺盤的A區(qū)計(jì)數(shù)紅細(xì)胞，B區(qū)計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，由于B區(qū)的面積為A區(qū)的9倍，

故計(jì)算如下：

網(wǎng)織紅細(xì)胞(%)=B區(qū)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)XI00%/A區(qū)紅細(xì)胞數(shù)X9X100%

圖5

［注意事項(xiàng)］

1.只有活體染色后才能看到網(wǎng)織紅細(xì)胞，故必須將新鮮血滴與染液相混合，染液與血液

之比一般約為1：1,但若貧血嚴(yán)重也可按1：2關(guān)系處理。注意混勻，否則有時(shí)凝固。

2.染色時(shí)間不得短于lOmin,否則可能著色不佳。計(jì)數(shù)前注意多部位觀察，可與涂片的

體尾交界處選染色好，紅細(xì)胞分布既不分散又不重疊的區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)。經(jīng)此種染色后

紅細(xì)胞呈清晰的藍(lán)綠色，凡胞質(zhì)中含有藍(lán)綠色點(diǎn)狀、短線狀結(jié)構(gòu)者為網(wǎng)織紅細(xì)胞。

3.計(jì)數(shù)時(shí)需注意與異物或假象相區(qū)別。如有異物殘?jiān)?，多呈黑色，轉(zhuǎn)動(dòng)微螺旋時(shí)可見其

折光性。接目鏡中粉尖重疊于紅細(xì)胞上所致的假象，則隨接目鏡轉(zhuǎn)動(dòng)而移位。勿將皺

縮紅細(xì)胞的較深染的皺縮點(diǎn)勿認(rèn)為網(wǎng)織結(jié)構(gòu)，皺縮紅細(xì)胞其邊緣處均勻的鋸齒狀可供

作鑒別。

4.染色后的涂片應(yīng)盡快觀察計(jì)數(shù)，否則其網(wǎng)織結(jié)構(gòu)可因久置而溶解消失，尤其在夏天濕

度大的季節(jié)。

5.如擬保留涂片，需用瑞-姬氏復(fù)合染液進(jìn)行復(fù)染，染色方法同白細(xì)胞分類。復(fù)染后的

紅細(xì)胞呈淡紅色，網(wǎng)織結(jié)構(gòu)呈深藍(lán)色。

6.遇再生障礙性貧血等病人，網(wǎng)織紅細(xì)胞非常少時(shí)，可計(jì)數(shù)2000甚至5000個(gè)紅細(xì)胞中

的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)或數(shù)個(gè)米勒氏窺盤面區(qū)域之后求其百分?jǐn)?shù)值。

7.網(wǎng)織紅細(xì)胞的絕對(duì)值可如下求得：①同上法計(jì)得網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分率，如為3%；②同

時(shí)做病人的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，如3.0X1012/L則網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值為3.0X107LX3%=90

XIO9/L

［參考值］

正常成人0.5-1.5%

新生兒2-6%

成人網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值(24-84)X107L

四、紅細(xì)胞沉降率（erythrocytesedimentationrateESR）

［要求］

了解血沉的操作技術(shù)及讀取方法。

每組選一位同學(xué)在無菌操作下采取靜脈血作Westergren法血沉。

記住參考值及臨床意義。

［原理］血液經(jīng)枸椽酸鈉抗凝后，吸于特制的血沉管中，垂直豎立一小時(shí)，觀察其紅細(xì)

胞下沉的速度，以所暴露出的血漿段的高度（mm）表示。

［儀器、試劑］

靜脈穿刺用器材，包括壓脈帶、枕墊、無菌注射器（2ml）、2.5%碘酒，75%酒精及

消毒棉簽等。

特制的Westergren血沉管（全長(zhǎng)300nm,內(nèi)徑2.5mm,具有0-200mm刻度）。

Westergren血沉管（圖6）。

106mmol/L枸檬酸鈉溶液。

［方法］

向有2ml刻度的中號(hào)試管中準(zhǔn)確加入106mmol/L枸椽酸鈉0.4ml0

作靜脈穿刺后，取血約2ml,拔去針頭注入上述試管內(nèi)，使血量恰達(dá)2ml的化線處，

輕輕混勻。

用Westergrenxue血沉管準(zhǔn)確地吸此抗凝血至“0”刻厚處，擦凈管尖，垂直豎立

于血沉架上，記時(shí)。lh后讀取血漿段的高度，以mm表示。

圖6魏氏血沉架和血沉管

［注意事項(xiàng)］

注射器內(nèi)腔、血沉吸管內(nèi)腔均須干燥，以防溶血。

血量與抗凝劑比例應(yīng)嚴(yán)格遵守4：1,并充分混勻，如有小凝塊則因消耗了纖微蛋白

原而使血沉減慢。

血沉吸管必須垂直豎立，如有傾斜可致血沉增快。

血沉試驗(yàn)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行，抗凝血于室溫中最長(zhǎng)不得超過2h,否則水分蒸發(fā)，可使結(jié)果

減慢。

嚴(yán)重貧血病人紅細(xì)胞大小不均時(shí)，于lh后血漿與沉積的紅細(xì)胞之間未能形成整齊

的界面，此時(shí)要讀取靠近較緊密沉積的紅細(xì)胞層的刻度作為血沉數(shù)值。

中等度以上貧血的病人做血沉測(cè)定時(shí)，可做貧血校正試驗(yàn)，即將病人血用枸椽酸鈉

溶液按9：1比例抗凝，以3000r/min速度離心30min之后，將上層血漿完全吸出，然

后按正常人紅細(xì)胞比積情況，人為的將血漿與壓積紅細(xì)胞按各0.50L/L的比例（男性病

人）或按壓積紅細(xì)胞為0.40L/L,血漿為0.60L/L的比例（女性病人）混合后再作血沉測(cè)

定，報(bào)告時(shí)注明系貧血校正后血沉數(shù)值。

血沉測(cè)定時(shí)室溫以18-25C為宜，溫度越高血沉越快，反之減慢，但有高效價(jià)冷凝

集素時(shí)則相反。必要時(shí)需校正溫度。

［參考值］

男性0T5mm/lh

女性0-20mm/lh

五、紅細(xì)胞比積測(cè)定（hematocrit.HCT、PCV）

［要求］了解本試驗(yàn)的操作方法及其參考值、臨床意義。

［原理］抗凝血經(jīng)一定的速度和時(shí)間離心沉淀后，得出壓積的紅細(xì)胞體積，后者與全血

體積之比即為紅細(xì)胞比積。紅細(xì)胞比積的多少，主要與紅細(xì)胞數(shù)量和大小有關(guān)。

［儀器、試劑］

Wintrobe分血管，此管長(zhǎng)llOnm,內(nèi)徑2.5mm且上下均勻一致，管壁厚、管低外圓

內(nèi)平、管壁兩側(cè)刻有數(shù)字；右側(cè)最下為0最上為10；左側(cè)最上為0最下為10,可供同

時(shí)側(cè)Wintrobe血沉及紅細(xì)胞比積用（圖7）

特制灌血針（針頭細(xì)長(zhǎng)可直插到Wintrobe分血管管底）或毛細(xì)滴管。

雙草酸鹽抗凝劑

草酸鉀0.8g

草酸錢1.2g

溶于蒸儲(chǔ)水100ml中，分裝于中號(hào)試管內(nèi)，每管0.2ml,于80c烘干后可供2ml血

抗凝用。如只用草酸鉀時(shí)，每致紅細(xì)胞胞體稍縮?。恢挥貌菟徨儠r(shí)，可致稍膨大，兩者

按上述比例配合時(shí)則即可抗凝又能保持紅細(xì)胞體積不變。

圖7溫氏分血管及毛細(xì)滴管

［方法］

取病人靜脈血2ml與上述抗凝管內(nèi)，輕輕振蕩使抗凝劑粉末充分溶解抗凝。

充分混勻后，用特制灌血針吸血灌注于Wintrobe分血管中，使血面洽到“0”處，

塞以小塞以防止蒸發(fā)。

室溫中垂直靜置60min后，置2264G離心力下離心沉淀30min,一般采用有效半

徑22.5cm的直角離心機(jī)以3000/min速度離心30min讀取壓積紅細(xì)胞的高度，然后再以

同樣速度離心lOmin,如刻度不變時(shí)，即可按此數(shù)值計(jì)算結(jié)果。

紅細(xì)胞比積=紅細(xì)胞段的高度（以還原紅細(xì)胞層表面為準(zhǔn)）的mm數(shù)乘以0.01即為

每升血液中紅細(xì)胞體積的升數(shù)，以L/L為單位報(bào)告結(jié)果。

離心沉淀后壓積管中的血液自上而下依次分為五層：①最上層為血漿；②白色乳糜

層③灰白色層為白細(xì)胞（及有核紅細(xì)胞）；④紅細(xì)胞段最上面的紅黑色薄層乃氧合血紅

蛋白被白細(xì)胞代謝產(chǎn)物還原而成的還原紅細(xì)胞層⑤紅黑色薄層之下為紅色帶氧紅細(xì)胞

層。

［注意事項(xiàng)］

為正確計(jì)算紅細(xì)胞比積及紅細(xì)胞的各種平均指數(shù)(如MCV、MCH、MCHC)等，應(yīng)堅(jiān)持

用對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)無影響的雙草酸鹽粉劑作為抗凝劑，并應(yīng)充分混合，以保證無凝塊。

Wintrone分血管的內(nèi)腔必須干燥潔凈，以防溶血。

離心前垂直放置lh,為使紅細(xì)胞與白細(xì)胞、血小板分層下沉。

離心速度和時(shí)間必須嚴(yán)守規(guī)程。相對(duì)離心力(G)=0.00001118X有效半徑(cm)X

(每分鐘轉(zhuǎn)速)2o

為準(zhǔn)確的計(jì)算MCV、MCH1、MCHC數(shù)值，必須從此抗凝血中取血作紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅

蛋白測(cè)定，而不能從病人耳垂或指端采血。

分血管離心沉淀后紅細(xì)胞的界面必須是水平的，如非水平應(yīng)將界面最高與最低處的

讀數(shù)之和除以“2”，看結(jié)果時(shí)必須從灰白色層下的黑紅色層讀取數(shù)值。

通過本試驗(yàn)還可以得到一些其他參數(shù)：①如血漿深黃色表示病人有黃疽②血漿乳白

色表示血脂增高(乳糜微粒多)，可能由于非空腹取材，也可能患有動(dòng)脈粥樣硬化等；

③在白細(xì)胞正常的人，其灰白層僅為0.05Tmm,如白細(xì)胞增多，則可使灰白層增高，故

白細(xì)胞增高患者，若不靜置一小時(shí)以待分層，則對(duì)結(jié)果必將有所影響(使紅細(xì)胞比積值

增高)。慢性粒細(xì)胞性白血病時(shí)，其灰白層可達(dá)數(shù)十毫米之高。血小板顯著增多的病人

也有相似的影響。

［參考值］

紅細(xì)胞比積(hematocrit,PCV)

成年男性0.40-0.50L/L

成年女性0.37-0.48L/L

平均紅細(xì)胞體積(meancorpuscularvolume,MCV)82-82fl。

平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(meancorpuscularhemoglobin,MCH)27-31Pg0

平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(meancorpusculauhemoglobinconcentration,MCHC)

32-36%o

六白細(xì)胞計(jì)數(shù)(whitebloodcellcount)

［要求］能教熟練的掌握采血技術(shù)，進(jìn)一步熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板結(jié)構(gòu)，能進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)

并記住參考值、臨床意義。

顯微鏡計(jì)數(shù)法

［原理］將血液用稀釋(常用2%乙酸)溶液稀釋，使紅細(xì)胞溶解，白細(xì)胞形態(tài)更加清晰之

后，進(jìn)行計(jì)數(shù)以求得每升血液內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。

［儀器、試劑］

儀器同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。

白細(xì)胞稀釋液：

冰乙酸2ml

1%龍膽紫1ml

蒸儲(chǔ)水加至1000ml,過濾后備用

加龍膽紫是為了呈色，以便與其他稀釋液相區(qū)別。

［方法］

1.取小試管1支，準(zhǔn)確加入2%乙酸溶液0.33ml。

2.消毒皮膚后，穿刺取血20ul,拭凈管尖外余血，迅速放入稀釋液中，再用上清夜

將吸管內(nèi)腔洗凈，混勻，待溶液轉(zhuǎn)褐色后，再混勻充入計(jì)數(shù)室，待下沉2-3min后進(jìn)行

計(jì)數(shù)。白細(xì)胞為無色圓形小體，于高倍鏡觀察可見其核。通常于低倍鏡下計(jì)數(shù)四角的四

個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)按下式計(jì)算。

四個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)

4X10X20X104*6/*L=白細(xì)胞數(shù)/L

即四個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)X0.05X107L

上式中：得每個(gè)大方格（即0.lul）內(nèi)白細(xì)胞平均數(shù)。

X10為將一個(gè)大方格的容積0.lul換算為lulo

X20是血液稀釋倍數(shù)，即得lul血液的白細(xì)胞數(shù)。

106將lul血液中的白細(xì)胞數(shù)換算為1L血液中的白細(xì)胞數(shù)。如計(jì)數(shù)4個(gè)大方格為

160個(gè)白細(xì)胞，則白細(xì)胞數(shù)為1600.05X109=8X1010/L

［注意事項(xiàng)］

1.取血及充入計(jì)數(shù)室等項(xiàng)與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。

2.一定要在稀釋液轉(zhuǎn)為褐色后方能計(jì)數(shù)，否則可因紅細(xì)胞殘存而干擾技術(shù)，甚至錯(cuò)

誤的將紅細(xì)胞計(jì)入而使結(jié)果偏高。

3.如病人白細(xì)胞過少可取2倍量的血，計(jì)數(shù)后結(jié)果除以2。如遇白細(xì)胞過多則可按

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)其中央大方格的5個(gè)中方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)之和進(jìn)行換算求得白細(xì)胞數(shù)。

4.有核紅細(xì)胞在2%乙酸溶液中并不破壞，故如病人血液中有較多的有核紅細(xì)胞時(shí)-，

對(duì)其“白細(xì)胞數(shù)值”須進(jìn)行校正，方法如下：①如常法求的白細(xì)胞數(shù)/L（實(shí)為包括幼紅

細(xì)胞在內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)/L）；②同時(shí)推一血涂片，用瑞-姬氏復(fù)合染液染色后進(jìn)行白細(xì)

胞分類，記錄在分類100個(gè)白細(xì)胞的過程中所見到的有核紅細(xì)胞；③按下式求白細(xì)胞數(shù)

/L

校正前“有核細(xì)胞數(shù)”L為：100

100+分類100個(gè)白細(xì)胞過程中見到有核紅細(xì)胞

舉例：

校正前“有核細(xì)胞數(shù)”為13X107L,分類計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞過程見到有核紅細(xì)胞

30個(gè)。

100

則：白細(xì)胞數(shù)L=13X109/LX=IOXIO9/L

100+30

［參考值］

成人(4.0-10.0)X107L

初生兒(15-20)X107L

6個(gè)月-2歲幼兒(11-12)X107L

七白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)(Whitecelldifferentialcount,DC)

［要求］

初步掌握血涂片制作及染色技術(shù)。

學(xué)會(huì)辨認(rèn)外周血中各種白細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)及其分類計(jì)數(shù)的方法。

記住參考值和臨床意義。

為觀察血細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識(shí)別細(xì)胞種類和堅(jiān)定各種異常細(xì)胞，需將血涂片染色。最

常用瑞-姬氏復(fù)合染液染色法。

［原理］

Wright-Giemsa(瑞-姬氏)復(fù)合染液的染液是由酸性伊紅和堿性美藍(lán)所組成。伊紅

的鈉鹽有色部分為陰離子，可與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合；氯化美蘭有色部分為陽(yáng)離子，可

與帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。二者溶解在甲醇中形成可溶性的伊紅美蘭溶液，即可以固定細(xì)

胞有利于細(xì)胞蛋白質(zhì)選擇性的吸附其中有色離子而著色。氯化美蘭放置久后可氧化為天

青，對(duì)細(xì)胞核染色加強(qiáng)，添上更多色彩，染色效果更好。

細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親合作用。各種細(xì)胞成分因化學(xué)性質(zhì)

不同，對(duì)染料的親和力也不一樣。故可呈不同的著色特點(diǎn)。例如血紅蛋白、嗜酸性顆粒

均為堿性物質(zhì)，故與酸性染料伊紅結(jié)合而染成紅色。細(xì)胞核的核蛋白與原、幼細(xì)胞的胞

質(zhì)為酸性物質(zhì)，故與堿性染料美蘭和天青相結(jié)合，染成深蘭色或深紫紅色。中性顆粒與

美蘭和伊紅同時(shí)結(jié)合而染為淡紫紅色。瑞氏染粉是由伊紅化美蘭組成，對(duì)胞質(zhì)及中性顆

粒的著色性極佳，而姬姆薩染粉由天青、伊紅組成，對(duì)細(xì)胞核著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更清

晰。采用瑞-姬氏復(fù)合染液可兼取兩者之長(zhǎng)、取得更好的染色效果、由于蛋白質(zhì)所帶電

荷隨溶液的PH而定，在偏酸性環(huán)境中所帶正電荷增多而親和帶負(fù)電荷的的染料伊紅故

著色偏紅。在偏堿性環(huán)境中其負(fù)電荷增多而親和帶正電荷的美蘭，而至細(xì)胞著色偏灰藍(lán),

故為使血片每次染色效果好且趨于一致，需配制PH6.4-6.8的緩沖液，是細(xì)胞蛋白質(zhì)在

此恒定的環(huán)境中著色。

［儀器、試劑］

光學(xué)顯微鏡

瑞、姬氏復(fù)合染液瑞氏染粉0.5g,姬姆薩染粉2g,堿性美蘭0.5g,混勻后加10ml

甘油在乳缽內(nèi)研磨，再用甲醇500ml稀釋后，室溫放置一周備用。

磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)；磷酸二氫鉀0.3g,磷酸氫二鈉0.2g蒸儲(chǔ)水加于1000ml,

備用。

香柏油、二甲苯及擦鏡頭用紙。

光潔中性無油垢的載玻片及一端平齊稍窄于載玻片的推片，玻璃蠟筆。

［方法］

常規(guī)消毒皮膚，穿刺后拭去第一滴血。

用載波片的一端刮取血液一小滴。

將推片的平齊端置載玻片上血滴的稍前方，將推片略向后移使與血液相接觸，血液

遂于推片與載玻片的夾角間散開。

以約30度的夾角向前均勻的推動(dòng)即可制成血涂片，其薄厚度要適中，襯以白紙時(shí)

應(yīng)呈淡的紅黃色，目有頭體尾之分。(圖8)

圖8血片制備

血涂片干后，于血膜兩端用玻璃蠟筆各劃一線，以防染液流失，滴加瑞-姬氏復(fù)合

染液數(shù)滴于血涂片上（以蓋住血膜為度），靜置約Imin,目的在于用染液的甲醇成分固

定血細(xì)胞。

加相當(dāng)于染液1.5-2倍量的緩沖液充分混勻。

染色約5Tomin,屆時(shí)將載有染液的涂片置低倍鏡下觀察，若見白細(xì)胞的核著色清

晰、核漿分明即可用水沖去染液，干燥后鏡檢。

鏡檢時(shí)先用低倍鏡選好厚薄適宜、染色良好細(xì)胞分布均勻處，滴加香柏油一滴，用

油浸鏡觀察。通常計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞（必要時(shí)可增到200或更多），按圖9所示方向移

動(dòng)血涂片，同時(shí)將所遇到的各類白細(xì)胞分別記錄、直到計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞為止，計(jì)算每

類白細(xì)胞的數(shù)目，即其百分?jǐn)?shù)值。

圖9白細(xì)胞分類的鏡檢順序

各類白細(xì)胞的形態(tài)學(xué)：

中性粒細(xì)胞在瑞-姬氏染色血涂片上胞體成圓形，直徑10-13um,胞質(zhì)染粉紅色，

核形一葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見，染為深紫紅色，胞質(zhì)中有許多細(xì)小紫

紅色顆粒。

嗜酸性粒細(xì)胞較中性粒細(xì)胞稍大，胞核多為兩葉，著色較淡，胞漿內(nèi)充滿粗大均勻

的嗜酸性顆粒，瑞-姬氏染色時(shí)呈橘紅色有折光性。

嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞-姬氏法染色是呈黑蘭色。與

光學(xué)顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活躍而脫顆粒所

致，核成淡紫紅色常看不清，呈桿狀亦或分葉狀。

淋巴細(xì)胞胞體呈圓形，直徑介于6T5um之間，分為大、中、小三型。再成人血涂

片中以小淋巴細(xì)胞多見，直徑6-9um,核大成深紫色致密而濃染，胞漿量很少，若可見,

呈淡蘭色；大淋巴細(xì)胞直徑12T5um,胞質(zhì)量較多，呈清撤的淡蘭色，可見少量嗜苯胺

藍(lán)顆粒，中淋巴細(xì)胞的大小及特點(diǎn)介于、小淋巴細(xì)胞之間。

單核細(xì)胞在瑞-姬氏染色血涂片上直徑為12-20um,胞體圓形、橢圓形，但常可見到

偽足，胞質(zhì)一般較多，呈淡灰蘭色，內(nèi)含較多細(xì)小的的嗜苯胺藍(lán)顆粒，可見小空泡。核

形多種多樣，最重要的特點(diǎn)是染色質(zhì)較細(xì)疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀故著色較深。

分類計(jì)數(shù)時(shí)以畫“正”字作如下記錄：

中性桿狀核F

中性分葉核正正正正正正正正正正正正正

嗜酸粒細(xì)胞一

嗜堿粒細(xì)胞

淋巴細(xì)胞正正正正正

單核細(xì)胞正一

［注意事項(xiàng)］

1.作血涂片時(shí)勿用傷口第一滴血，以免混有來自受損血管的內(nèi)皮細(xì)胞。

2.血涂片薄厚適度，過厚時(shí)細(xì)胞簇集影響形態(tài)觀察，過薄則白細(xì)胞太少不易分類。

影響血涂片薄厚的因素為：①血滴過大、夾角過大、推片速度過快則厚；②血滴太小、

夾角過小、推片過慢則薄。

3.加瑞-姬氏染液或緩沖液之后，切勿干燥，否則血涂片中每有殘?jiān)?，將干擾鏡檢。

4.染色時(shí)間的長(zhǎng)短，視染液性能而定，應(yīng)以低倍鏡觀察其染色良好為度。

5.要以流水沖去染液，而不可先棄去染液再?zèng)_水，以免留有殘?jiān)?/p>

6.分類時(shí)一定要用油鏡觀察，以便同時(shí)觀察白細(xì)胞有無質(zhì)變及紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)。

7.染色條件良好時(shí)，其紅細(xì)胞呈淡琥珀色，中性粒細(xì)胞的胞質(zhì)呈淡粉色，其中性顆

粒很細(xì)小，不易察覺，核染為深紫紅色，核漿分界清晰。嗜酸性顆粒呈鮮艷的桔紅色且

有折光性。染色結(jié)果偏酸時(shí)，紅細(xì)胞偏紅，嗜酸性顆粒呈鮮艷的桔紅色，但各種白細(xì)胞

的核僅染成極淡藍(lán)色或根本不著色。常見于甲醇質(zhì)量不純，載物片有殘余酸或緩沖液PH

過低所致。染色結(jié)果偏堿時(shí)，紅細(xì)胞呈灰藍(lán)色，中性粒細(xì)胞顆粒為黑藍(lán)色較粗大，似中

毒顆粒，核染為深紫藍(lán)色，著色均勻結(jié)構(gòu)不清，嗜酸性顆粒失去鮮艷色彩而呈駝色、褐

色、甚至黑藍(lán)色，常因染液偏堿或玻璃片有殘余堿所致。

8.因胞體較大的白細(xì)胞如嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞于涂片的上下邊緣

處多見，而胞體較小的白細(xì)胞如淋巴細(xì)胞則以涂片中心地帶為多，分類計(jì)數(shù)時(shí)切不可只

在某一局部，而應(yīng)按規(guī)定方向推動(dòng)血涂片來進(jìn)行觀察。

9.分類報(bào)告時(shí)如紅、白細(xì)胞有大、小、形態(tài)、染色等質(zhì)的改變應(yīng)同時(shí)描述。

10.白血病病人血涂片因細(xì)胞常不易著色，應(yīng)酌情延長(zhǎng)其染色時(shí)間。

11.凡白細(xì)胞總數(shù)低的病人作分類計(jì)數(shù)時(shí)，切不可以加厚血涂片的方式來解決，因

涂片過厚時(shí);細(xì)胞簇集，著色常不理想而影響分類辨認(rèn)。應(yīng)多推若干張薄厚適宜的血涂

片來進(jìn)行分類。

［參考值］

成人中性桿狀核粒細(xì)胞1-5%0.01-0.05

中性分葉核粒細(xì)胞50-70%0.50-0.70

嗜酸性粒細(xì)胞0.5-5%0.005-0.05

嗜堿性粒細(xì)胞0-1%0-0.01

淋巴細(xì)胞20-40%0.20-0.40

單核細(xì)胞3-8%0.03-0.08

八、自動(dòng)血細(xì)胞分析儀

自動(dòng)血細(xì)胞分析儀按其計(jì)數(shù)原理可分為光電型、電容型、電阻型和激光型四種。好

的分析儀可對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)的分析。如紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、

血小板計(jì)數(shù)（pit）、血紅蛋白定量（Hgb）、紅細(xì)胞平均體積（MCV）、紅細(xì)胞分布寬

度（PDW）、血小板壓積（Pct）、血小板平均體積（MPV）、血小板分布寬度（PDW）、

白細(xì)胞的三分和五分類的絕對(duì)數(shù)與百分比、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及其三亞群分類等，并可對(duì)

紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板分布圖示。對(duì)懷疑嗜酸性粒細(xì)胞＞700/ul,嗜堿性粒細(xì)

胞＞200/ul,異常淋巴細(xì)胞增多，出現(xiàn)原始細(xì)胞，不成熟粒細(xì)胞，有核紅細(xì)胞，可能有

血小板聚集或巨大血小板，紅細(xì)胞大小不等，低色素性紅細(xì)胞等貧血情況提供懷疑警告，

以便提醒進(jìn)一步進(jìn)行顯微鏡檢查。

（一）、紅細(xì)胞與白細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)

［原理］目前我國(guó)主要應(yīng)電阻型血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，它是利用血細(xì)胞為不良導(dǎo)體的特征，讓

含有血細(xì)胞的電解質(zhì)溶液通過一微孔（計(jì)數(shù)紅、白細(xì)胞時(shí)其孔徑為lOOum,計(jì)數(shù)血小板

時(shí)為70um）孔內(nèi)外分別安放電極一個(gè)，如微孔內(nèi)僅有電解質(zhì)溶液而無細(xì)胞通過時(shí)電阻恒

定，當(dāng)血細(xì)胞進(jìn)入微孔時(shí)，小孔兩端的電阻即發(fā)生變化，將此電阻變化轉(zhuǎn)換為電壓脈沖

訊號(hào)，經(jīng)過電路放大甄別及數(shù)據(jù)處理最后將結(jié)果用數(shù)字顯示。

［試劑］

1.稀釋液（紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)通過）

氯化鈉10g

枸椽酸鈉5g

40四甲醛5ml加蒸鍋水致1000ml混勻、用G4或G5號(hào)漏斗過濾除

尖密閉保存.亦可用濾過的除塵的生理鹽水溶解代替。

2.溶血?jiǎng)ò准?xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定用0.5%皂素溶液或4.0%澳代十六烷三甲胺

基冰乙酸溶液（以2%冰乙酸配）。

［方法］

往粗口徑試管中加入稀釋液10ml,放入血液20ul混勻（A管）。取此液0.1ml加

稀釋液9.9ml（B管）。

將B管液緩緩傾注于自動(dòng)計(jì)數(shù)儀的計(jì)數(shù)杯內(nèi)，放置于已調(diào)好孔電流和閾電壓的計(jì)數(shù)

儀的載臺(tái)上，按計(jì)數(shù)扭后即可得紅細(xì)胞數(shù)值和有關(guān)參數(shù)。

往A管內(nèi)滴加溶血?jiǎng)?滴，待3-5min溶液完全透明后即可進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅

蛋白測(cè)定。

［注意事項(xiàng)］

為防止粉塵污染，自動(dòng)計(jì)數(shù)儀應(yīng)安放于相對(duì)密閉的環(huán)境，采血時(shí)切勿混入面纖維或

粉塵。

為保證儀器性能，除需要穩(wěn)壓電源外，還必須經(jīng)常進(jìn)行有質(zhì)量控制的測(cè)試，以保證

檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

計(jì)數(shù)溶液中切記混有氣泡，否則可致結(jié)果偏高。

滴加溶血?jiǎng)┲?，一定要待溶液完全透明才可?jì)數(shù)。

有核紅細(xì)胞遇溶血?jiǎng)┎⒉黄茐?，故?jì)數(shù)時(shí)混于白細(xì)胞之內(nèi)，導(dǎo)致計(jì)數(shù)值偏高，此時(shí)

應(yīng)密切結(jié)合臨床及染色血涂片中所見有核細(xì)胞數(shù)進(jìn)行較正后再報(bào)告白細(xì)胞數(shù)。

白血病患者可能因白血病細(xì)胞大小懸殊及粘聯(lián)成堆等導(dǎo)致計(jì)數(shù)誤差，此時(shí)以顯微鏡

計(jì)數(shù)法結(jié)果為準(zhǔn)。

（二）、白細(xì)胞分群

目前自動(dòng)化儀器還不能象手工法那樣準(zhǔn)確地對(duì)每一個(gè)白細(xì)胞分類古我們稱之為白

細(xì)胞分群。

全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞三分群現(xiàn)已應(yīng)用于臨床篩選病人，其分群計(jì)數(shù)的基本

原理是：根據(jù)溶血?jiǎng)┨幚砗蟀櫩s白細(xì)胞體積大小分為三群細(xì)胞，如Coulter血細(xì)胞分析

儀將35-90fl大小的顆粒定義為淋巴細(xì)胞群（小細(xì)胞群），91T6fl大小的顆粒定義為

中間細(xì)胞群，161-450門大小的顆粒定義為粒細(xì)胞群（大細(xì)胞群），不同儀器對(duì)細(xì)胞大

小的定義略有差別。三分群對(duì)白細(xì)胞質(zhì)量異常有一定的篩選作用，但在臨床應(yīng)用中局限

性很大，如當(dāng)血小板聚集或?yàn)榫薮笱“?，有核紅細(xì)胞或末溶血的紅細(xì)胞增多時(shí)均可干

擾淋巴細(xì)胞群的分類。當(dāng)異型淋巴細(xì)胞，原始或幼稚白細(xì)胞、嗜酸或嗜堿性粒細(xì)胞異常

增多時(shí)，中間細(xì)胞群數(shù)可明顯增高；幼稚粒細(xì)胞及成熟粒細(xì)胞增多時(shí)粒細(xì)胞可顯著增高。

當(dāng)白細(xì)胞分群結(jié)果異常時(shí)，白細(xì)胞體積分布直方圖也常有異常，如某一峰分面積增大，

淋巴細(xì)胞群和粒細(xì)胞群兩峰合并為單峰等。遇三分群白細(xì)胞數(shù)量或直方圖異常時(shí)一，必須

進(jìn)行血涂片染色后顯微鏡下分類，以確定異常之原因。

關(guān)于白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的儀器發(fā)展很快，除了在三分群基礎(chǔ)上進(jìn)一步提高分辨率發(fā)展

了五分群的分析儀外，還有采用直接將瑞-姬氏染色片置油鏡下有規(guī)律地移動(dòng)，通過電

腦對(duì)1千甚至一萬個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行序貫分析的原形識(shí)別型分類計(jì)數(shù)儀和將定量抗凝血分別

與三種組織化學(xué)染色液混合染色，在經(jīng)過對(duì)其吸光與散射特性的檢測(cè)進(jìn)行分析的細(xì)胞化

學(xué)識(shí)別型分類計(jì)數(shù)儀等，總之這些儀器優(yōu)點(diǎn)與不足，隨著科學(xué)的發(fā)展白細(xì)胞分類技術(shù)一

定會(huì)進(jìn)一步得到發(fā)展與完善。

第二章血栓與止血檢查

一、血小板計(jì)數(shù)（platelelcount）

［原理］用一定量的血小板稀釋液，破壞血中的紅細(xì)胞后，沖入記數(shù)室，于高倍鏡下計(jì)

數(shù)一定區(qū)域內(nèi)的血小板后，求出每升血液的血小板數(shù)。

［儀器、試劑］

1、儀器同血細(xì)胞計(jì)數(shù)項(xiàng)。

2、試劑草酸鍍稀釋液

草酸鍍[(NH4)2C204?H20]1.Omg

甲醛0.Img

EDTA-Na214.Omg

蒸錦水加至100ml

將上述試劑先用少量蒸儲(chǔ)水溶解，然后加至100ml,另加亞甲蘭染液數(shù)滴使呈亮蘭

色，過濾后備用。

［方法］

1、小試管中準(zhǔn)確加入上述稀釋液0.38ml。

2、常規(guī)法消毒皮膚后，用刺針作約2mm深穿刺，第一滴血棄去。

3、用微量吸管吸血20四，擦凈管尖余血，迅速加入稀釋液中，并用稀釋液洗凈吸管

內(nèi)腔，輕輕混勻，等待溶血透明后，再混勻，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)室內(nèi)，待血小板下沉。

4、下沉15min后，將計(jì)數(shù)板置鏡臺(tái)上用低倍鏡找好計(jì)數(shù)區(qū)（中間大方格）后轉(zhuǎn)高倍

鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)其5個(gè)中方格內(nèi)的血小板數(shù)，如以P代表，則血小板計(jì)數(shù)為：PX5（變

為0.1同）X10（變?yōu)?可）X20（稀釋倍數(shù)）X10,（將可換算為L(zhǎng)）=PXIO7L

［參考值］（100-300）X107L

［注意事項(xiàng)］

1、血小板易粘附變性，故整個(gè)操作過程均須迅速，血流要通暢，口勿混摻消毒酒精。

所用試管、微量吸管及計(jì)數(shù)板均需中性潔凈。

2、血小板體積小，故充入計(jì)數(shù)室后必須使其下沉15min后再行計(jì)數(shù)，否則結(jié)果偏低。

由于胞體小不易觀察，必須堅(jiān)持用高倍鏡計(jì)數(shù)。

3、計(jì)數(shù)時(shí)要注意區(qū)別真?zhèn)?，血小板為圓形或橢圓形的灰色小體，有柔和的折光性,

大小約為紅細(xì)胞的1/4-1/5。粉塵或異物則每呈黑色，當(dāng)轉(zhuǎn)動(dòng)微螺旋時(shí)有強(qiáng)折光性，且

其最清新的視距與血小板不在一個(gè)平面上。

二、血漿凝血酶原時(shí)間（plasmnprathrombintime,PT）

［原理］凝血第二階段在凝血酶原激活物的作用下，血漿凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?，后?/p>

使纖維蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白而凝血。這一過程所經(jīng)歷的時(shí)間即為血漿凝血酶原時(shí)間。本

試驗(yàn)是在血漿中加入組織因子（凝血質(zhì)，即兔腦浸液或人胎盤浸液）及鈣溶液，形成外

源性凝血酶原激活物之后而使凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟傅?。故屬檢查凝血第一階段外源性

凝血途徑有無障礙的試驗(yàn)。主要用于檢測(cè)vn、v、x因子有無異常，但凝血酶原及纖維

蛋白原的含量如何，也影響其結(jié)果。

［儀器、試劑］

1、靜脈穿刺用有關(guān)器材。

2、硅化試管或塑料試管、尖吸管、0.2mL吸管、細(xì)尖彎玻璃棒（或彎曲的針頭）。

3、109mmol/L枸椽酸鈉溶液（抗凝用）。

4^25mmol/L氯化鈣：氯化鈣1.11g,溶于400mL蒸懦水中。

5、凝血酶液：兔腦粉150mg溶于新制生理鹽水2.5ml中?；靹蛑?5℃水浴中30min

并經(jīng)常搖動(dòng)，介時(shí)取出以500r/min速度離心Imin或靜置沉淀后取上層乳白色液備用。

6、健康人混合凍干血漿。

［方法］

（一）試管法

1、取病人空腹血1.8ml加入盛有109mmol/枸椽酸鈉溶液0.2ml的試管內(nèi)，輕輕搖

勻，以3000r/min的速度離心沉淀分離血漿。

2、于37c水浴預(yù)熱健康人混合凍干血漿、病人血漿0.1ml、0.025mol/L氯化鈣溶

液O1ml及凝血酶液0.1ml。

3、用尖細(xì)的彎玻璃棒將以上三液混合，并立刻開動(dòng)秒表開始記時(shí)，不斷輕挑此混

合物，直到出現(xiàn)纖維絲為止，立即停表讀取所經(jīng)歷的時(shí)間即為凝血酶原時(shí)一間，重復(fù)兩次，

要求其時(shí)差一般在1秒以內(nèi)。

4、質(zhì)控血漿用上法同樣處理。

5、報(bào)告方式

⑴PT秒數(shù)病人XXS

質(zhì)控血漿XXS

病人PT（S）

⑵凝血酶原時(shí)間比值（PTR）PTR=----------------------

質(zhì)控血漿PT（S）

⑶國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）INR=PTRISR

*ISR為凝血質(zhì)的國(guó)際敏感數(shù)，市售凝血酶已注明其ISR。

也有人習(xí)慣以活動(dòng)度（PA）報(bào)告。PA=PTRX100%

（二）血凝儀法

1、同試管法。

2、同試管法。

3、按血凝儀法的操作方法測(cè)定健康人混合血漿的PT值。

4、以同樣方法測(cè)定待測(cè)血漿的PT時(shí)間。

［注意事項(xiàng)］

1、枸椽酸鈉與血的比例嚴(yán)格按1:9,抗凝劑過多，凝固時(shí)間延長(zhǎng)?？鼓怀浞钟行?/p>

凝塊時(shí)，結(jié)果明顯延長(zhǎng)或根本不凝。

2、標(biāo)本不可溶血，嚴(yán)重溶血可致凝固時(shí)間縮短。

3、水浴溫度應(yīng)恒定，可37℃±10℃,溫度過高、過低均可使凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)。

4、取得標(biāo)本后應(yīng)盡快進(jìn)行測(cè)定，因V因子極不穩(wěn)定，室溫越高越易破壞。

5、由于凝血質(zhì)質(zhì)量不盡相同，故本實(shí)驗(yàn)每次必須做正常對(duì)照。凡病人結(jié)果較正常

對(duì)照延長(zhǎng)達(dá)3秒或更長(zhǎng)時(shí)有意義。

6、國(guó)際上規(guī)定用試管法進(jìn)行PT測(cè)定。我國(guó)目前手工法測(cè)定仍多用試管法。近年來

廣泛采用的自動(dòng)或半自動(dòng)凝血儀則用試管法測(cè)定。

［參考值］

⑴PT11-14S

⑵PTR1±0,15

(3)INR0.8-1.5

(4)PA80%-120%

三、活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定(activatedpartialthromboplastintime,APTT)

［原理］APTT試驗(yàn)是一個(gè)篩選的測(cè)試，用來測(cè)量血液中的內(nèi)源性凝血因子。在37C條

件下，以白陶土為激活劑激活因子刈和XI,以腦磷酯(部分凝血活酶)代替血小板，提

供凝血的催化表面。在鈣離子參與下，觀察血小板血漿凝固所需要的時(shí)間，即為APTT

或白陶土部分凝血活隨時(shí)間。

［儀器、試劑］

1、靜脈穿刺用有關(guān)器材。

2、硅化試管或塑料試管、尖吸管、0.2mL吸管、細(xì)尖彎玻璃棒(或彎曲的針頭)。

3、109mmol/L枸檬酸鈉溶液(抗凝用)。

4、25mmol/L氯化鈣:氯化鈣1.11g,溶于400mL蒸儲(chǔ)水中。

5、APTT試劑(含白陶土或糅酸及腦磷脂)。

6、健康人混合凍干血漿。

［方法］

(―)試管法

1、取病人空腹血L8ml加入盛有106mm01/枸椽酸鈉溶液0.2ml的試管內(nèi)，輕輕搖

勻,以3000r/min的速度離心沉淀分離血漿。

2、于37℃水浴中預(yù)熱病人血漿和APTT試劑各0.1ml,輕輕混勻。

3、于3min時(shí)加入預(yù)溫的25mmol/L氯化鈣0.1ml,混勻，并立刻開動(dòng)秒表開始記時(shí),

在37c水浴中不斷輕挑此混合物，直到出現(xiàn)纖維絲為止，立即停表讀取時(shí)間，重復(fù)兩次,

要求其時(shí)差一般在1秒以內(nèi)。

4、用同樣方法測(cè)定病人APTT值。

(二)血凝儀法

1、同試管法。

2、同試管法。

3、按血凝儀法的操作方法測(cè)定健康人混合血漿的APTT值。

4、以同樣方法測(cè)定病人血漿的APTT時(shí)間。

［注意事項(xiàng)］

1、采血要順利，抗凝劑與血漿之比為1：9?？鼓浞?，決不可有凝塊。3000轉(zhuǎn)

離心15分鐘除去血小板獲乏血小板血漿。使用硅化玻璃管或塑料試管以防血小板激活。

2、采血后盡快測(cè)定，最遲不應(yīng)超過2h。

3、血漿加APTT試劑后預(yù)溫時(shí)間不應(yīng)少于3mino

［參考值］

待測(cè)值較正常對(duì)照值延長(zhǎng)10秒以上有病理意義。

四、血漿纖維蛋白原測(cè)定(fibrinogen,Fg)

［原理］在稀釋血漿中加入凝血酶和鈣離子，使纖維蛋白原變成纖維蛋白凝塊。通過測(cè)

定血液凝固時(shí)間，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線在線性區(qū)范圍內(nèi)，測(cè)出纖維蛋白原含量。

［儀器、試劑］

1、硅化試管或塑料試管、秒表、37℃水浴箱。

2、凍干凝血酶。

3、凍干參比血漿。

4、血漿稀釋液(pH7.35)

醋酸鈉3.89g

巴比妥鈉5.89g

氯化鈉6.8g

lmol/L鹽酸21.5m1

蒸儲(chǔ)水加至1000ml

［方法］

1、蒸儲(chǔ)水復(fù)溶凍干凝血酶。

2、血漿稀釋液將凍干參比血漿按1：5、1：10、1：20、1：40稀釋。

3、將待測(cè)血漿作1：10稀釋。

4、于37℃水浴中預(yù)熱稀釋血漿0.2ml和凝血酶0.1ml。

5、預(yù)溫3min后將兩者輕輕混勻，并立刻開動(dòng)秒表開始記時(shí)，在37℃水浴中不斷輕

挑此混合物，直到出現(xiàn)纖維絲為止，立即停表讀取時(shí)間。

6、以參比血漿檢測(cè)結(jié)果制成標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程（以凝固時(shí)間s為縱坐標(biāo)，稀釋

的濃度為橫坐標(biāo)），待測(cè)血漿檢測(cè)結(jié)果可在曲線上讀出。

［注意事項(xiàng)］

1、采血要順利，抗凝劑與血漿之比為1：9。抗凝要充分，決不可有凝塊。3000轉(zhuǎn)

離心15分鐘除去血小板獲乏血小板血漿。使用硅化玻璃管或塑料試管以防血小板激活。

2、參比血漿和待測(cè)血漿一起檢測(cè)，以保證結(jié)果可靠。

3、檢測(cè)標(biāo)本時(shí)間延長(zhǎng)，可考慮作1：5稀釋測(cè)定。

［參考值］

2?4g/L。

五、血漿D-D二聚體檢測(cè)（D-dimer）

［原理］抗D-二聚體單克隆抗體具有較高的特異性，僅與血漿中纖維蛋白裂解產(chǎn)物D-

二聚體發(fā)生反應(yīng)，與纖維蛋白原裂解產(chǎn)物不發(fā)生反應(yīng)。此單克隆抗體以膠乳凝集法測(cè)定

血漿中D-二聚體。當(dāng)血漿中D-二聚體含量大于0.5ug/ml時(shí)-，標(biāo)記的膠乳凝集則為陽(yáng)性。

本試劑盒用于血漿中D-二聚體快速定性與半定量測(cè)定。

［儀器、試劑］

1、試管、刻度吸管、干燥滅菌注射器、微量加樣器、離心機(jī)等。

2、D-二聚體含量測(cè)定試劑盒（乳膠試劑：1瓶、緩沖液：1瓶、陽(yáng)性對(duì)照：1瓶、

陰性對(duì)照：1瓶、測(cè)試板：1包、攪拌棒：1包）。

［方法］

1、稀釋血漿：血漿100ul+緩沖液100ul。

2、測(cè)試板上加稀釋血漿20ul與Latex乳膠試劑20ulo

3、用攪拌棒混勻后不停旋勻。

4、定性：3-5分鐘后出現(xiàn)清晰凝集顆粒為陽(yáng)性。

5、半定量：將待檢血漿用緩沖液作1:2、1:4、1:8等系列倍比稀釋，同上法測(cè)定，

以陽(yáng)性時(shí)的最大稀釋倍數(shù)報(bào)告半定量結(jié)果。

［注意事項(xiàng)］

1、所有試劑均應(yīng)放至室溫才做。測(cè)試溫度應(yīng)高于20℃,低溫環(huán)境應(yīng)延長(zhǎng)時(shí)間1-2

分鐘觀察結(jié)果。

2、加膠乳試劑前應(yīng)混勻，但需小心，輕輕旋轉(zhuǎn)，不能用力顛倒混勻，振蕩。

3、用枸椽酸鈉，EDTA,肝素抗凝均可，但抗凝劑總量不應(yīng)超過10%。

4、標(biāo)本血漿室溫（20-25℃）保存8h,2-8℃48小時(shí)，-20℃可保存一個(gè)月。冰凍

血漿從冰柜中取出，置于37℃水浴中迅速?gòu)?fù)溶。

［參考值］

陰性（D-二聚體含量＜0.5mg/L）

第三章尿液及糞便常規(guī)檢查

一、尿液檢查

（一）、標(biāo)本的采集

1、標(biāo)本的種類

隨機(jī)尿即留取任何時(shí)間的尿液。由于方便，門診病人常用，但易受各種因素的影

響，致使低溶度或臨界溶度的病理性物質(zhì)和有形成分易被漏檢。

晨尿收集早晨起床后的第一次尿標(biāo)本。人處于晚間睡眠狀態(tài)，尿液傾向于濃縮

和酸化。血細(xì)胞、上皮細(xì)胞及管形等有有形成分在酸性環(huán)境中較為穩(wěn)定，此種標(biāo)本最適

于腎病患者尿液的一般檢查。

餐后尿通常再餐后2小時(shí)收集尿標(biāo)本，此標(biāo)本對(duì)病理性蛋白尿和糖尿的檢出更為

敏感。這是由于餐后增加負(fù)荷，使已降低閾值的腎臟不能承受，病理性成分易于發(fā)現(xiàn)。

定時(shí)尿應(yīng)從排空尿液開始計(jì)算時(shí)間，將全時(shí)間內(nèi)各次尿液和到時(shí)間后排空膀胱中

的尿液全部送檢。定時(shí)尿最長(zhǎng)應(yīng)用的是4h、12h、24h尿。主要用于尿中有形成份和一

些化學(xué)成分的定量。

2、采集方法

女性應(yīng)避免月經(jīng)及陰道分泌物混入。必要時(shí)沖洗外陰后，留中段尿檢查。留12h或

24h尿時(shí)應(yīng)適當(dāng)放防腐劑（如甲苯2ml/100ml尿液、40%甲醛液0.2-0.05ml/100ml尿

液、10%鹽酸10ml/24h尿液）。若作細(xì)菌培養(yǎng)，則必須用無菌瓶按無菌操作留取中段尿，

必要時(shí)用無菌手術(shù)導(dǎo)尿送檢。

（二）、尿液物理學(xué)與化學(xué)檢查

尿量正常成人每晝夜量量常在1000-2000ml之間，平均為1500ml。尿量增多見

于糖尿病、尿崩癥、慢性腎炎（尿液縮功能障礙）等。尿量減少見于急性腎炎、高熱、

水腫、休克及各種原因所致的急性腎功能不全。無尿見于嚴(yán)重急性腎功能不全。

顏色正常尿液為淡黃色。病理性可見乳糜尿、血尿、血蛋白尿及膽紅素尿等。

透明度正常新鮮尿液多透明，放置后可出現(xiàn)微量絮狀沉淀。若新鮮尿明顯混濁可

見以下情況：①尿酸鹽沉淀，以粉紅色結(jié)晶析出，多見于酸性尿液冷卻后。加熱或加堿

后混濁消失；②磷酸鹽和碳鹽沉淀，淡灰白色結(jié)晶析出，多見于堿性或中性尿液。加酸

后混濁消失，若為碳酸鹽可產(chǎn)生氣泡磷酸則無氣泡產(chǎn)生；③膿尿和菌尿呈云絮狀沉淀，

加熱加酸其混濁均不消失。

比密測(cè)定

將尿混勻后沿管壁慢慢倒入尿量筒內(nèi)，避免發(fā)生氣泡，如有氣泡可用毛細(xì)吸管或吸

水紙吸去。

將比密計(jì)（上有L000T.060刻度）輕輕放于尿液內(nèi)，使其懸浮于中央，勿觸及筒

壁或筒底

等比密計(jì)停穩(wěn)后，讀取與尿液凹面先切的刻度，即為被測(cè)尿液的比密。

結(jié)果判斷：正常人比密為L(zhǎng)015T.025之間。急性腎炎尿量少，比密高；而慢性腎

炎尿量多，比密低；糖尿病病人，尿量雖多，但尿內(nèi)含有糖，故比密高。尿崩癥、慢性

腎功能不全，尿比密常在L010左右形成低比密尿。

注意事項(xiàng)：①尿量太少，不足以浮起比密計(jì)劃時(shí)，可用蒸儲(chǔ)水將尿液稀釋一倍后，

再行測(cè)定。其結(jié)果應(yīng)將讀數(shù)末尾兩位數(shù)字乘2,即得原尿液比密。②尿比密計(jì)應(yīng)保持清

潔，特別是比密計(jì)的球部能附著蛋白質(zhì)，不用時(shí)放置在干凈水中泡洗后保存。③測(cè)比密

時(shí)若尿液的溫度（室溫）與比密計(jì)上所注明溫度不一致時(shí)，每高3℃測(cè)得結(jié)果則應(yīng)增加

0.001；每低3℃時(shí)則應(yīng)減去0.001。④蛋白尿和糖尿按每增加10g/L,從尿比密中分別

減去0.005（對(duì)蛋白質(zhì)而言）或0.004（對(duì)糖而言）。

酸堿反應(yīng)（PH試紙法）：用廣范圍PH試紙（PH1-14）蘸入尿中立即取出觀察顏色

變化。與標(biāo)準(zhǔn)色板比色，讀取PH值。

（三）、尿蛋白測(cè)定一一尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)

加熱