洗滌用品中26種香料的測(cè)定 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

洗滌用品中26種香料的測(cè)定氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了洗滌用品中戊基肉桂醛、苯甲醇、肉桂醇、檸檬醛、丁香酚、羥基香茅醛、異丁香酚、戊基肉桂醇、水楊酸芐酯、肉桂醛、香豆素、香葉醇、羥異己基3-環(huán)己烯基甲醛、茴香醇、肉桂酸芐酯、金合歡醇、丁苯基甲基丙醛、芳樟醇、苯甲酸芐酯、香茅醇、己基肉桂醛、檸烯、2-辛炔酸甲酯、α-異甲基紫羅蘭酮等二十四種香料的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法以及橡苔提取物和樹苔提取物（以β-苔黑酚酸甲酯計(jì)）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于洗滌用品中戊基肉桂醛、苯甲醇、肉桂醇、檸檬醛、丁香酚、羥基香茅醛、異丁香酚、戊基肉桂醇、水楊酸芐酯、肉桂醛、香豆素、香葉醇、羥異己基3-環(huán)己烯基甲醛、茴香醇、肉桂酸芐酯、金合歡醇、丁苯基甲基丙醛、芳樟醇、苯甲酸芐酯、香茅醇、己基肉桂醛、檸烯、2-辛炔酸甲酯、α-異甲基紫羅蘭酮以及橡苔提取物和樹苔提取物（以β-苔黑酚酸甲酯計(jì)）含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法324種香料的測(cè)定（氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法）3.1原理用乙酸乙酯-正己烷混合液（2+8，體積比）超聲提取試樣中的二十四種香料，經(jīng)高速離心，上清液經(jīng)干燥脫水后以微孔濾膜過(guò)濾，濾液用氣相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜進(jìn)行分析，內(nèi)標(biāo)法定量。3.2試劑除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。3.2.1乙酸乙酯：色譜純。3.2.2正己烷：色譜純。3.2.3氯化鈉。3.2.4無(wú)水硫酸鈉。3.2.5提取液：乙酸乙酯-正己烷混合液（2+8，體積比）3.2.6戊基肉桂醛、苯甲醇、肉桂醇、檸檬醛、丁香酚、羥基香茅醛、異丁香酚、戊基肉桂醇、水楊酸芐酯、肉桂醛、香豆素、香葉醇、羥異己基3-環(huán)己烯基甲醛、茴香醇、肉桂酸芐酯、金合歡醇、丁苯基甲基丙醛、芳樟醇、苯甲酸芐酯、香茅醇、己基肉桂醛、檸烯、2-辛炔酸甲酯、α-異甲基紫羅蘭酮，標(biāo)準(zhǔn)品或化學(xué)試劑。3.2.7二十四種香料混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取戊基肉桂醛、苯甲醇、肉桂醇、檸檬醛、丁香酚、羥基香茅醛、異丁香酚、戊基肉桂醇、水楊酸芐酯、肉桂醛、香豆素、香葉醇、羥異己基3-環(huán)己烯基甲醛、茴香醇、肉桂酸芐酯、金合歡醇、丁苯基甲基丙醛、芳樟醇、苯甲酸芐酯、香茅醇、己基肉桂醛、檸烯、2-辛炔酸甲酯、α-異甲基紫羅蘭酮各0.1g（精確至0.1mg）置于100mL容量瓶中，用提取溶劑（3.2.5）溶解并定容至刻度，搖勻，配制成二十四種香料濃度均為1000mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃避光保存。3.2.8內(nèi)標(biāo)溶液：異佛爾酮，用提取溶劑（3.2.5）配置成1000mg/L的溶液。3.2.9氦氣：純度不小于99.999%。3.3儀器和設(shè)備3.3.1氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（GC-MS/MS）儀：配有電子轟擊電離源。3.3.2分析天平：感量為0.1mg。3.3.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于12000r/min。3.3.4具塞比色管：10mL。3.3.5渦旋混合器。3.3.6超聲波水浴。3.3.7微孔濾膜：0.45μm，有機(jī)相。3.4分析步驟3.4.1樣品處理a）普通型洗滌用品稱取0.2g（精確到0.001g）試樣至10mL的具塞比色管中，加入0.1mL內(nèi)標(biāo)溶液（3.2.8）和1mL飽和氯化鈉水溶液，渦旋分散樣品，加入10mL提取液（3.2.5），超聲30min。取1.5mL溶液轉(zhuǎn)移至的2mL具塞塑料離心管中，加入0.5g無(wú)水硫酸鈉（3.2.4），以不低于12000r/min離心15min，上清液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)樣液。b）濃縮型洗滌用品稱取0.2g（精確到0.001g）試樣至10mL的具塞比色管中，加入2mL飽和氯化鈉水溶液后渦旋分散樣品，用飽和氯化鈉水溶液定容，渦旋1min，靜置5min，準(zhǔn)確移取1mL樣液至新的10mL的具塞比色管中，加入0.1mL內(nèi)標(biāo)溶液（3.2.8），加入10mL提取液（3.2.5），超聲30min。取1.5mL溶液轉(zhuǎn)移至的2mL具塞塑料離心管中，加入0.5g無(wú)水硫酸鈉（3.2.4以不低于12000r/min離心15min，上清液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)樣液。3.4.2測(cè)定3.4.2.1氣相色譜參考條件a)色譜柱：HP-INNOWAX石英毛細(xì)管柱，30m×0.25mm（內(nèi)徑）×0.25μm，或相當(dāng)者。c)進(jìn)樣口溫度：250℃。d)傳輸線溫度：250℃。e)離子源溫度：280℃。f)載氣：氦氣，純度≥99.999%，流量：1.0mL/min。g)進(jìn)樣量：1μL。h)進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，0.5min后開閥；3.4.2.2串聯(lián)質(zhì)譜參考條件i)電離方式：EI；j)質(zhì)量掃描范圍：50amu~1000amu；k)電離能量：70eV；l)阱電流：200μAm)溶劑延遲：3minn)監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞氣能量見表1。3.4.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制采用逐級(jí)稀釋的方法，分別加入0.1mL內(nèi)標(biāo)溶液，用提取液（3.2.5）稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液成適用濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按6.2的測(cè)定條件濃度由低到高進(jìn)樣測(cè)定，分別以目標(biāo)物濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)目標(biāo)物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.4.2.4定量測(cè)試按3.4.2.1和3.4.2.2的測(cè)定條件對(duì)待測(cè)樣液進(jìn)行測(cè)定，用內(nèi)標(biāo)法定量。待測(cè)樣液中24種香料的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。3.4.3定性判定以標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間和監(jiān)測(cè)離子定性，待測(cè)樣品中監(jiān)測(cè)離子的豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品的相同離子豐度比相差不大于20%。3.4.4空白試驗(yàn)除不稱取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。3.5結(jié)果計(jì)算結(jié)果按式（1）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留兩位小數(shù)，計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。式中：負(fù)ci——c0——V——f——m——ic0Vf.........................................................................(1)樣品中被測(cè)香料的含量，mg/kg；依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得待測(cè)樣液中被測(cè)香料的濃度，mg/L；空白試樣中樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，mg/L；樣品稀釋后總體積，mL；稀釋倍數(shù)，不稀釋時(shí)為1；樣品質(zhì)量，g。3.6檢出限和定量限普通型洗滌用品中二十四種香料的檢出限均為5mg/kg，定量限均為15mg/kg；濃縮型洗滌用品中二十四種香料的檢出限均為50mg/kg，定量限均為150mg/kg。3.7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算數(shù)平均值的10%。4β-苔黑酚酸甲酯的測(cè)定（液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法）4.1原理樣品經(jīng)甲醇提取，弱陰離子固相萃取柱凈化，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，以多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行監(jiān)測(cè)，采用特征離子豐度比進(jìn)行定性，峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。4.2試劑除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。4.2.1β-苔黑酚酸甲酯對(duì)照品：（CAS號(hào)：4707-47-5），純度≥98%。4.2.2乙腈：色譜純。4.2.3甲醇：色譜純。4.2.4β-苔黑酚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L準(zhǔn)確稱取β-苔黑酚酸甲酯（4.2.1）對(duì)照品0.01g（精確至0.1mg）于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.3）定容至刻度，混勻。4.2.5β-苔黑酚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液1（10mg/L）：準(zhǔn)確移取1mL稱取β-苔黑酚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（4.5）于100mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.3）定容至刻度，混勻。4.2.6β-苔黑酚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液2（100μg/L）：準(zhǔn)確移取1mL稱取β-苔黑酚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液1（4.6）于100mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.3）定容至刻度，混勻。4.2.7β-苔黑酚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確吸取適量β-苔黑酚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液2（4.2.6），用甲醇（4.2.3）稀釋成含0，1.5，3.0，5.0，10.0，20.0，50.0μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使用前配制。4.3儀器和設(shè)備4.3.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：電噴霧離子源。4.3.2分析天平：感量為0.1mg。4.3.3渦旋振蕩器。4.3.4超聲波清洗器。4.4分析步驟4.4.1試液的制備稱取0.1g樣品于10mL比色管中，用甲醇（4.2.3）定容到刻度，渦旋混勻，25℃下超聲萃取10min，取出后再次渦旋混勻，冷卻。取上清液用甲醇（4.2.3）稀釋20倍后，溶液過(guò)0.22μm濾膜后上機(jī)測(cè)試。4.4.2測(cè)定4.4.2.1液相色譜參考條件a)色譜柱：C18柱，（100mm×2.1mm，1.8μm），或等效色譜柱；b)流動(dòng)相：A：乙腈，B：水；c)柱溫：30℃d)流量：0.25mL/min；e)進(jìn)樣量：5μL。f)梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序時(shí)間/min流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)/%流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)/%0202208909020204.4.2.2串聯(lián)質(zhì)譜參考條件g)離子源：電噴霧離子源（ESI源）；h)監(jiān)測(cè)模式：負(fù)離子模式，監(jiān)測(cè)離子對(duì)(m/z)：195->163，碰撞能10V（定量離子對(duì)195->119，碰撞能20V（定性離子對(duì)）；循環(huán)時(shí)間0.8sec；i)噴霧電壓：1500V；j)鞘氣：40Arb；k)輔助氣：5Arb；l)離子源溫度：300℃;m)傳輸管溫度325℃;n)0-6.5min：不進(jìn)入質(zhì)譜儀分析，6.5-10min：進(jìn)入質(zhì)譜儀分析。4.4.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液依次注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀按照4.4.2.1和4.4.2.2測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中β-苔黑酚酸甲酯濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。4.4.2.4試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中按照4.4.2.1和4.4.2.2測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)定，得到β-苔黑酚酸甲酯的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中β-苔黑酚酸甲酯的濃度。4.4.3空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述步驟操作。4.4.4定性判定用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)樣品進(jìn)行定性判定，在相同試驗(yàn)條件下，樣品中應(yīng)呈現(xiàn)定量離子對(duì)和定性離子對(duì)的色譜峰，被測(cè)組分的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)組分的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間一致；樣品色譜圖中所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子對(duì)的相對(duì)豐度比的偏差不超過(guò)表2規(guī)定范圍，則可以判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的被測(cè)組分。表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（k）k>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%4.5分析結(jié)果的表述試樣中β-苔黑酚酸甲酯的含量按式（1）計(jì)算：f (2)式中：ω——試樣中β-苔黑酚酸甲酯的含量，mg/kg；c——試樣中β-苔黑酚酸甲酯峰面積對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度，μg/L；c0——空白試樣中β-苔黑酚酸甲酯的質(zhì)量濃度，μg/L；V——試樣定容體積，mL；K——稀釋倍數(shù)；m——試樣質(zhì)量，g。4.6檢出限和定量限β-苔黑酚酸甲酯的檢出限為1mg/kg，定量限為3mg/kg。4.7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算數(shù)平均值的10%。（資料性附錄）二十四種香料的參考保留時(shí)間和離子對(duì)參數(shù)表A.1二十四種化合物的參考保留時(shí)間和離子對(duì)參數(shù)TableA.1Theretentiontimeandmrmparametersofthetwenty-fourcompounds序號(hào)化合物保留時(shí)間CASNo定量離子對(duì)（m/z）碰撞能定性離子對(duì)（m/z）碰撞能1檸烯6.65989-27-5136.0/121.05136.0/107.052芳樟醇78-70-6136.0/121.05136.0/107.0532-辛炔酸甲酯139.0/107.0139.0/79.04檸檬醛5392-40-5152.0/137.05137.0/43.0205香茅醇106-22-9156.0/81.0156.0/95.056香葉醇106-24-1139.0/95.05139.0/121.027α-異甲基紫羅蘭酮127-51-5206.0/191.02206.0/109.0358苯甲醇100-51-6108.0/79.0108.0/107.059羥基香茅醛107-75-5139.0/121.02139.0/93.0丁苯基甲基丙醛80-54-6204.0/189.05204.0/147.05肉桂醛104-55-2131.0/77.025131.0/10