十七、艾滋病機會性感染及性病實驗室檢查

艾滋病機會性感染

及性病實驗室檢查中國醫(yī)大一院檢驗科褚云卓5/15/20241褚云卓講授內容一、機會性感染病原學檢查二、性病實驗室檢查檢查5/15/20242褚云卓一、機會性感染病原學檢查1、病毒感染2、細菌感染3、真菌感染4、原蟲感染5/15/20243褚云卓1、病毒感染

——CMV感染

細胞學檢查從尿液、腦脊液或受感染的肝、肺、胃等組織標本中，用姬姆薩或瑞氏染色法進行染色，可見核內和（或）胞質內含包涵體的巨大細胞，其周圍有一條明亮帶。5/15/20244褚云卓病毒分離

CMV病毒分離是診斷CMV感染最直接的方法，CMV具有種屬特異性。采取新鮮尿液、唾液、子宮分泌液、肝活檢或尸檢標本、外周血白細胞等，將標本接種于人胚肺二倍體傳代細胞株上，培養(yǎng)24h后染色可見包涵體，而細胞病變需2～6周才能查見。雖然病毒的分離能證明有CMV感染的存在，但并不一定能證明與疾病有病原學聯系。1、病毒感染

——CMV感染

5/15/20245褚云卓抗體檢測補體結合試驗（CF）、間接血凝試驗（PHA）、免疫熒光試驗（IF）、免疫印跡試驗（IB）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）及放射免疫試驗（RIA）等。全自動快速微粒子酶免疫檢測法（MEIA）可對IgG和IgM作出定量分析。

1、病毒感染

——CMV感染

5/15/20246褚云卓IgM陽性提示患者為現癥感染或處于CMV感染活動期。IgG陽性提示既往感染或潛伏感染。IgG抗體滴度呈4倍或4倍以上增長時，表示有近期CMV感染。嚴重的艾滋病患者血清抗CMV抗體可能陰性，故對艾滋病患者來說，CMV血清學檢查陰性不能排除CMV感染。5/15/20247褚云卓抗原檢測早期抗原免疫熒光檢查（DEAFF）：將肺泡灌洗液、血液白細胞、尿液沉積物、活檢或尸檢樣本接種于成纖維細胞，培養(yǎng)24小時后用熒光標記的單克隆抗體直接測定CMV的α和β蛋白，該法不僅快速而且敏感性和特異性均較高。1、病毒感染

——CMV感染

5/15/20248褚云卓CMV白細胞抗原血癥檢測：用免疫細胞化學的方法在外周血白細胞核中對65kDa低基質磷蛋白（65kDalow-matrixphosphoprotein，pp65）進行檢測，或利用流式細胞儀熒光標記的單克隆抗體測定白細胞中的CMV抗原，計數細胞病毒抗原的百分比，能提供定量數據。該方法可在癥狀出現前檢測到CMV病毒，可定量，以預測和區(qū)分CMV活動期和無癥狀感染?？稍u價抗病毒治療的效果以及檢測中樞神經系統(tǒng)感染的艾滋病患者的腦脊液白細胞中CMV，其檢測結果與用白細胞或血漿中CMVDNA擴增結果一致。使早期免疫受抑制或艾滋病患者的活動性CMV感染的診斷成為可能，該方法簡便、快速且敏感性高。5/15/20249褚云卓免疫組化檢查將外周血白細胞用抗CMV單克隆抗體進行免疫組化染色也可快速作出診斷。免疫熒光檢測標本中的CMV早期抗原，陽性時提示CMV活動性感染。1、病毒感染

——CMV感染

5/15/202410褚云卓CMV核酸檢測檢測和定量CMVDNA以及mRNA

提取外周血白細胞、血漿、血清中CMVDNA，采用套式PCR可診斷活動型MCV感染，利用逆轉錄PCR技術檢測外周血白細胞中MCVmRNA，能夠測出完整的病毒復制周期，特異性較普通PCR檢測DNA高。1、病毒感染

——CMV感染

5/15/202411褚云卓艾滋病患者、器官移植者當處于CMV感染的活動期時，體內含有較高水平的CMVDNA，伴隨著臨床癥狀的出現和用藥治療的失敗CMVDNA的拷貝數會快速升高。因此，Rasmussen等用外周血白細胞中的CMVDNA含量來確定艾滋病患者的視網膜炎是否由CMV感染引起。但是，用PCR方法檢測CMVDNA還不能判定患者是處于活動期、無癥狀期還是潛伏期，不能精確評估疾病的進程和用藥治療的效果。5/15/202412褚云卓形態(tài)學檢查取標本涂片，以姬姆薩和瑞氏染色，鏡檢可見多核巨細胞和核內嗜酸性包涵體。1、病毒感染

——HSV-1和HSV-2感染

5/15/202413褚云卓病毒分離在感染最初幾天取病損處的水泡液或刮片拭子或組織標本接種于HSV敏感的細胞中，常用的細胞為人胚腎、兔腎細胞、Hela細胞等。接種48～96小時后，如發(fā)現有細胞腫脹、變圓、細胞融合等細胞病變現象和特征性的核內包涵體便可作出診斷。1、病毒感染

——HSV-1和HSV-2感染

5/15/202414褚云卓免疫學檢測

HSV抗原檢測主要是用HSV特異性單克隆抗體，以免疫熒光或ELISA方法直接檢測病人組織或分泌物細胞中的HSV抗原，若為陽性則診斷為近期感染HSV。HSV抗體檢測雖然是臨床上最常用檢測HSV感染的一種手段，但艾滋病患者通常會出現假陰性反應。1、病毒感染

——HSV-1和HSV-2感染

5/15/202415褚云卓核酸檢測采用PCR技術，擴增HSV基因組中一段特異性的基因序列，是目前檢測速度最快且敏感性最高的方法，但是陰性不能排除含有HSV的可能，因為臨床早期獲得的某些樣本用PCR檢測是陰性的，另外在樣本中也可能存在PCR反應的抑制劑。在臨床診斷較困難時，HSVPCR仍將發(fā)揮作用，例如可通過PCR在艾滋病患者的玻璃體液和皮膚黏膜病損中檢測到HSVDNA。1、病毒感染

——HSV-1和HSV-2感染

5/15/202416褚云卓診斷HHV-6和HHV-7感染培養(yǎng)：可采取病人血液、唾液、體腔液或皰疹液。特異性病毒抗體：間接免疫熒光法或ELISA法檢測。

但是由于健康人群中血清抗HHV-6和抗HHV-7抗體陽性率均超過85%，因此血清學檢測的臨床意義不大。分子生物學方法：分子雜交或PCR方法直接檢測標本中的病毒核酸。1、病毒感染

——HHV-6、HHV-7和HHV-8感染

5/15/202417褚云卓血清HHV-8潛伏蛋白(latentprotein)抗體：

Kaposi’s肉瘤和B淋巴細胞瘤患者陽性，艾滋病患者血清抗HHV-8潛伏蛋白抗體陽性常預示病人即將發(fā)生Kaposi’s肉瘤。血清抗HHV-8可溶性抗原（lyticantigen）的抗體：

幾乎所有Kaposi’s肉瘤病人和90%男性同性戀HIV感染者為陽性，而正常人群陽性率為25%。1、病毒感染

——HHV-6、HHV-7和HHV-8感染

5/15/202418褚云卓皰疹基底部的組織碎片進行涂片及瑞氏或姬姆薩染色，查找嗜酸性核內包涵體，或用電子顯微鏡直接檢查水皰液中的典型皰疹病毒。采用PCR方法檢測標本中病毒核酸，方法靈敏、準確。血清學檢查多應用ELISA法，于發(fā)病2個月內查特異性IgG和IgM抗體，有診斷價值。1、病毒感染

——V-Z感染

5/15/202419褚云卓間接熒光抗體試驗（IFA）和酶聯免疫試驗（EIA）

最理想的EB病毒血清學檢測組分是VCA-IgG、EA-IgG和EBNA，這種組合，單份血清即可給90%~95%的患者進行精確診斷分類。

嗜異性抗體和EB病毒特異性抗體IgG

嗜異性凝集效價從1：50~1：224均具有臨床價值，EB病毒特異性抗體IgG滴度≥1：80即有診斷價值。檢測EB病毒的核酸

常用的方法有：冷凍切片和石蠟切片的原位雜交試驗、細胞懸液的雜交、點雜交和Southern印跡雜交等1、病毒感染

——V-Z感染

5/15/202420褚云卓2、細菌感染機會性細菌感染是艾滋病的主要致死因素，艾滋病患者因反復發(fā)生細菌感染而多次住院治療。凡是醫(yī)院及社區(qū)人群感染的細菌均可引起艾滋病患者感染，常見的細菌有金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、腸球菌、肺炎鏈球菌、假單胞菌、腸桿菌、流感嗜血桿菌和分枝桿菌等。尤其是正常免疫人群很少感染的細菌如非結核分枝桿菌等，常引起艾滋病患者機會性感染。5/15/202421褚云卓銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)

革蘭陰性，長短不一，單鞭毛。生長溫度25℃～42℃。氧化酶陽性。還原硝酸鹽、分解尿素、精氨酸酶陽性。5/15/202422褚云卓銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)5/15/202423褚云卓標本直接檢查涂片染色鏡檢：抗酸染色和熒光染色核酸檢測：MTD試驗

AMPLICORMTB方法分離培養(yǎng)：體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法2、細菌感染

——結核分枝桿菌

5/15/202424褚云卓鳥分枝桿菌菌體呈桿狀，有時亦呈球桿狀或絲狀。卵黃培養(yǎng)基表現為淡黃色，在油酸卵蛋白瓊脂培養(yǎng)基上菌落呈光滑無色素透明樣的菌落，菌落中心較厚。鳥型分枝桿菌特異性抗原檢測，或用頻率脈沖電子捕獲氣液色譜法檢測細菌中的“結核硬脂酸”，或用特異性RNA或DNA探針進行雜交試驗，或用PCR等方法鑒定標本中的鳥型分枝桿菌。2、細菌感染

——非結核分枝桿菌

5/15/202425褚云卓龜分枝桿菌菌體呈多態(tài)性，可表現為細而長或短而粗的菌體，幼齡菌呈強酸性，陳舊培養(yǎng)物可漸漸失去抗酸性。此菌為快速生長菌，培養(yǎng)要求不高，在血瓊脂培養(yǎng)基及麥康凱培養(yǎng)基上均生長良好，通常1～3天即可長出1～2mm直徑的菌落，菌落表面光滑、濕潤、有光澤、乳白色或淡黃色。2、細菌感染

——非結核分枝桿菌

5/15/202426褚云卓偶發(fā)分枝桿菌菌體呈棒狀、球狀或細絲狀，偶爾菌體亦可呈念珠狀或表現為膨脹的菌體。在液體培養(yǎng)基中菌體分叉狀。此菌為快速生長型菌，5天即可長出肉眼可見的菌落，菌落呈平滑、柔軟、奶油狀，菌落亦可呈半球狀、蠟樣分裂葉狀，亦常出現暗淡、粗糙、中心呈堆疊的菌落。在孔雀綠培養(yǎng)基上菌落可呈綠色，在玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上，菌落粗糙呈致密索狀。光滑型菌落其周圍有寬闊的網狀物。2、細菌感染

——非結核分枝桿菌

5/15/202427褚云卓真菌感染

——卡氏肺孢子蟲感染病原學檢查可從患者的痰液、支氣管肺泡灌洗液或肺活檢組織中查到卡氏肺孢子蟲。常用的染色方法有：六亞甲基四胺銀（GMS）染色：包囊壁被染成褐色，囊壁可見特征性括弧樣結構；亞甲胺藍（TBO）染色：包囊壁呈深紫色，無特征性括弧樣結構；熒光染色法：包囊呈現明亮藍綠色光環(huán)，包囊括弧樣結構清晰可見。5/15/202428褚云卓特異性DNA檢測用原位雜交技術和PCR方法檢測血液、痰、支氣管肺泡灌洗液及肺活檢組織中的卡氏肺孢子蟲DNA敏感性高，特異性好，PCR可檢出10個拷貝的靶DNA。真菌感染

——卡氏肺孢子蟲感染

5/15/202429褚云卓直接涂片鏡檢：將標本懸于生理鹽水或10%～20%的氫氧化鉀中，鏡下可見卵圓形芽胞及假菌絲，革蘭染色芽胞及假菌絲呈藍色。分離培養(yǎng)：將標本接種于沙氏葡萄糖蛋白胨瓊脂及顯色培養(yǎng)基，30～37℃培養(yǎng)24～48小時，在沙氏培養(yǎng)基上出現乳白色、光滑、中等大小的菌落，在顯色培養(yǎng)基上菌落為綠色，即可確定為白假絲酵母。真菌感染

——白假絲酵母感染

5/15/202430褚云卓墨汁染色或剛果紅水溶液染色:新型隱球菌呈圓形或橢圓形的厚壁孢子或芽生孢子，外有一層寬厚莢膜，邊緣清楚整齊，有時可見單個出芽的細胞。膠乳凝集試驗:即新型隱球菌乳膠凝集試驗，檢測病人CSF或血清中新型隱球菌莢膜多糖抗原，其特異性和敏感性均較高，可簡便快速有效診斷隱球菌性腦膜炎。分離培養(yǎng):采用自動微生物系統(tǒng)和API鑒定。真菌感染

——新型隱球菌感染

5/15/202431褚云卓5/15/202432褚云卓5/15/202433褚云卓痰涂片的直接鏡檢:可見到大量的分隔菌絲，而對疑為侵襲性曲霉病患者，推薦支氣管灌洗液標本檢查.分離培養(yǎng):可見白色絲形菌落，隨著孢子產生而轉變?yōu)榫G色或暗綠色。產生的孢子柄可長達500μm以上，柄的頂端為穹形包囊，囊表面有長串孢子攀絲。膨大的典型分生孢子柄和攀絲是曲霉菌的特點。真菌感染

——曲霉菌感染

5/15/202434褚云卓5/15/202435褚云卓5/15/202436褚云卓5/15/202437褚云卓5/15/202438褚云卓5/15/202439褚云卓5/15/202440褚云卓直接涂片瑞氏染色:可見到典型圓形或卵形有明顯橫隔的細胞，常在巨噬細胞內。分離培養(yǎng)：馬爾尼菲青霉為雙相真菌，25℃培養(yǎng)呈青霉相，37℃呈酵母相，無紅色色素產生。組織病理學檢查：在單核巨噬細胞系統(tǒng)之外的組織中常引起化膿性反應；在單核巨噬細胞系統(tǒng)器官為肉芽腫性反應；在巨噬細胞內外有酵母樣菌體，呈圓形、橢圓形或臘腸形，有橫隔。真菌感染

——馬爾尼菲青霉感染

5/15/202441褚云卓外周血涂片瑞氏、姬姆薩或過碘酸染色：為小的卵圓形出芽細胞（常群聚于巨噬細胞內），如臨床標本中可見大的厚壁細胞。分離培養(yǎng)：莢膜組織胞漿菌屬于雙相真菌，25℃沙堡弱培養(yǎng)基（SDA）為霉菌相，血瓊脂37℃培養(yǎng)可轉為酵母相，大約有30%的菌株在25℃SDA培養(yǎng)可見特征性的大分生孢子，直徑8～14μm，表面有指狀突起，還有的菌株產生橢圓形小分生孢子，直徑2～4μm，從菌絲生出銳角的小梗上，有時可以出芽似啞鈴狀。真菌感染

——莢膜組織胞漿菌感染

5/15/202442褚云卓莢膜組織胞漿菌，25℃培養(yǎng)5/15/202443褚云卓莢膜組織胞漿菌（X400）5/15/202444褚云卓莢膜組織胞漿菌（X1000）5/15/202445褚云卓莢膜組織胞漿菌（X1000）5/15/202446褚云卓直接涂片：可見特征性的圓形、厚壁（2μm）的球形體，直徑10～80μm。不出芽，內含內孢子，直徑2～5μm。球壁破裂，則有內生孢子游離在外。每個內孢子可延長為關節(jié)菌絲，關節(jié)菌絲裂為關節(jié)孢子，后者發(fā)展為小球體。在肺空洞病例，痰標本可見菌絲及小球體。真菌感染

——球孢子菌感染

5/15/202447褚云卓分離培養(yǎng)：因該菌易于播散，吸入肺中，有高度的傳染性，培養(yǎng)操作應該在有專門條件的實驗室進行。經25～30℃培養(yǎng)2～7天即可獲得可鑒定的菌絲型菌落，呈白色絨毛狀菌落，以后變灰白色，中央有叢狀菌絲，經37～40℃特殊的轉換培養(yǎng)基可產生球形體。組織病理檢查：發(fā)現原發(fā)性皮膚球孢子菌病組織學改變主要為慢性肉芽腫，播散性皮膚球孢子菌病主要表現為化膿性肉芽腫，極少數情況可見到菌絲成分。真菌感染

——球孢子菌感染

5/15/202448褚云卓病原學檢查：可見弓形蟲滋養(yǎng)體和假囊，滋養(yǎng)體較小，常位于細胞核內。免疫學檢查：循環(huán)抗原（Cag）的檢測血清抗體的檢測PCR檢測弓形蟲DNA原蟲感染

——弓形蟲感染

5/15/202449褚云卓通常用硫酸鋅或蔗糖懸浮沉淀法濃縮病人糞便，經Kinyoum抗酸染色法或碘液染色后，在相差顯微鏡下可觀察到淺粉紅色或深紅色、直徑約2～6μm大小的隱孢子蟲卵囊。也可采取病人腸粘膜活檢標本，經姬姆薩染色后，從組織標本中的微絨毛層中檢出1～4μm的隱孢子蟲滋養(yǎng)體。原蟲感染

——隱孢子蟲感染

5/15/202450褚云卓講授內容一、機會性感染病原學檢查二、性病實驗室檢查檢查5/15/202451褚云卓二、性病實驗室檢查檢查1、梅毒2、淋病3、非淋菌性尿道炎4、尖銳濕尤5/15/202452褚云卓梅毒概況●梅毒是最常見的一種性病，在20世紀之前與淋病、軟下疳、性病淋巴肉芽腫、腹股溝肉芽腫合稱為經典性病?！衩范酒鹪从跉W洲，十六世紀初傳入我國。長期以來，人們無法區(qū)分淋病與梅毒，直到1905年Schandim和Hoffman發(fā)現了梅毒的病原體梅毒螺旋體（TreponemaPallidum，TP）。5/15/202453褚云卓梅毒的臨床分期梅毒螺旋體通過粘膜或有破損的皮膚進入人體后，經淋巴系統(tǒng)及血液循環(huán)播散到全身，幾乎可以侵犯全身各臟器和組織。臨床表現多種多樣，且時顯時隱，病程較長。梅毒的病程分三期5/15/202454褚云卓一期梅毒:主要表現為生殖器形成硬下疳,即使未經治療也可自然愈合，梅毒螺旋體進入血液而潛伏于體內，約經2～3月隱伏期后進入第二期。二期梅毒：主要表現為全身皮膚黏膜出現梅毒疹，即使不加治療癥狀也常在3個月以內消退。一、二期梅毒并稱為早期梅毒。梅毒的臨床分期5/15/202455褚云卓三期梅毒：二期梅毒未經正規(guī)治療，經5年或更久有50%左右病人會發(fā)展為三期梅毒，此時病變可累及全身各器官、組織，常見的有神經系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等，嚴重的可導致死亡。此外，隱性梅毒患者雖沒有臨床癥狀，但卻是重要的傳染源。胎傳梅毒（先天梅毒）則可引起胎兒全身感染，并在出生后（7～10歲）出現皮膚梅毒、骨髓炎、楔狀齒等。梅毒的臨床分期5/15/202456褚云卓梅毒的傳播途徑梅毒主要通過性交傳播，也可通過胎盤傳染下一代，極少數患者通過其他途徑傳染。性接觸：未經治療的病人，在感染后的第一年內最具有傳染性，這些病人的皮膚、黏膜損害表面有大量梅毒螺旋體。因此，凡和這些病人有接觸（包括同性戀），皮膚和黏膜接觸到病人損害處，都可傳染上梅毒。隨著病期的延長，梅毒的傳染性逐漸減少，到感染4年后，通過性接觸幾乎無傳染性。5/15/202457褚云卓胎傳：梅毒孕婦血中的梅毒螺旋體，可通過胎盤及臍帶血傳到胎兒體內，胎兒一般于6個月后才對螺旋體的感染發(fā)生反應。未經治療的晚期（病程超過4年）梅毒婦女，雖然經過性接觸已無傳染性，但懷孕后仍可傳染胎兒，但傳染性比早期梅毒低。病期越長，傳染性越小。

梅毒的傳播途徑5/15/202458褚云卓其他途徑：極少數患者經性接觸以外的途徑感染。直接接觸的有接吻、哺乳、輸血以及新生兒經過產道而感染等。間接接觸的有接觸病人的日常用品，如剃刀、餐具、煙嘴、坐式便器、醫(yī)療器械等。醫(yī)務人員在接觸梅毒螺旋體的標本時不小心也可以感染梅毒的傳播途徑5/15/202459褚云卓梅毒在全球的流行狀況1900年世界衛(wèi)生組織把梅毒列為世界上最流行的50種疾病之一。梅毒的發(fā)病率在性傳播疾病中列第4位。估計全世界每年約有300萬新發(fā)病例。90年代末，世界上每天有100萬人感染性病，每年產生淋病病人6200萬，梅毒病人1200萬，其它性傳病原體感染病人1.5個億，發(fā)展中國家是性病和梅毒的重災區(qū)。5/15/202460褚云卓梅毒從16世紀初由印度傳入我國廣東，至今已流行400余年，解放前梅毒的發(fā)病率為所有性病之首。20世紀60年代初期，我國基本消滅了梅毒。改革開放后，梅毒再次從國外傳入我國。近年來，梅毒增長幅度明顯加快。自1979年再次報告梅毒后，報病數逐年增多，特別是1993年后，全國許多地區(qū)梅毒呈現大幅上升，至1999年全國梅毒報病數為80406例，是1993年的40倍。梅毒在國內的流行狀況（一）5/15/202461褚云卓1979-1987年全國梅毒報告病例不超過1000例；1988-1992年間每年報病數不超過2000例（1990年除外）；1993-1999年則成倍增長，年均增長85%。有的地區(qū)梅毒發(fā)病率超過150/10萬，足見其嚴重性。梅毒在國內的流行狀況（一）5/15/202462褚云卓梅毒在國內的流行狀（二）梅毒在中國的病例報告數(1985～2000)5/15/202463褚云卓2000年梅毒報病數位于前10位的省份為：廣東（10383例）、江蘇（8500例）、遼寧（8097例）、浙江（7950例）、上海（6573例）、福建（5980例）、黑龍江（3854例）、安徽（3407例）、吉林（3312例）和廣西（3106例），仍然分布在珠江三角洲、長江三角洲和東北三省。梅毒在國內的流行狀（三）5/15/202464褚云卓發(fā)病率位于前10位的省份為：上海（49.83/10萬）、遼寧（19.365/10萬）、海南（18.29/10萬）、浙江（17.69/10萬）、福建（17.67/10萬）、北京（16.08/10萬）、廣東（14.27/10萬）、吉林（12.38/10萬）、江蘇（11.70/10萬）和黑龍江（10.12/10萬）。梅毒在國內的流行狀（三）5/15/202465褚云卓2000年梅毒報告病例位于前10位的省份5/15/202466褚云卓發(fā)病率(1/10萬）位于前10位的省份為5/15/202467褚云卓由于各種原因，全國各地存在大量的梅毒漏診和漏報，我國專家估計，實際患病人數是報告數的6-10倍或以上。男性梅毒病例以一期最多，女性則以二期最多。女性的二期梅毒和隱性梅毒均多于男性，胎傳梅毒的發(fā)生率也隨之增高。梅毒在國內的流行狀（四）5/15/202468褚云卓2000年全國有26個省份報告了胎傳梅毒，共359例，較1999年增長了30.36%。其中報告病例數較多的省份為：廣東91例、福建81例、浙江59例、上海55例、黑龍江31例、遼寧29例、廣西17例、江蘇16例和安徽11例等。2001年，胎傳梅毒數仍呈明顯上升的趨勢。梅毒在國內的流行狀（四）5/15/202469褚云卓2000年全國各性病監(jiān)測點梅毒不同型別的分析分型發(fā)病數構成（%）去年同期數年增長率（%）一期梅毒490642.705432-9.68二期梅毒489542.606048-19.06三期梅毒690.6089-22.47胎傳梅毒790.6982-3.65隱性梅毒154113.41135114.06合計11490100.0013002-11.63梅毒在國內的流行狀（五）5/15/202470褚云卓梅毒在國內的流行狀（六）未經治療的梅毒對妊娠結果的影響妊娠結果早期梅毒（%）晚期梅毒（%）所有梅毒（%）死產251222新生兒死亡14912先天梅毒兒41233非梅毒兒2077335/15/202471褚云卓梅毒和一些其他性病均與艾滋病密切相關，從社會學角度來看，凡人群中梅毒發(fā)病率高，意味著人群中性亂現象嚴重，提供了艾滋病流行的條件；從醫(yī)學角度來說，患有梅毒的人，因有局部潰瘍，可明顯增加帶有CD4受體信息的目標細胞，故對HIV感染的易感性增加2～10倍。同樣，HIV感染者伴有梅毒，其生殖道排出的HIV的量要比僅有HIV感染者排出的量大得多。在HIV感染者中，梅毒血清學反應有時會出現難于解釋的現象，因此對于臨床懷疑梅毒感染而血清學試驗又表現為陰性者，建議考慮HIV檢查。

梅毒在國內的流行狀況（七）5/15/202472褚云卓人類對梅毒無先天免疫性，尚無疫苗接種進行人工免疫，僅能在受感染后產生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染。感染梅毒后，首先產生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測出，早期梅毒抗梅治療3～9個月后或晚期梅毒治療2年后，大部分病人IgM可轉陰性，再感染時又出現陽性，故IgM型抗體的存在是活動性梅毒的表現。梅毒的免疫性5/15/202473褚云卓感染梅毒四周左右產生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長時間，IgG抗體仍可通過記憶細胞的作用繼續(xù)產生，甚至終生在血清中可測出。梅毒的免疫性5/15/202474褚云卓梅毒的免疫性另一種具有抗體性質的物質叫反應素（reagin），是梅毒螺旋體破壞人體組織過程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機體所產生的抗體。反應素一般在感染后5～7周（或下疳出現后2～3周）產生。經正規(guī)治療后可逐漸消失。5/15/202475褚云卓胎兒在宮內感染梅毒螺旋體后，胚胎晚期（6～9個月）已能合成IgM型抗體，出生后第3個月開始形成IgG型抗體；IgM抗體不能通過胎盤，而IgG抗體能通過胎盤，如患兒血清中檢側出19S-IgM抗梅毒螺旋體抗體是診斷先天梅毒的有力證據。梅毒的免疫性5/15/202476褚云卓

暗視野顯微鏡檢查法：是目前國內主要的梅毒病原學診斷方法之一。適用于對一期梅毒及二期梅毒早期的檢測。取材部位以硬下疳為主，亦可從宮頸、陰道、淋巴結等處取材。陽性可確診，陰性不能排除梅毒診斷。梅毒的實驗室診斷5/15/202477褚云卓鍍銀染色法：與暗視野檢查法的臨床意義基本相同。利用梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染成棕黑色，再通過普通高倍顯微鏡進行觀察。直接免疫熒光法（DFA)：是目前國外采用較多的方法，其特異性及敏感性均優(yōu)于暗視野檢查法。將特異性的抗梅毒螺旋體單克隆抗體用熒光素標記，如標本中存在梅毒螺旋體，則通過抗原抗體特異性結合，在熒光顯微鏡下可見到發(fā)蘋果綠色的梅毒螺旋體。梅毒的實驗室診斷5/15/202478褚云卓非梅毒螺旋體抗原血清試驗：是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原檢查血清中的反應素，用于初篩試驗及療效觀察?？梢苑譃橐韵滤姆N，原理基本相同，目前我國多采用RPR和TRUST這兩種試驗：1、性病研究實驗室玻片試驗（VDRL)：由于試劑需現配現用，故而國內實驗室很少采用。但VDRL是可用于神經性梅毒診斷的血清學方法。

梅毒的實驗室診斷5/15/202479褚云卓2、快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)：在特制的紙片上進行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現凝集，用肉眼可觀察結果。3、甲苯胺紅試驗（TRUST)：在試劑中加入甲苯胺紅代替炭粉顆粒，使結果更易于觀察。4、不加熱血清反應素試驗（USR)梅毒的實驗室診斷5/15/202480褚云卓非梅毒螺旋體抗原血清試驗受多種條件的影響，有一定缺陷：

1、特異性：由于在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、結締組織病、靜脈吸毒者以及懷孕婦女中均可出現反應素，所以此類試驗有時會出現假陽性反應。梅毒的實驗室診斷5/15/202481褚云卓2、敏感性：非梅毒螺旋體抗原血清試驗有時出現弱陽性或陰性結果，而臨床上又懷疑二期梅毒，此時應將此血清稀釋后做定量試驗，如出現陽性結果，則為抗體過量引起的前帶現象。1～2％二期梅毒病人可出現此現象而發(fā)生梅毒血清假陰性反應。此外，由于感染梅毒后反應素的出現晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應素又可能轉陰，因此這類試驗不適于一、三期梅毒，對隱性梅毒和神經梅毒也不敏感。因此此類試驗做梅毒初篩時，存在一定數量的漏檢。梅毒的實驗室診斷5/15/202482褚云卓3、主觀性：結果靠肉眼觀察，帶有主觀性。優(yōu)點：

1、非梅毒螺旋體抗原血清試驗表現為滴度隨療程逐漸下降，故可以作為療效觀察的指標。

2、此類方法價格低廉梅毒的實驗室診斷5/15/202483褚云卓梅毒的實驗室診斷非梅毒螺旋體抗原血清試驗假陽性的常見原因妊娠、吸毒、惡性腫瘤、結締組織病、多發(fā)性骨髓瘤、慢性肝臟損害、衰老非感染因素細菌性心內膜炎、軟下疳、病毒性肝炎、傳染性單核細胞增多癥、結核、麻風、瘧疾、水痘、支原體或細菌性肺炎、其它螺旋體感染等感染因素病名類別5/15/202484褚云卓梅毒螺旋體抗原血清試驗：用梅毒螺旋體作為抗原檢測血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均較高。常用的有以下五種方法：

1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS)2、梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）

3、梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA)

4、梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）

5、梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT）梅毒的實驗室診斷5/15/202485褚云卓熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS)FTA-ABS是所有螺旋體試驗中最敏感的方法，特異性也很高，被認為是檢測梅毒的“金標準”。但操作困難，試驗可靠性：標準化的結果判斷、高質量的熒光標記抗體以及適當的稀釋度。實驗需有優(yōu)質的熒光顯微鏡和技術熟練的操作人員才能得到準確的結果，故常不被臨床實驗室作為首選方法。梅毒的實驗室診斷5/15/202486褚云卓梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）原理：用超聲裂解的梅毒螺旋體為抗原，致敏經醛化、鞣化的羊或禽類紅細胞，此致敏紅細胞與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體結合，產生肉眼可觀察的凝集反應。梅毒的實驗室診斷5/15/202487褚云卓優(yōu)點：該方法比FTA-ABS易操作且穩(wěn)定性好，它的敏感性除早期梅毒外與FTA-ABS相似，對大樣本進行批量檢測時，TPHA也比FTA-ABS易操作，這是目前國內許多實驗室選用的梅毒螺旋體確證試驗方法。不足：由于紅細胞具有生物活性，可能產生非特異性凝集，且保存時間較短，故實際使用中也存在一些問題。目前國內使用的商品化TPHA試劑盒均未通過國家的批批檢。梅毒的實驗室診斷5/15/202488褚云卓梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA)

原理：TPPA的原理與TPHA基本相同，它以人工合成的惰性明膠顆粒代替TPHA試驗中的紅細胞作為載體。優(yōu)點：1、試劑更穩(wěn)定，操作更簡單，結果判讀更為清楚明確，敏感性和特異性也較TPHA進一步提高。

2、TPPA的加樣、稀釋及凝集結果讀取過程已經可以實現自動化。梅毒的實驗室診斷5/15/202489褚云卓梅毒螺旋體酶聯免疫試驗（TP-ELISA）

原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚丙乙烯板，再加入待檢血清以及酶標抗原，形成雙抗原夾心，可同時檢測IgG、IgM抗體。梅毒的實驗室診斷5/15/202490褚云卓優(yōu)點：1、敏感性和特異性較高

2、價格較低，適合于對大量樣品的篩查

3、可實現操作的自動化不足：各家ELISA試劑盒采用的抗原和工藝不同，使測定的敏感性和特異性產生較大的差異，臨床實驗室在選用ELISA試劑前應認真進行評估。梅毒的實驗室診斷5/15/202491褚云卓梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT）：金標或硒標方法的主要優(yōu)點是快速及單人份使用，但其價格較為昂貴，由于此類試劑面世不久，其敏感性、特異性等指標尚有待進一步考核。梅毒的實驗室診斷5/15/202492褚云卓梅毒的實驗室診斷梅毒血清學檢測方法的比較非特異性檢測（非梅毒螺旋體抗原）特異性檢測（梅毒螺旋體抗原）檢測方法RPR、VDRL、USR、TRUSTELISA（雙抗原夾心法）TPHA、TPPA、FTA-ABS靈敏度對一、三期梅毒檢出率低較高，可同時檢測IgG和IgM抗體高，既可用于確證，也可用于初篩結果判斷肉眼觀察、判斷主觀判斷客觀，結果準確分步稀釋定量，結果準確操作手工操作一步反應，原倍血清，可實現自動化手工操作，部分可實現自動化性質療效觀察、初篩試驗初篩或確認試驗確認或初篩試驗5/15/202493褚云卓2、淋?。╣onorrhea)病原體：淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae)傳播途徑：性接觸、非性接觸感染（使用被污染的物品、淋菌性結膜炎等）、經胎盤或產道感染、偶見經血傳播（菌血癥、關節(jié)炎和腦膜炎）感染特點：泌尿生殖道系統(tǒng)化膿性炎性疾病5/15/202494褚云卓淋病的臨床表現根據臨床表現，淋病可分為：無合并癥淋病與有合并癥淋病無癥狀與有癥狀淋病播散性淋病急性與慢性淋病等。5/15/202495褚云卓男性無合并癥淋病急性淋菌性尿道炎（急性淋?。簼摲跒?-14天，常為2-5天。初起，為急性前尿道炎，約2天后，分泌物變得粘稠，尿道口溢膿，膿液呈深黃色或黃綠色，同時伴有尿道不適癥狀加重，紅腫發(fā)展到整個陰莖龜頭及部分尿道，出現尿頻、尿急、尿痛、排尿困難等?？捎懈构蓽狭馨徒Y腫大，紅腫疼痛，亦可化膿。全身癥狀一般較輕，少數可有發(fā)熱達38℃左右，全身不適，食欲不振等。5/15/202496褚云卓慢性淋菌性尿道炎（慢性淋?。喊Y狀持續(xù)2個月以上稱為慢性淋菌性尿道炎。因為治療不徹底，淋球菌可隱伏于尿道體、尿道旁腺、尿道隱窩使病程轉為慢性。臨床表現尿道常有癢感，排尿時有灼熱感或輕度刺痛、尿流細、排尿無力、滴尿。多數患者于清晨尿道有少量漿液痂封口，若擠壓陰部或陰莖根部常見稀薄粘液溢出。男性無合并癥淋病5/15/202497褚云卓女性無合并癥淋病女性原發(fā)性淋球菌感染主要部位為子宮頸，患者早期常無自覺癥狀，宮頸充血，觸痛，膿性分泌物的增多，常有外陰刺癢和燒灼感，偶有下腹痛及腰痛。淋菌性尿道炎：常于性交后2-5天發(fā)生，尿道口充血，有觸痛及膿性分泌物，有輕度尿頻、尿急、尿痛，排尿時有燒灼感，按壓尿道有膿性分泌物；淋菌性前庭大腺炎淋菌性陰道炎較少見5/15/202498褚云卓有合并癥淋病男性主要有前列腺炎、精囊炎、附睪炎。女性淋病的主要合并癥有淋菌性盒腔炎。5/15/202499褚云卓其他部位淋病淋病性結膜炎淋菌性咽炎淋菌性肛門直腸炎5/15/2024100褚云卓播散性淋球菌感染淋菌性敗血癥淋菌性關節(jié)炎淋菌性角化癥淋菌性心內膜炎淋菌性腦膜炎5/15/2024101褚云卓淋菌實驗室檢查涂片檢查：

取患者尿道分泌物或宮頸分泌物，作革蘭氏染色，在多形核白細胞內找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽性率在90%左右，可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽性率僅為50-60%，且有假陽性，因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人。5/15/2024102褚云卓培養(yǎng)檢查：

只要培養(yǎng)陽性就可確診，在基因診斷問世以前，培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。采用巧克力瓊脂或GC瓊脂培養(yǎng)基，均含有抗生素，可選擇地抑制許多其他細菌生長。在36℃，70%濕度，含5%-10%CO2（燭缸）環(huán)境中培養(yǎng)，24-48小時觀察結果。根據菌落形態(tài)，革蘭氏染色，氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗等進行鑒定。培養(yǎng)陽性率男性80%-95%，女性80-90%。淋菌實驗室檢查5/15/2024103褚云卓抗原檢測

1、固相酶免疫試驗（EIA）：

2、直接免疫熒光試驗：基因診斷

1、淋球菌的基因探針診斷

2、淋球菌的基因擴增檢測淋菌實驗室檢查5/15/2024104褚云卓藥敏試驗：在培養(yǎng)陽性后進一步作藥敏試驗。用紙片擴散法做敏感試驗，或用瓊脂平皿稀釋法測定最小抑菌濃度（MIC），用以指導選用抗生素。β-內酰胺酶試驗

淋菌實驗室檢查5/15/2024105褚云卓3、非淋菌性尿道炎

(nongonococal

urethritis，NGU)病原體：沙眼衣原體、支原體傳播途徑：主要經性接觸傳播感染特點：常與淋病同時發(fā)生、以尿道刺激癥狀及尿道少量粘液性分泌物為特點5/15/2024106褚云卓非淋菌性尿道炎的臨床表現成人男性的感染部位在尿道粘膜女性感染部位在宮頸新生兒主要引起結膜炎和肺炎潛伏期：一般1-4周，女性是1～3周。臨床有尿道炎的表現，而尿道分泌物涂片及培養(yǎng)淋球菌均陰性5/15/2024107褚云卓男性非淋菌性尿道炎癥狀比淋病輕，起病不如淋病急，癥狀拖延，時輕時重。尿道有刺癢感或灼熱感，偶有刺痛感，尿道口有分泌物，但較淋病的分泌物稀薄，為清稀狀水樣粘液性或淡黃色粘膜膿性，分泌物量也較淋病少。有時病人無任何自覺癥狀。初診時很易被漏診。5/15/2024108褚云卓女性非淋菌性尿道炎的特點是癥狀不明顯或無任何癥狀。