實驗動物的處死方法

實驗動物的處死方法摘要闡述了實驗動物的幾種常用的處死方法，包括物理方法致死、化學藥物致死、特殊實驗動物的處死等，并從動物福利角度討論了這些方法的利弊，以為實驗動物的使用提供參考。

關鍵詞實驗動物;處死方法;動物福利

安樂死是英文單詞Euthanasia的中譯，Euthanasia一詞來源于古希臘語，意思是美好的死亡、快樂的死亡、無痛苦的死亡。日本學者將Euthanasia翻譯為“安樂死”，這一譯稱為中國學者所接受[1]。實施安樂死一般遵循以下原則:①盡量減少動物的痛苦，盡量避免動物產(chǎn)生驚恐、掙扎、喊叫。②注意實驗人員安全，特別是在使用揮發(fā)性麻醉劑(乙醚、安氟醚、三氟乙烷)時，一定要遠離火源。③方法容易操作。④不能影響動物的實驗結(jié)果。⑤盡可能縮短致死時間，即安樂死從開始到動物意識消失的時間。⑥判定動物是否被安樂死，不僅要看動物呼吸是否停止，而且要看神經(jīng)反射、肌肉松弛等狀況[2]。

1物理方法致死

1.1急性失血法

此法應用于大鼠和小鼠等小動物時，常是剪斷動物的股動脈，放血致死?？梢圆捎谜矍蚍?，在鼠右側(cè)或左側(cè)眼球根部將眼球摘去，使其大量失血致死。如果是犬、貓或兔等稍大型動物應先使動物麻醉、暴露股三角區(qū)或腹腔，再切斷股動脈或腹主動脈，迅速放血。動物在3~5min內(nèi)即可死亡[3]。采用急性失血法動物十分安靜，對動物的臟器無損害，但器官貧血比較明顯，若采集組織標本制作病理切片時可用此法。

1.2斷頭法

此法適用于鼠類等小動物，可用直剪刀，也可用斷頭器。斷頭法處死動物時間短，并且臟器含血量少，若需采集新鮮臟器標本可采用此法。斷頭法會引起血液循環(huán)的突然中斷和血壓的迅速下降并伴隨意識的消失，只能用于恒溫動物。對于變溫脊椎動物不推薦用斷頭法，因為它們相對能更高的抵制缺氧[4]。

1.3空氣栓塞法

當空氣注入靜脈后，可阻塞其分支，進入心臟冠狀動脈可造成冠狀動脈阻塞，發(fā)生嚴重的血液循環(huán)障礙，動物很快死亡。此法適用于較大動物的處死，家兔、貓用此法需注入20~40mL空氣，犬致死的空氣劑量為80~150mL。由于應用此法后，動物死于急性循環(huán)衰竭，所以各臟器淤血十分明顯。

1.4斷髓法

此法適用于小鼠、大鼠等小動物。用于家兔時可敲擊延髓致死，用木錘用力錘動物的后腦部，破壞延腦，動物痙攣后死亡，簡單迅速。用于蟾蜍、蛙類可直接搗毀脊髓，將金屬探針插入枕骨大孔，破壞腦脊髓使動物死亡，操作過程中要防止毒腺分泌物射入實驗者眼內(nèi)。

2化學藥物致死

常用安樂死藥物有:吸入式麻醉劑(包括CO2、CO、乙醚、三氯甲烷等)、氯化鉀、巴比妥類麻醉劑、二氯二苯三氯乙(DDT)等。

2.1藥物吸入

藥物吸入致動物死亡適用于嚙齒類，如小鼠、大鼠、豚鼠等小動物，操作簡單，是實驗中安樂死的常用方法。因CO2無毒，制備方便，效果確切，是最常用的致死藥物。對1日齡的雛雞研究表明，CO2是有效的安樂死試劑，它幾乎不引起痛苦，抑制神經(jīng)緊張活動，在5min之內(nèi)引起動物的死亡。CO2濃度越高，動物失去意識的時間就越短。當CO2濃度增長緩慢時，也會延長動物失去意識的時間[5]?？梢圆捎锰刂频陌矘匪老?，能使CO2氣體充滿整個箱室，確保麻醉致死效果和人員安全[6]。

2.2藥物注射

藥物注射是通過將藥物注射到動物體內(nèi)，使動物致死。這種方法適用于較大的動物，如兔、貓、犬等。

氯化鉀適用于家兔和犬，可采用靜脈注射的方式。高濃度的鉀可使心肌失去收縮能力，心臟急性擴張，致心臟遲緩性停跳而死亡[7]。實驗證明注射氯化鉀后細胞損傷嚴重，線粒體腫脹很明顯，嵴模糊不清，細胞核明顯異常[8]。家兔和犬的致死量分別為10%氯化鉀5~10、20~30mL。巴比妥類麻醉劑適用于兔、豚鼠，用藥量為深麻醉劑量的25倍左右。一般用量為90mg/kg，約15min內(nèi)死亡。該類藥物能抑制丙酸氧化酶系統(tǒng)，從而抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)(特別對大腦皮質(zhì)及下丘腦)，使反射機能逐漸消失[9]。也有人稱用麻醉方法處死實驗動物不應稱為安樂死，這是按照設定程序“必須將其適時處死”，選用了無痛方法[10]，在應用上還存在爭議。

DDT適用于豚鼠、兔、犬。豚鼠致死量為3.0~4.4mg/kg，家兔為0.5~1.0mg/kg，犬為0.3~0.42mg/kg[11]。豚鼠皮下注射，家兔和犬靜脈注射。其機理可能與DDT損傷細胞修復和免疫抑制有關，并能誘導肝微粒體酶系統(tǒng)，使某些酶發(fā)生抑制，而且本身經(jīng)肝代謝而表現(xiàn)肝毒性作用[12]。

3特殊實驗動物的處死

處死昆蟲一般用燙死法，快速，可避免昆蟲掙扎或人的抓捏而造成蟲體的損傷。很多直翅目昆蟲的腿可能會因劇烈的抽搐而脫落，可在制作昆蟲標本時用萬能膠粘上去，不會影響蟲體的完整和美觀[13]。處死青蛙時可用酒精麻醉，用鑷子夾取一浸透95%酒精的棉球，塞入青蛙口腔中，三四分鐘后，青蛙便癱倒不動，效果極佳。也可用香煙麻醉，向裝有青蛙的瓶里吹幾口煙，蓋緊瓶蓋，幾分鐘后，青蛙癱倒不動[14]。狐的處死方法為將人用氯化琥珀酞膽堿針劑1支(2L，內(nèi)含100mg)稀釋100倍，注入其心臟中，狐在10~60s內(nèi)昏迷，4~7min內(nèi)死亡，昏迷后即可取皮[15]。

隨著時代的進步與發(fā)展，科學工作者在從事生命科學研究時，對待實驗動物，越來越考慮到動物福利的問題。動物福利是社會進步和經(jīng)濟發(fā)展到一定階段的必然產(chǎn)物，體現(xiàn)了人與動物協(xié)調(diào)發(fā)展的趨勢。應愛護和善待實驗動物，樹立人性化的實驗精神。這樣不僅能保證實驗動物的質(zhì)量，確保實驗結(jié)果的可靠性和準確性，還能培養(yǎng)良好的臨床心理，實現(xiàn)人性化的實驗與教學。

4參考文獻

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[2]孫敬芳.動物實驗方法學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:272.

[3]李鳳奎，王純耀.實驗動物與動物實驗方法學[M].鄭州:鄭州大學出版社，2007:341.

[4]LIAPIC，F(xiàn)ESKOUI，ZARROSA，etal.Equilibrateddietrestorestheeffectsofearlyagecholine-deficientfeedingonratbrainantioxidantstatusandenzymeactivities:theroleofhomocysteine[J].l-phenylalanineandl-alanineMetabolicBrainDisease，2008，23(3):112-114.

[5]張瀟，譚德講，李保文，等.二氧化碳安樂死在實驗動物中的應用與最新進展[J].中國比較醫(yī)學雜志，2009(8):81-84.

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[10]本刊編輯部.用麻醉方法處死實驗動物不應稱為安樂死[J].中國超聲醫(yī)學雜志，2009(1):643.

[11]何誠.實驗動物學[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2006:347.

[12]韓中明，李章，烏垠.乙醇與DDVP或DDT對大鼠的聯(lián)合毒理