血液檢驗課件

第一章血液一般檢查

一、紅細胞計數(shù)（redbloodcellcount）

［要求］通過實習較熟練地掌握末梢采血技術，熟悉細胞計數(shù)板的結構及用法，能進行

紅細胞計數(shù)，并記住參考值、臨床意義。

［原理］一定量的血液，經一定量的等滲性溶液稀釋后，充入血細胞計數(shù)室中，于顯微

鏡下計數(shù)一定體積的紅細胞，并求的每升血液內紅細胞數(shù)。

［儀器試劑］

1.血細胞計數(shù)板，為一特制的長方形硬質玻璃板，中間1/3部分具有“H”形漕溝，

橫漕溝上下的平臺部分各深0.1mm,成為二個計數(shù)臺（池），每臺有一個計數(shù)區(qū)域，分

為9個大方格，每一個大方格的面積為Imm：四角的每個大方格又劃分為16個中方格，

供白細胞計數(shù)用。中央的一個大方格用雙線劃分為25個中方格，每個中方格又劃分為

16個小方格，共為400個小方格，供紅細胞計數(shù)用。計數(shù)臺之上覆以特制的蓋片（厚度

0.4mm、表面平直、質地較硬）后構成計數(shù)室。每個大方格的體積是0.Imm'QmmXlmmX

0.1mm），參閱圖1,2,3

灰，蓋片

計數(shù)板

7丫？，7

萩森堤

圖2血.細胞計數(shù)池側面圖

圖3血細胞計數(shù)池劃線

2.容量準確的微量吸管（具有10ul及20ul刻度）

3.紅細胞稀釋液（Hayem稀釋液）

氯化鈉1.0g

硫酸鈉（Na2so4.12H20）5.0g

氯化高汞5.0g

蒸偏水加至200ml過濾后備用

此稀釋液為等滲性溶液，比重較大，使紅細胞易于懸浮，并有防腐作用。

4.光學顯微鏡。

5.消毒、穿刺用具為75%酒精棉球、干棉球、消毒刺血針。

［方法］

1.準確加紅細胞稀釋2ml于一中號試管中，塞緊管口，并拭凈血細胞計數(shù)板及蓋玻片。

2.用75%的酒精棉球消毒被檢人左手無名指尖側腹部。

3.待酒精揮發(fā)后，由左手捏緊取血部位，以右手持消毒穿刺針快速刺入約2~3mm深。拭

去第一滴血后，用微量吸管準確吸血到10ul處，拭去管尖余血，將吸管插到稀釋液

中迅速的把血液放出，并用上清夜洗凈洗管內殘存血液，立即輕輕振蕩混勻，用消毒

干棉球按壓穿刺傷口。

4.進一步混勻紅細胞懸液，然后用尖吸管吸取數(shù)滴（或用細玻璃醮取一滴），充入計數(shù)

室內準備計數(shù)。充細胞懸液時應防止產生氣泡，要一次充好，液量多少適宜。水平位

靜置2~3min待細胞沉下。

5.將計數(shù)板平放于顯微鏡載物臺上，用低倍鏡找出紅細胞計數(shù)區(qū)域，如紅細胞分布均勻

即可于低倍鏡下進行計數(shù)。計數(shù)中央大方格中的四個角和中心的五個中方格內的紅細

胞。為保證計數(shù)的準確，凡在中方格雙線上的紅細胞按壓左側及上側線者計入，按右

側及下側線者棄去的原則進行計數(shù)（圖4）

圖4紅細胞計數(shù)方式

6.將五個中方格內紅細胞數(shù)X5X10X200X1（）6=5個中方格內紅細胞數(shù)X10'°=紅細胞數(shù)

/L,報告方式：△、△△10“/L。

上式中

X5表示把5個中方格內紅細胞數(shù)折算為1個大方格的紅細胞。

X10表示把一個大方格容積(0.lul)折算成lulo

X200表示血液稀釋倍數(shù)。

XIO"表示將ul換算成L。

△△10'L表示將紅細胞數(shù)以小數(shù)點前保留1位數(shù)字乘以IO',形式報告。如數(shù)得紅細

胞為450個則報告為4.5X1012/LO

［注意事項］

1.取血部位的皮膚必須正常，凡局部有水腫、發(fā)炎、紫絹或凍瘡等均不可穿刺采血。

2.…人一針，防止交插感染。穿刺必須夠深，使血液自行流出或僅施壓力即可流出。

3.微量吸管的容量必須準確，內腔一定要干燥，否則會影響吸血量和導致溶血。

4.取血動作必須迅速，否則常易凝固。若作血紅蛋白或紅細胞計數(shù)兩項時，應先取紅細

胞計數(shù)的標本，后取血紅蛋白的標本。

5.充液之前務必充分混勻，否則因久置而紅細胞下降，導致計數(shù)值錯誤的偏低。

6「?般于低倍鏡下計數(shù)即可。為區(qū)別異物或殘渣，將可疑目標置低倍鏡視野中心，然后

轉高倍鏡觀察。

7.在紅細胞稀釋中，白細胞仍然存在。但因在正常人血液中，紅細胞于白細胞之比是750：

1,又經200倍稀釋故對紅細胞計數(shù)影響不大。但如遇白血病患者，其白細胞明顯增

多時，則應進行校正，可從上法所得的紅細胞數(shù)值(內含較多白細胞)中減去白細胞

計數(shù)值。

8.如遇高球蛋白血癥病人，其血液加稀釋液后，迅速出現(xiàn)顆粒狀混濁，乃因氯化高汞將

球蛋白沉淀所致。此時可換用生理鹽水作稀釋液，但應及時計數(shù)。

9.如遇含高效價冷凝集素的病人，當血加入稀釋液后，其紅細胞即凝集成紅色顆粒狀，

此時應事先將紅細胞稀釋液管加溫后再放入血液或將紅細胞懸液管置溫箱內待冷凝

現(xiàn)象消失后再迅速混勻計數(shù)。

［參考值］

成年男性(4.0—5.5)X1012/L

成年女性(3.5—5.0)X10lz/L

初生兒(6.0—7.0)X10I2/L

二血紅蛋白測定(hemoglobindetermination)

［要求］通過實習熟練掌握采血技術，能進行血紅蛋白測定。并記住參考值和臨床意義。

［原理］血紅蛋白被高鐵氟化鉀氧化為高鐵血紅蛋白(Hi),再與鼠結合成穩(wěn)定的棕紅色

氟化高鐵血紅蛋白(HiCH)o在特定波長和光徑(比色杯內徑)條件下具有一定的吸光

度，據此即可求的血紅蛋白濃度(g/L)。

［儀器、試劑］

儀器微量吸管

粗口徑清潔試管

消毒采血用具

721分光光度計

試劑VanKampen-ZijIstra(文齊氏)液(HiCH轉化液)

氟化鉀(KCN)0.05g

高鐵氟化鉀［K3Fe(CN)6］0.20g

無水磷酸二氫鉀(KH2P04)0.14g

TritonXT00(或其他非離子表面活性劑)1.0g

蒸儲水加到1000ml

上述試劑為淡黃色溶液儲存棕色瓶中室溫妥善保存，其中非離子表面活性劑可加速

溶血?？s短轉化時間，防止因血漿蛋白改變引起的渾濁。

［方法］

1.取轉化液5ml于粗口徑試管中加血20ul混勻，室溫(20℃-25℃)靜置5min。

2.以校正過波長和靈敏度的分光光度計，波長為540nm,光徑1cm,以轉化液為空白，

測定吸光度(A)

3.血紅蛋白g/LA’,o/44X1.OX64458/1OOOX251=A5.1OX367.7

上式中：

(1)44為國際血液學標準化委員會(ICSH)公布的血紅蛋白在540nm波長下的毫

克分子消光系數(shù);540nm(Lmmol-lCm-1)0

(2)1.0為比色杯光徑(CM)o

(3)64458為Hb分子量，64458/1000為將血紅蛋白毫摩爾折算為克。

(4)251為血液稀釋倍數(shù)。

由于血紅蛋白不是單一品種，各種血紅蛋白分子量不完全一致，所以不用IS制

mmol/L表示，而報告質量濃度g/L。

［注意事項］

（1）分光光度計的波長和靈敏度必須經過校準。

（2）若轉化濃度渾、變綠即不可再用。

（3）轉化液不能偏酸，也不能用聚乙烯瓶裝，否則KCN易分解失效。

（4）丙種球蛋白或白細胞數(shù)值明顯增高的血液，可出現(xiàn)渾濁，可按15g/L甚至50g/L

加入氯化鈉以防止。

（5）關于轉化液中KCN毒性問題由于濃度很低僅50mg/L,故只要分散處理隨時流

水沖洗棄去危險性不大，但不可積存處理。

（6）若用疊氮鈉、澳代十六烷三甲氨法測定血紅蛋白時-，均需依本法進行校準。

三、網織紅細胞計數(shù)（reticulocytecount）

［要求］了解網織紅細胞的活體染色過程、形態(tài)學特點、計數(shù)方法并記住其參考值和臨

床意義。

［原理］網織紅細胞是晚幼紅細胞脫核后到完全成熟的紅細胞之間的過程型細胞。由于

其胞質中尚殘存核糖體等嗜堿性物質，故經煌焦油藍染液活體染色后，可見有藍綠色的

點狀、線狀或網織紅細胞結構，故名網織紅細胞。

［儀器、試劑］

1.光學顯微鏡

2.現(xiàn)煌焦油藍生理鹽水溶液

煌焦油藍1g

枸椽酸鈉0.4g

氯化鈉0.85g

蒸儲水加到100ml

3.消毒、穿刺取血用具。

4.香柏油。

5.小口徑試管（（6mm內徑），載玻片及推片，目鏡縮小視野用紙片或米勒氏窺盤。

［方法］

1.小試管中放入1%煌焦油藍生理鹽水溶液1滴，加入病人血液1滴后混勻緊塞管口，待

15min后混勻，傾出1小滴以15度角制備薄涂片。

2.干后，低倍鏡下選細胞分布均勻，著色清晰處油浸鏡下進行觀察。為便于計數(shù)，可與

接目鏡筒中放一縮小視野用的有一直徑為3mm圓孔的紙片。計數(shù)1000個紅細胞，記

錄其中的網織紅細胞數(shù)，即可得出網織紅細胞的百分數(shù)值。如1000個紅細胞見到6

個網織紅細胞，則百分率為0.6吼

3.也可用米勒氏窺盤(Milleroculordisc)置入接目鏡內進行計數(shù)(圖5)。具體方法

是以窺盤的A區(qū)計數(shù)紅細胞，B區(qū)計數(shù)網織紅細胞，由于B區(qū)的面積為A區(qū)的9倍，

故計算如下：

網織紅細胞(%)=B區(qū)網織紅細胞數(shù)XI00%/A區(qū)紅細胞數(shù)X9X100%

圖5

［注意事項］

1.只有活體染色后才能看到網織紅細胞，故必須將新鮮血滴與染液相混合，染液與血液

之比一般約為1：1,但若貧血嚴重也可按1：2關系處理。注意混勻，否則有時凝固。

2.染色時間不得短于lOmin,否則可能著色不佳。計數(shù)前注意多部位觀察，可與涂片的

體尾交界處選染色好，紅細胞分布既不分散又不重疊的區(qū)域進行計數(shù)。經此種染色后

紅細胞呈清晰的藍綠色，凡胞質中含有藍綠色點狀、短線狀結構者為網織紅細胞。

3.計數(shù)時需注意與異物或假象相區(qū)別。如有異物殘渣，多呈黑色，轉動微螺旋時可見其

折光性。接目鏡中粉尖重疊于紅細胞上所致的假象，則隨接目鏡轉動而移位。勿將皺

縮紅細胞的較深染的皺縮點勿認為網織結構，皺縮紅細胞其邊緣處均勻的鋸齒狀可供

作鑒別。

4.染色后的涂片應盡快觀察計數(shù)，否則其網織結構可因久置而溶解消失，尤其在夏天濕

度大的季節(jié)。

5.如擬保留涂片，需用瑞-姬氏復合染液進行復染，染色方法同白細胞分類。復染后的

紅細胞呈淡紅色，網織結構呈深藍色。

6.遇再生障礙性貧血等病人，網織紅細胞非常少時，可計數(shù)2000甚至5000個紅細胞中

的網織紅細胞數(shù)或數(shù)個米勒氏窺盤面區(qū)域之后求其百分數(shù)值。

7.網織紅細胞的絕對值可如下求得：①同上法計得網織紅細胞的百分率，如為3%；②同

時做病人的紅細胞計數(shù)，如3.0X1012/L則網織紅細胞絕對值為3.0X107LX3%=90

XIO9/L

［參考值］

正常成人0.5-1.5%

新生兒2-6%

成人網織紅細胞絕對值(24-84)X107L

四、紅細胞沉降率（erythrocytesedimentationrateESR）

［要求］

了解血沉的操作技術及讀取方法。

每組選一位同學在無菌操作下采取靜脈血作Westergren法血沉。

記住參考值及臨床意義。

［原理］血液經枸椽酸鈉抗凝后，吸于特制的血沉管中，垂直豎立一小時，觀察其紅細

胞下沉的速度，以所暴露出的血漿段的高度（mm）表示。

［儀器、試劑］

靜脈穿刺用器材，包括壓脈帶、枕墊、無菌注射器（2ml）、2.5%碘酒，75%酒精及

消毒棉簽等。

特制的Westergren血沉管（全長300nm,內徑2.5mm,具有0-200mm刻度）。

Westergren血沉管（圖6）。

106mmol/L枸檬酸鈉溶液。

［方法］

向有2ml刻度的中號試管中準確加入106mmol/L枸椽酸鈉0.4ml0

作靜脈穿刺后，取血約2ml,拔去針頭注入上述試管內，使血量恰達2ml的化線處，

輕輕混勻。

用Westergrenxue血沉管準確地吸此抗凝血至“0”刻厚處，擦凈管尖，垂直豎立

于血沉架上，記時。lh后讀取血漿段的高度，以mm表示。

圖6魏氏血沉架和血沉管

［注意事項］

注射器內腔、血沉吸管內腔均須干燥，以防溶血。

血量與抗凝劑比例應嚴格遵守4：1,并充分混勻，如有小凝塊則因消耗了纖微蛋白

原而使血沉減慢。

血沉吸管必須垂直豎立，如有傾斜可致血沉增快。

血沉試驗應及時進行，抗凝血于室溫中最長不得超過2h,否則水分蒸發(fā)，可使結果

減慢。

嚴重貧血病人紅細胞大小不均時，于lh后血漿與沉積的紅細胞之間未能形成整齊

的界面，此時要讀取靠近較緊密沉積的紅細胞層的刻度作為血沉數(shù)值。

中等度以上貧血的病人做血沉測定時，可做貧血校正試驗，即將病人血用枸椽酸鈉

溶液按9：1比例抗凝，以3000r/min速度離心30min之后，將上層血漿完全吸出，然

后按正常人紅細胞比積情況，人為的將血漿與壓積紅細胞按各0.50L/L的比例（男性病

人）或按壓積紅細胞為0.40L/L,血漿為0.60L/L的比例（女性病人）混合后再作血沉測

定，報告時注明系貧血校正后血沉數(shù)值。

血沉測定時室溫以18-25C為宜，溫度越高血沉越快，反之減慢，但有高效價冷凝

集素時則相反。必要時需校正溫度。

［參考值］

男性0T5mm/lh

女性0-20mm/lh

五、紅細胞比積測定（hematocrit.HCT、PCV）

［要求］了解本試驗的操作方法及其參考值、臨床意義。

［原理］抗凝血經一定的速度和時間離心沉淀后，得出壓積的紅細胞體積，后者與全血

體積之比即為紅細胞比積。紅細胞比積的多少，主要與紅細胞數(shù)量和大小有關。

［儀器、試劑］

Wintrobe分血管，此管長llOnm,內徑2.5mm且上下均勻一致，管壁厚、管低外圓

內平、管壁兩側刻有數(shù)字；右側最下為0最上為10；左側最上為0最下為10,可供同

時側Wintrobe血沉及紅細胞比積用（圖7）

特制灌血針（針頭細長可直插到Wintrobe分血管管底）或毛細滴管。

雙草酸鹽抗凝劑

草酸鉀0.8g

草酸錢1.2g

溶于蒸儲水100ml中，分裝于中號試管內，每管0.2ml,于80c烘干后可供2ml血

抗凝用。如只用草酸鉀時，每致紅細胞胞體稍縮小；只用草酸鍍時，可致稍膨大，兩者

按上述比例配合時則即可抗凝又能保持紅細胞體積不變。

圖7溫氏分血管及毛細滴管

［方法］

取病人靜脈血2ml與上述抗凝管內，輕輕振蕩使抗凝劑粉末充分溶解抗凝。

充分混勻后，用特制灌血針吸血灌注于Wintrobe分血管中，使血面洽到“0”處，

塞以小塞以防止蒸發(fā)。

室溫中垂直靜置60min后，置2264G離心力下離心沉淀30min,一般采用有效半

徑22.5cm的直角離心機以3000/min速度離心30min讀取壓積紅細胞的高度，然后再以

同樣速度離心lOmin,如刻度不變時，即可按此數(shù)值計算結果。

紅細胞比積=紅細胞段的高度（以還原紅細胞層表面為準）的mm數(shù)乘以0.01即為

每升血液中紅細胞體積的升數(shù)，以L/L為單位報告結果。

離心沉淀后壓積管中的血液自上而下依次分為五層：①最上層為血漿；②白色乳糜

層③灰白色層為白細胞（及有核紅細胞）；④紅細胞段最上面的紅黑色薄層乃氧合血紅

蛋白被白細胞代謝產物還原而成的還原紅細胞層⑤紅黑色薄層之下為紅色帶氧紅細胞

層。

［注意事項］

為正確計算紅細胞比積及紅細胞的各種平均指數(shù)(如MCV、MCH、MCHC)等，應堅持

用對紅細胞形態(tài)無影響的雙草酸鹽粉劑作為抗凝劑，并應充分混合，以保證無凝塊。

Wintrone分血管的內腔必須干燥潔凈，以防溶血。

離心前垂直放置lh,為使紅細胞與白細胞、血小板分層下沉。

離心速度和時間必須嚴守規(guī)程。相對離心力(G)=0.00001118X有效半徑(cm)X

(每分鐘轉速)2o

為準確的計算MCV、MCH1、MCHC數(shù)值，必須從此抗凝血中取血作紅細胞計數(shù)及血紅

蛋白測定，而不能從病人耳垂或指端采血。

分血管離心沉淀后紅細胞的界面必須是水平的，如非水平應將界面最高與最低處的

讀數(shù)之和除以“2”，看結果時必須從灰白色層下的黑紅色層讀取數(shù)值。

通過本試驗還可以得到一些其他參數(shù)：①如血漿深黃色表示病人有黃疽②血漿乳白

色表示血脂增高(乳糜微粒多)，可能由于非空腹取材，也可能患有動脈粥樣硬化等；

③在白細胞正常的人，其灰白層僅為0.05Tmm,如白細胞增多，則可使灰白層增高，故

白細胞增高患者，若不靜置一小時以待分層，則對結果必將有所影響(使紅細胞比積值

增高)。慢性粒細胞性白血病時，其灰白層可達數(shù)十毫米之高。血小板顯著增多的病人

也有相似的影響。

［參考值］

紅細胞比積(hematocrit,PCV)

成年男性0.40-0.50L/L

成年女性0.37-0.48L/L

平均紅細胞體積(meancorpuscularvolume,MCV)82-82fl。

平均紅細胞血紅蛋白含量(meancorpuscularhemoglobin,MCH)27-31Pg0

平均紅細胞血紅蛋白濃度(meancorpusculauhemoglobinconcentration,MCHC)

32-36%o

六白細胞計數(shù)(whitebloodcellcount)

［要求］能教熟練的掌握采血技術，進一步熟悉血細胞計數(shù)板結構，能進行白細胞計數(shù)

并記住參考值、臨床意義。

顯微鏡計數(shù)法

［原理］將血液用稀釋(常用2%乙酸)溶液稀釋，使紅細胞溶解，白細胞形態(tài)更加清晰之

后，進行計數(shù)以求得每升血液內的白細胞數(shù)。

［儀器、試劑］

儀器同紅細胞計數(shù)。

白細胞稀釋液：

冰乙酸2ml

1%龍膽紫1ml

蒸儲水加至1000ml,過濾后備用

加龍膽紫是為了呈色，以便與其他稀釋液相區(qū)別。

［方法］

1.取小試管1支，準確加入2%乙酸溶液0.33ml。

2.消毒皮膚后，穿刺取血20ul,拭凈管尖外余血，迅速放入稀釋液中，再用上清夜

將吸管內腔洗凈，混勻，待溶液轉褐色后，再混勻充入計數(shù)室，待下沉2-3min后進行

計數(shù)。白細胞為無色圓形小體，于高倍鏡觀察可見其核。通常于低倍鏡下計數(shù)四角的四

個大方格內的白細胞數(shù)按下式計算。

四個大方格內白細胞總數(shù)

4X10X20X104*6/*L=白細胞數(shù)/L

即四個大方格內白細胞總數(shù)X0.05X107L

上式中：得每個大方格（即0.lul）內白細胞平均數(shù)。

X10為將一個大方格的容積0.lul換算為lulo

X20是血液稀釋倍數(shù)，即得lul血液的白細胞數(shù)。

106將lul血液中的白細胞數(shù)換算為1L血液中的白細胞數(shù)。如計數(shù)4個大方格為

160個白細胞，則白細胞數(shù)為1600.05X109=8X1010/L

［注意事項］

1.取血及充入計數(shù)室等項與紅細胞計數(shù)相同。

2.一定要在稀釋液轉為褐色后方能計數(shù)，否則可因紅細胞殘存而干擾技術，甚至錯

誤的將紅細胞計入而使結果偏高。

3.如病人白細胞過少可取2倍量的血，計數(shù)后結果除以2。如遇白細胞過多則可按

紅細胞計數(shù)法，計數(shù)其中央大方格的5個中方格內白細胞數(shù)之和進行換算求得白細胞數(shù)。

4.有核紅細胞在2%乙酸溶液中并不破壞，故如病人血液中有較多的有核紅細胞時-，

對其“白細胞數(shù)值”須進行校正，方法如下：①如常法求的白細胞數(shù)/L（實為包括幼紅

細胞在內的有核細胞數(shù)/L）；②同時推一血涂片，用瑞-姬氏復合染液染色后進行白細

胞分類，記錄在分類100個白細胞的過程中所見到的有核紅細胞；③按下式求白細胞數(shù)

/L

校正前“有核細胞數(shù)”L為：100

100+分類100個白細胞過程中見到有核紅細胞

舉例：

校正前“有核細胞數(shù)”為13X107L,分類計數(shù)100個白細胞過程見到有核紅細胞

30個。

100

則：白細胞數(shù)L=13X109/LX=IOXIO9/L

100+30

［參考值］

成人(4.0-10.0)X107L

初生兒(15-20)X107L

6個月-2歲幼兒(11-12)X107L

七白細胞分類計數(shù)(Whitecelldifferentialcount,DC)

［要求］

初步掌握血涂片制作及染色技術。

學會辨認外周血中各種白細胞的形態(tài)特點及其分類計數(shù)的方法。

記住參考值和臨床意義。

為觀察血細胞內部結構，識別細胞種類和堅定各種異常細胞，需將血涂片染色。最

常用瑞-姬氏復合染液染色法。

［原理］

Wright-Giemsa(瑞-姬氏)復合染液的染液是由酸性伊紅和堿性美藍所組成。伊紅

的鈉鹽有色部分為陰離子，可與帶正電荷的物質結合；氯化美蘭有色部分為陽離子，可

與帶負電荷的物質結合。二者溶解在甲醇中形成可溶性的伊紅美蘭溶液，即可以固定細

胞有利于細胞蛋白質選擇性的吸附其中有色離子而著色。氯化美蘭放置久后可氧化為天

青，對細胞核染色加強，添上更多色彩，染色效果更好。

細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學的親合作用。各種細胞成分因化學性質

不同，對染料的親和力也不一樣。故可呈不同的著色特點。例如血紅蛋白、嗜酸性顆粒

均為堿性物質，故與酸性染料伊紅結合而染成紅色。細胞核的核蛋白與原、幼細胞的胞

質為酸性物質，故與堿性染料美蘭和天青相結合，染成深蘭色或深紫紅色。中性顆粒與

美蘭和伊紅同時結合而染為淡紫紅色。瑞氏染粉是由伊紅化美蘭組成，對胞質及中性顆

粒的著色性極佳，而姬姆薩染粉由天青、伊紅組成，對細胞核著色較好，結構顯示更清

晰。采用瑞-姬氏復合染液可兼取兩者之長、取得更好的染色效果、由于蛋白質所帶電

荷隨溶液的PH而定，在偏酸性環(huán)境中所帶正電荷增多而親和帶負電荷的的染料伊紅故

著色偏紅。在偏堿性環(huán)境中其負電荷增多而親和帶正電荷的美蘭，而至細胞著色偏灰藍,

故為使血片每次染色效果好且趨于一致，需配制PH6.4-6.8的緩沖液，是細胞蛋白質在

此恒定的環(huán)境中著色。

［儀器、試劑］

光學顯微鏡

瑞、姬氏復合染液瑞氏染粉0.5g,姬姆薩染粉2g,堿性美蘭0.5g,混勻后加10ml

甘油在乳缽內研磨，再用甲醇500ml稀釋后，室溫放置一周備用。

磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)；磷酸二氫鉀0.3g,磷酸氫二鈉0.2g蒸儲水加于1000ml,

備用。

香柏油、二甲苯及擦鏡頭用紙。

光潔中性無油垢的載玻片及一端平齊稍窄于載玻片的推片，玻璃蠟筆。

［方法］

常規(guī)消毒皮膚，穿刺后拭去第一滴血。

用載波片的一端刮取血液一小滴。

將推片的平齊端置載玻片上血滴的稍前方，將推片略向后移使與血液相接觸，血液

遂于推片與載玻片的夾角間散開。

以約30度的夾角向前均勻的推動即可制成血涂片，其薄厚度要適中，襯以白紙時

應呈淡的紅黃色，目有頭體尾之分。(圖8)

圖8血片制備

血涂片干后，于血膜兩端用玻璃蠟筆各劃一線，以防染液流失，滴加瑞-姬氏復合

染液數(shù)滴于血涂片上（以蓋住血膜為度），靜置約Imin,目的在于用染液的甲醇成分固

定血細胞。

加相當于染液1.5-2倍量的緩沖液充分混勻。

染色約5Tomin,屆時將載有染液的涂片置低倍鏡下觀察，若見白細胞的核著色清

晰、核漿分明即可用水沖去染液，干燥后鏡檢。

鏡檢時先用低倍鏡選好厚薄適宜、染色良好細胞分布均勻處，滴加香柏油一滴，用

油浸鏡觀察。通常計數(shù)100個白細胞（必要時可增到200或更多），按圖9所示方向移

動血涂片，同時將所遇到的各類白細胞分別記錄、直到計數(shù)100個白細胞為止，計算每

類白細胞的數(shù)目，即其百分數(shù)值。

圖9白細胞分類的鏡檢順序

各類白細胞的形態(tài)學：

中性粒細胞在瑞-姬氏染色血涂片上胞體成圓形，直徑10-13um,胞質染粉紅色，

核形一葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見，染為深紫紅色，胞質中有許多細小紫

紅色顆粒。

嗜酸性粒細胞較中性粒細胞稍大，胞核多為兩葉，著色較淡，胞漿內充滿粗大均勻

的嗜酸性顆粒，瑞-姬氏染色時呈橘紅色有折光性。

嗜堿性粒細胞胞質中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞-姬氏法染色是呈黑蘭色。與

光學顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活躍而脫顆粒所

致，核成淡紫紅色常看不清，呈桿狀亦或分葉狀。

淋巴細胞胞體呈圓形，直徑介于6T5um之間，分為大、中、小三型。再成人血涂

片中以小淋巴細胞多見，直徑6-9um,核大成深紫色致密而濃染，胞漿量很少，若可見,

呈淡蘭色；大淋巴細胞直徑12T5um,胞質量較多，呈清撤的淡蘭色，可見少量嗜苯胺

藍顆粒，中淋巴細胞的大小及特點介于、小淋巴細胞之間。

單核細胞在瑞-姬氏染色血涂片上直徑為12-20um,胞體圓形、橢圓形，但?？梢姷?/p>

偽足，胞質一般較多，呈淡灰蘭色，內含較多細小的的嗜苯胺藍顆粒，可見小空泡。核

形多種多樣，最重要的特點是染色質較細疏松，呈絲網狀或條縷狀故著色較深。

分類計數(shù)時以畫“正”字作如下記錄：

中性桿狀核F

中性分葉核正正正正正正正正正正正正正

嗜酸粒細胞一

嗜堿粒細胞

淋巴細胞正正正正正

單核細胞正一

［注意事項］

1.作血涂片時勿用傷口第一滴血，以免混有來自受損血管的內皮細胞。

2.血涂片薄厚適度，過厚時細胞簇集影響形態(tài)觀察，過薄則白細胞太少不易分類。

影響血涂片薄厚的因素為：①血滴過大、夾角過大、推片速度過快則厚；②血滴太小、

夾角過小、推片過慢則薄。

3.加瑞-姬氏染液或緩沖液之后，切勿干燥，否則血涂片中每有殘渣，將干擾鏡檢。

4.染色時間的長短，視染液性能而定，應以低倍鏡觀察其染色良好為度。

5.要以流水沖去染液，而不可先棄去染液再沖水，以免留有殘渣。

6.分類時一定要用油鏡觀察，以便同時觀察白細胞有無質變及紅細胞的形態(tài)學。

7.染色條件良好時，其紅細胞呈淡琥珀色，中性粒細胞的胞質呈淡粉色，其中性顆

粒很細小，不易察覺，核染為深紫紅色，核漿分界清晰。嗜酸性顆粒呈鮮艷的桔紅色且

有折光性。染色結果偏酸時，紅細胞偏紅，嗜酸性顆粒呈鮮艷的桔紅色，但各種白細胞

的核僅染成極淡藍色或根本不著色。常見于甲醇質量不純，載物片有殘余酸或緩沖液PH

過低所致。染色結果偏堿時，紅細胞呈灰藍色，中性粒細胞顆粒為黑藍色較粗大，似中

毒顆粒，核染為深紫藍色，著色均勻結構不清，嗜酸性顆粒失去鮮艷色彩而呈駝色、褐

色、甚至黑藍色，常因染液偏堿或玻璃片有殘余堿所致。

8.因胞體較大的白細胞如嗜酸性粒細胞、單核細胞、中性粒細胞于涂片的上下邊緣

處多見，而胞體較小的白細胞如淋巴細胞則以涂片中心地帶為多，分類計數(shù)時切不可只

在某一局部，而應按規(guī)定方向推動血涂片來進行觀察。

9.分類報告時如紅、白細胞有大、小、形態(tài)、染色等質的改變應同時描述。

10.白血病病人血涂片因細胞常不易著色，應酌情延長其染色時間。

11.凡白細胞總數(shù)低的病人作分類計數(shù)時，切不可以加厚血涂片的方式來解決，因

涂片過厚時;細胞簇集，著色常不理想而影響分類辨認。應多推若干張薄厚適宜的血涂

片來進行分類。

［參考值］

成人中性桿狀核粒細胞1-5%0.01-0.05

中性分葉核粒細胞50-70%0.50-0.70

嗜酸性粒細胞0.5-5%0.005-0.05

嗜堿性粒細胞0-1%0-0.01

淋巴細胞20-40%0.20-0.40

單核細胞3-8%0.03-0.08

八、自動血細胞分析儀

自動血細胞分析儀按其計數(shù)原理可分為光電型、電容型、電阻型和激光型四種。好

的分析儀可對血細胞進行多參數(shù)的分析。如紅細胞計數(shù)（RBC）、白細胞計數(shù)（WBC）、

血小板計數(shù)（pit）、血紅蛋白定量（Hgb）、紅細胞平均體積（MCV）、紅細胞分布寬

度（PDW）、血小板壓積（Pct）、血小板平均體積（MPV）、血小板分布寬度（PDW）、

白細胞的三分和五分類的絕對數(shù)與百分比、網織紅細胞計數(shù)及其三亞群分類等，并可對

紅細胞、白細胞及血小板分布圖示。對懷疑嗜酸性粒細胞＞700/ul,嗜堿性粒細

胞＞200/ul,異常淋巴細胞增多，出現(xiàn)原始細胞，不成熟粒細胞，有核紅細胞，可能有

血小板聚集或巨大血小板，紅細胞大小不等，低色素性紅細胞等貧血情況提供懷疑警告，

以便提醒進一步進行顯微鏡檢查。

（一）、紅細胞與白細胞自動計數(shù)

［原理］目前我國主要應電阻型血細胞計數(shù)儀，它是利用血細胞為不良導體的特征，讓

含有血細胞的電解質溶液通過一微孔（計數(shù)紅、白細胞時其孔徑為lOOum,計數(shù)血小板

時為70um）孔內外分別安放電極一個，如微孔內僅有電解質溶液而無細胞通過時電阻恒

定，當血細胞進入微孔時，小孔兩端的電阻即發(fā)生變化，將此電阻變化轉換為電壓脈沖

訊號，經過電路放大甄別及數(shù)據處理最后將結果用數(shù)字顯示。

［試劑］

1.稀釋液（紅、白細胞計數(shù)通過）

氯化鈉10g

枸椽酸鈉5g

40四甲醛5ml加蒸鍋水致1000ml混勻、用G4或G5號漏斗過濾除

尖密閉保存.亦可用濾過的除塵的生理鹽水溶解代替。

2.溶血劑（白細胞計數(shù)、血紅蛋白測定用0.5%皂素溶液或4.0%澳代十六烷三甲胺

基冰乙酸溶液（以2%冰乙酸配）。

［方法］

往粗口徑試管中加入稀釋液10ml,放入血液20ul混勻（A管）。取此液0.1ml加

稀釋液9.9ml（B管）。

將B管液緩緩傾注于自動計數(shù)儀的計數(shù)杯內，放置于已調好孔電流和閾電壓的計數(shù)

儀的載臺上，按計數(shù)扭后即可得紅細胞數(shù)值和有關參數(shù)。

往A管內滴加溶血劑2滴，待3-5min溶液完全透明后即可進行白細胞計數(shù)及血紅

蛋白測定。

［注意事項］

為防止粉塵污染，自動計數(shù)儀應安放于相對密閉的環(huán)境，采血時切勿混入面纖維或

粉塵。

為保證儀器性能，除需要穩(wěn)壓電源外，還必須經常進行有質量控制的測試，以保證

檢驗結果的準確性。

計數(shù)溶液中切記混有氣泡，否則可致結果偏高。

滴加溶血劑之后，一定要待溶液完全透明才可計數(shù)。

有核紅細胞遇溶血劑并不破壞，故計數(shù)時混于白細胞之內，導致計數(shù)值偏高，此時

應密切結合臨床及染色血涂片中所見有核細胞數(shù)進行較正后再報告白細胞數(shù)。

白血病患者可能因白血病細胞大小懸殊及粘聯(lián)成堆等導致計數(shù)誤差，此時以顯微鏡

計數(shù)法結果為準。

（二）、白細胞分群

目前自動化儀器還不能象手工法那樣準確地對每一個白細胞分類古我們稱之為白

細胞分群。

全自動血細胞分析儀的白細胞三分群現(xiàn)已應用于臨床篩選病人，其分群計數(shù)的基本

原理是：根據溶血劑處理后皺縮白細胞體積大小分為三群細胞，如Coulter血細胞分析

儀將35-90fl大小的顆粒定義為淋巴細胞群（小細胞群），91T6fl大小的顆粒定義為

中間細胞群，161-450門大小的顆粒定義為粒細胞群（大細胞群），不同儀器對細胞大

小的定義略有差別。三分群對白細胞質量異常有一定的篩選作用，但在臨床應用中局限

性很大，如當血小板聚集或為巨大血小板，有核紅細胞或末溶血的紅細胞增多時均可干

擾淋巴細胞群的分類。當異型淋巴細胞，原始或幼稚白細胞、嗜酸或嗜堿性粒細胞異常

增多時，中間細胞群數(shù)可明顯增高；幼稚粒細胞及成熟粒細胞增多時粒細胞可顯著增高。

當白細胞分群結果異常時，白細胞體積分布直方圖也常有異常，如某一峰分面積增大，

淋巴細胞群和粒細胞群兩峰合并為單峰等。遇三分群白細胞數(shù)量或直方圖異常時一，必須

進行血涂片染色后顯微鏡下分類，以確定異常之原因。

關于白細胞分類計數(shù)的儀器發(fā)展很快，除了在三分群基礎上進一步提高分辨率發(fā)展

了五分群的分析儀外，還有采用直接將瑞-姬氏染色片置油鏡下有規(guī)律地移動，通過電

腦對1千甚至一萬個白細胞進行序貫分析的原形識別型分類計數(shù)儀和將定量抗凝血分別

與三種組織化學染色液混合染色，在經過對其吸光與散射特性的檢測進行分析的細胞化

學識別型分類計數(shù)儀等，總之這些儀器優(yōu)點與不足，隨著科學的發(fā)展白細胞分類技術一

定會進一步得到發(fā)展與完善。

第二章血栓與止血檢查

一、血小板計數(shù)（platelelcount）

［原理］用一定量的血小板稀釋液，破壞血中的紅細胞后，沖入記數(shù)室，于高倍鏡下計

數(shù)一定區(qū)域內的血小板后，求出每升血液的血小板數(shù)。

［儀器、試劑］

1、儀器同血細胞計數(shù)項。

2、試劑草酸鍍稀釋液

草酸鍍[(NH4)2C204?H20]1.Omg

甲醛0.Img

EDTA-Na214.Omg

蒸錦水加至100ml

將上述試劑先用少量蒸儲水溶解，然后加至100ml,另加亞甲蘭染液數(shù)滴使呈亮蘭

色，過濾后備用。

［方法］

1、小試管中準確加入上述稀釋液0.38ml。

2、常規(guī)法消毒皮膚后，用刺針作約2mm深穿刺，第一滴血棄去。

3、用微量吸管吸血20四，擦凈管尖余血，迅速加入稀釋液中，并用稀釋液洗凈吸管

內腔，輕輕混勻，等待溶血透明后，再混勻，充入血細胞計數(shù)室內，待血小板下沉。

4、下沉15min后，將計數(shù)板置鏡臺上用低倍鏡找好計數(shù)區(qū)（中間大方格）后轉高倍

鏡進行計數(shù)，計數(shù)其5個中方格內的血小板數(shù)，如以P代表，則血小板計數(shù)為：PX5（變

為0.1同）X10（變?yōu)?可）X20（稀釋倍數(shù)）X10,（將可換算為L）=PXIO7L

［參考值］（100-300）X107L

［注意事項］

1、血小板易粘附變性，故整個操作過程均須迅速，血流要通暢，口勿混摻消毒酒精。

所用試管、微量吸管及計數(shù)板均需中性潔凈。

2、血小板體積小，故充入計數(shù)室后必須使其下沉15min后再行計數(shù)，否則結果偏低。

由于胞體小不易觀察，必須堅持用高倍鏡計數(shù)。

3、計數(shù)時要注意區(qū)別真?zhèn)?，血小板為圓形或橢圓形的灰色小體，有柔和的折光性,

大小約為紅細胞的1/4-1/5。粉塵或異物則每呈黑色，當轉動微螺旋時有強折光性，且

其最清新的視距與血小板不在一個平面上。

二、血漿凝血酶原時間（plasmnprathrombintime,PT）

［原理］凝血第二階段在凝血酶原激活物的作用下，血漿凝血酶原轉變?yōu)槟福笳?/p>

使纖維蛋白轉變?yōu)槔w維蛋白而凝血。這一過程所經歷的時間即為血漿凝血酶原時間。本

試驗是在血漿中加入組織因子（凝血質，即兔腦浸液或人胎盤浸液）及鈣溶液，形成外

源性凝血酶原激活物之后而使凝血酶原轉變?yōu)槟傅?。故屬檢查凝血第一階段外源性

凝血途徑有無障礙的試驗。主要用于檢測vn、v、x因子有無異常，但凝血酶原及纖維

蛋白原的含量如何，也影響其結果。

［儀器、試劑］

1、靜脈穿刺用有關器材。

2、硅化試管或塑料試管、尖吸管、0.2mL吸管、細尖彎玻璃棒（或彎曲的針頭）。

3、109mmol/L枸椽酸鈉溶液（抗凝用）。

4^25mmol/L氯化鈣：氯化鈣1.11g,溶于400mL蒸懦水中。

5、凝血酶液：兔腦粉150mg溶于新制生理鹽水2.5ml中?；靹蛑?5℃水浴中30min

并經常搖動，介時取出以500r/min速度離心Imin或靜置沉淀后取上層乳白色液備用。

6、健康人混合凍干血漿。

［方法］

（一）試管法

1、取病人空腹血1.8ml加入盛有109mmol/枸椽酸鈉溶液0.2ml的試管內，輕輕搖

勻，以3000r/min的速度離心沉淀分離血漿。

2、于37c水浴預熱健康人混合凍干血漿、病人血漿0.1ml、0.025mol/L氯化鈣溶

液O1ml及凝血酶液0.1ml。

3、用尖細的彎玻璃棒將以上三液混合，并立刻開動秒表開始記時，不斷輕挑此混

合物，直到出現(xiàn)纖維絲為止，立即停表讀取所經歷的時間即為凝血酶原時一間，重復兩次，

要求其時差一般在1秒以內。

4、質控血漿用上法同樣處理。

5、報告方式

⑴PT秒數(shù)病人XXS

質控血漿XXS

病人PT（S）

⑵凝血酶原時間比值（PTR）PTR=----------------------

質控血漿PT（S）

⑶國際標準化比值（INR）INR=PTRISR

*ISR為凝血質的國際敏感數(shù)，市售凝血酶已注明其ISR。

也有人習慣以活動度（PA）報告。PA=PTRX100%

（二）血凝儀法

1、同試管法。

2、同試管法。

3、按血凝儀法的操作方法測定健康人混合血漿的PT值。

4、以同樣方法測定待測血漿的PT時間。

［注意事項］

1、枸椽酸鈉與血的比例嚴格按1:9,抗凝劑過多，凝固時間延長。抗凝不充分有小

凝塊時，結果明顯延長或根本不凝。

2、標本不可溶血，嚴重溶血可致凝固時間縮短。

3、水浴溫度應恒定，可37℃±10℃,溫度過高、過低均可使凝血酶原時間延長。

4、取得標本后應盡快進行測定，因V因子極不穩(wěn)定，室溫越高越易破壞。

5、由于凝血質質量不盡相同，故本實驗每次必須做正常對照。凡病人結果較正常

對照延長達3秒或更長時有意義。

6、國際上規(guī)定用試管法進行PT測定。我國目前手工法測定仍多用試管法。近年來

廣泛采用的自動或半自動凝血儀則用試管法測定。

［參考值］

⑴PT11-14S

⑵PTR1±0,15

(3)INR0.8-1.5

(4)PA80%-120%

三、活化部分凝血活酶時間測定(activatedpartialthromboplastintime,APTT)

［原理］APTT試驗是一個篩選的測試，用來測量血液中的內源性凝血因子。在37C條

件下，以白陶土為激活劑激活因子刈和XI,以腦磷酯(部分凝血活酶)代替血小板，提

供凝血的催化表面。在鈣離子參與下，觀察血小板血漿凝固所需要的時間，即為APTT

或白陶土部分凝血活隨時間。

［儀器、試劑］

1、靜脈穿刺用有關器材。

2、硅化試管或塑料試管、尖吸管、0.2mL吸管、細尖彎玻璃棒(或彎曲的針頭)。

3、109mmol/L枸檬酸鈉溶液(抗凝用)。

4、25mmol/L氯化鈣:氯化鈣1.11g,溶于400mL蒸儲水中。

5、APTT試劑(含白陶土或糅酸及腦磷脂)。

6、健康人混合凍干血漿。

［方法］

(―)試管法

1、取病人空腹血L8ml加入盛有106mm01/枸椽酸鈉溶液0.2ml的試管內，輕輕搖

勻,以3000r/min的速度離心沉淀分離血漿。

2、于37℃水浴中預熱病人血漿和APTT試劑各0.1ml,輕輕混勻。

3、于3min時加入預溫的25mmol/L氯化鈣0.1ml,混勻，并立刻開動秒表開始記時,

在37c水浴中不斷輕挑此混合物，直到出現(xiàn)纖維絲為止，立即停表讀取時間，重復兩次,

要求其時差一般在1秒以內。

4、用同樣方法測定病人APTT值。

(二)血凝儀法

1、同試管法。

2、同試管法。

3、按血凝儀法的操作方法測定健康人混合血漿的APTT值。

4、以同樣方法測定病人血漿的APTT時間。

［注意事項］

1、采血要順利，抗凝劑與血漿之比為1：9?？鼓浞?，決不可有凝塊。3000轉

離心15分鐘除去血小板獲乏血小板血漿。使用硅化玻璃管或塑料試管以防血小板激活。

2、采血后盡快測定，最遲不應超過2h。

3、血漿加APTT試劑后預溫時間不應少于3mino

［參考值］

待測值較正常對照值延長10秒以上有病理意義。

四、血漿纖維蛋白原測定(fibrinogen,Fg)

［原理］在稀釋血漿中加入凝血酶和鈣離子，使纖維蛋白原變成纖維蛋白凝塊。通過測

定血液凝固時間，并根據標準曲線在線性區(qū)范圍內，測出纖維蛋白原含量。

［儀器、試劑］

1、硅化試管或塑料試管、秒表、37℃水浴箱。

2、凍干凝血酶。

3、凍干參比血漿。

4、血漿稀釋液(pH7.35)

醋酸鈉3.89g

巴比妥鈉5.89g

氯化鈉6.8g

lmol/L鹽酸21.5m1

蒸儲水加至1000ml

［方法］

1、蒸儲水復溶凍干凝血酶。

2、血漿稀釋液將凍干參比血漿按1：5、1：10、1：20、1：40稀釋。

3、將待測血漿作1：10稀釋。

4、于37℃水浴中預熱稀釋血漿0.2ml和凝血酶0.1ml。

5、預溫3min后將兩者輕輕混勻，并立刻開動秒表開始記時，在37℃水浴中不斷輕

挑此混合物，直到出現(xiàn)纖維絲為止，立即停表讀取時間。

6、以參比血漿檢測結果制成標準曲線或回歸方程（以凝固時間s為縱坐標，稀釋

的濃度為橫坐標），待測血漿檢測結果可在曲線上讀出。

［注意事項］

1、采血要順利，抗凝劑與血漿之比為1：9?？鼓浞?，決不可有凝塊。3000轉

離心15分鐘除去血小板獲乏血小板血漿。使用硅化玻璃管或塑料試管以防血小板激活。

2、參比血漿和待測血漿一起檢測，以保證結果可靠。

3、檢測標本時間延長，可考慮作1：5稀釋測定。

［參考值］

2?4g/L。

五、血漿D-D二聚體檢測（D-dimer）

［原理］抗D-二聚體單克隆抗體具有較高的特異性，僅與血漿中纖維蛋白裂解產物D-

二聚體發(fā)生反應，與纖維蛋白原裂解產物不發(fā)生反應。此單克隆抗體以膠乳凝集法測定

血漿中D-二聚體。當血漿中D-二聚體含量大于0.5ug/ml時-，標記的膠乳凝集則為陽性。

本試劑盒用于血漿中D-二聚體快速定性與半定量測定。

［儀器、試劑］

1、試管、刻度吸管、干燥滅菌注射器、微量加樣器、離心機等。

2、D-二聚體含量測定試劑盒（乳膠試劑：1瓶、緩沖液：1瓶、陽性對照：1瓶、

陰性對照：1瓶、測試板：1包、攪拌棒：1包）。

［方法］

1、稀釋血漿：血漿100ul+緩沖液100ul。

2、測試板上加稀釋血漿20ul與Latex乳膠試劑20ulo

3、用攪拌棒混勻后不停旋勻。

4、定性：3-5分鐘后出現(xiàn)清晰凝集顆粒為陽性。

5、半定量：將待檢血漿用緩沖液作1:2、1:4、1:8等系列倍比稀釋，同上法測定，

以陽性時的最大稀釋倍數(shù)報告半定量結果。

［注意事項］

1、所有試劑均應放至室溫才做。測試溫度應高于20℃,低溫環(huán)境應延長時間1-2

分鐘觀察結果。

2、加膠乳試劑前應混勻，但需小心，輕輕旋轉，不能用力顛倒混勻，振蕩。

3、用枸椽酸鈉，EDTA,肝素抗凝均可，但抗凝劑總量不應超過10%。

4、標本血漿室溫（20-25℃）保存8h,2-8℃48小時，-20℃可保存一個月。冰凍

血漿從冰柜中取出，置于37℃水浴中迅速復溶。

［參考值］

陰性（D-二聚體含量＜0.5mg/L）

第三章尿液及糞便常規(guī)檢查

一、尿液檢查

（一）、標本的采集

1、標本的種類

隨機尿即留取任何時間的尿液。由于方便，門診病人常用，但易受各種因素的影

響，致使低溶度或臨界溶度的病理性物質和有形成分易被漏檢。

晨尿收集早晨起床后的第一次尿標本。人處于晚間睡眠狀態(tài)，尿液傾向于濃縮

和酸化。血細胞、上皮細胞及管形等有有形成分在酸性環(huán)境中較為穩(wěn)定，此種標本最適

于腎病患者尿液的一般檢查。

餐后尿通常再餐后2小時收集尿標本，此標本對病理性蛋白尿和糖尿的檢出更為

敏感。這是由于餐后增加負荷，使已降低閾值的腎臟不能承受，病理性成分易于發(fā)現(xiàn)。

定時尿應從排空尿液開始計算時間，將全時間內各次尿液和到時間后排空膀胱中

的尿液全部送檢。定時尿最長應用的是4h、12h、24h尿。主要用于尿中有形成份和一

些化學成分的定量。

2、采集方法

女性應避免月經及陰道分泌物混入。必要時沖洗外陰后，留中段尿檢查。留12h或

24h尿時應適當放防腐劑（如甲苯2ml/100ml尿液、40%甲醛液0.2-0.05ml/100ml尿

液、10%鹽酸10ml/24h尿液）。若作細菌培養(yǎng)，則必須用無菌瓶按無菌操作留取中段尿，

必要時用無菌手術導尿送檢。

（二）、尿液物理學與化學檢查

尿量正常成人每晝夜量量常在1000-2000ml之間，平均為1500ml。尿量增多見

于糖尿病、尿崩癥、慢性腎炎（尿液縮功能障礙）等。尿量減少見于急性腎炎、高熱、

水腫、休克及各種原因所致的急性腎功能不全。無尿見于嚴重急性腎功能不全。

顏色正常尿液為淡黃色。病理性可見乳糜尿、血尿、血蛋白尿及膽紅素尿等。

透明度正常新鮮尿液多透明，放置后可出現(xiàn)微量絮狀沉淀。若新鮮尿明顯混濁可

見以下情況：①尿酸鹽沉淀，以粉紅色結晶析出，多見于酸性尿液冷卻后。加熱或加堿

后混濁消失；②磷酸鹽和碳鹽沉淀，淡灰白色結晶析出，多見于堿性或中性尿液。加酸

后混濁消失，若為碳酸鹽可產生氣泡磷酸則無氣泡產生；③膿尿和菌尿呈云絮狀沉淀，

加熱加酸其混濁均不消失。

比密測定

將尿混勻后沿管壁慢慢倒入尿量筒內，避免發(fā)生氣泡，如有氣泡可用毛細吸管或吸

水紙吸去。

將比密計（上有L000T.060刻度）輕輕放于尿液內，使其懸浮于中央，勿觸及筒

壁或筒底

等比密計停穩(wěn)后，讀取與尿液凹面先切的刻度，即為被測尿液的比密。

結果判斷：正常人比密為L015T.025之間。急性腎炎尿量少，比密高；而慢性腎

炎尿量多，比密低；糖尿病病人，尿量雖多，但尿內含有糖，故比密高。尿崩癥、慢性

腎功能不全，尿比密常在L010左右形成低比密尿。

注意事項：①尿量太少，不足以浮起比密計劃時，可用蒸儲水將尿液稀釋一倍后，

再行測定。其結果應將讀數(shù)末尾兩位數(shù)字乘2,即得原尿液比密。②尿比密計應保持清

潔，特別是比密計的球部能附著蛋白質，不用時放置在干凈水中泡洗后保存。③測比密

時若尿液的溫度（室溫）與比密計上所注明溫度不一致時，每高3℃測得結果則應增加

0.001；每低3℃時則應減去0.001。④蛋白尿和糖尿按每增加10g/L,從尿比密中分別

減去0.005（對蛋白質而言）或0.004（對糖而言）。

酸堿反應（PH試紙法）：用廣范圍PH試紙（PH1-14）蘸入尿中立即取出觀察顏色

變化。與標準色板比色，讀取PH值。

（三）、尿蛋白測定一一尿蛋白定性實驗

加熱