精液品質檢查

婁底職業(yè)技術學院李繼仁精液品質檢查課時教學計劃教學目標：使學生了解精液外觀檢查；初步掌握精子活力、密度、畸形率檢查的方法。教學內容：精液品質檢查，包括外觀品質檢查、活力檢查、密度檢查；畸形率檢查；精子存活時間及指數(shù)等。教學重點：精子活力檢查教學難點：精子密度的計算教學方法：講授與討論、播放視頻帶著問題學采出的精液，如何顏色出現(xiàn)紅色、黃色、綠色，是不是正常？為什么？豬的采精量怎樣測定？牛的采精量怎樣測定？牛羊的精液為什么有云霧狀？精子活率檢查時，溫度為什么要在37~38℃，怎么控制溫度？檢查精子活率時，顯微鏡操作要注意哪些事項？精子密度檢查時，為什么用3%NaCl稀釋精液？檢查精子畸形率時，怎樣涂片？染色時前為什么要固定？染色時為什么不能讓染色液被風干？水洗時為什么水流速度要緩？5.3精液品質檢查精液品質檢查的目的鑒定精液品質的優(yōu)劣，以便決定精液能否使用、稀釋倍數(shù)和分裝份數(shù)。評價雄性種畜的飼養(yǎng)管理、人工授精各環(huán)節(jié)技術措施是否正常，以便改進。精液品質檢查的項目常規(guī)檢查：射精量、色澤、氣味、PH值、精子活力、精子密度等。定期檢查：精子計數(shù)、精子形態(tài)、精子存活時間及指數(shù)、精子抗力等。精液檢查基本操作原則：（1）采得精液立即于30℃左右恒溫容器中，標記來源。（2）作好檢查準備工作，檢查時應快捷，及時作處理。（3）操作時，避免損害精液品質，接觸精子的玻棒等應洗凈。（4）取樣應有代表性（搖勻）。（5）項目較多，不應每次都面面俱到，應常規(guī)和全面檢查相結合。（6）評定質量等級，應對各項結果作全面綜合分析，可重復某個項目。精液外觀檢查1）采精量：一次射精數(shù)量。牛羊精液可用帶有刻度的集精瓶（管）直接測出，豬馬精液用天平稱量射精量。牛5~8ml、馬60~100ml、

豬200~300ml、羊0.8~1.2ml。2）色澤：乳白或乳黃。肉眼觀察。乳白色程度越大表示精子密度越高。若呈淡綠色，表示混有膿汁；呈淡紅色，表示混有血液；呈黃色，表示混有尿液。3）氣味：精液一般無味。鼻子嗅聞。有的帶有動物本身固有的氣味，如牛、羊精液略有膻味和微汗脂味，豬精液有腥味。若有異味則不正常。4）PH值：一般為7.0左右。用試紙測定。牛羊精液因精清比例較小呈弱酸性，故PH值為6.5-6.9；豬精液因精清比例較大，故PH值為7.4-7.5。5）云霧狀：牛、羊精子密度大,混濁不透明,如翻騰滾滾的云霧。馬、豬的精子少，混濁度也較小，云霧狀不顯著。假如采取豬的濃份精液，其云霧狀也與牛羊相似。豬精液的外觀檢查顏色乳白色或淺灰色呈云霧狀綠色、黃色淺紅色、紅褐色氣味略帶腥味惡臭等異常氣味pH值正常精液pH值為7.0~7.8pH值越低,精子密度越大采精量電子天平稱量法按1g=1ml計射精量為200~500ml

正常正常異常異常精子活力檢查是指在精液中呈直線前進運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率。制片方法有壓片法和懸滴法，載玻片要預熱到37℃，放在400倍顯微鏡下觀察，濃度大的精液先用生理鹽水或等滲稀釋液稀釋后檢查。目測評定精子活率，通常采用十級評定法，即按視野中呈直線前進運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的估計百分比評定，100%直線前進運動者評為1.0?，F(xiàn)在可用計算機輔助（CASA）檢測精子運動能力。各種家畜的新鮮精液，精子活率一般在0.7~0.8，用以輸精的精液活率，液態(tài)保存精液應在0.6以上，冷凍精液在0.3以上。冷凍精液冷凍前應在0.7以上。豬精液目測估測法檢測活率按0.1~1.0的十級評分法進行評估目測估測法活率要求

鮮精活率＞0.7才可進行稀釋配制

保存精液活率＞0.6才可以使用牛精子活力檢查的程序載玻片預溫精液稀釋取樣檢查鏡檢活力估測活力記錄將恒溫加熱板放在載物臺上，打開電源并調整控制溫度至37℃，然后放在載玻片

將生理鹽水與精液等溫后，按1:10稀釋取10ul放在預溫后載玻片中間，蓋上蓋玻片用100倍和400倍觀察判斷視野中前進運動精子占的百分率

按10級制評分和記錄精子密度檢查精子密度也稱精子濃度，是指每毫升精液中含有的精子數(shù)目。目前測定精子密度的方法常采用估測法、血細胞計計算法和光電比色測定法等。各種動物的精子密度（億個/ml）：牛10（2.5~20）；豬2.5（1~3）；馬1.2（0.3~8）；羊30（20~50）。1）估測法：在顯微鏡下根據(jù)精子分布的稀稠程度，將精子密度粗略地分為“密、中、稀”。密：精子間隔距離不到一個精子，約10億/ml；中：精子與精子的間隔為1-2個精子，約2~10億/ml；?。壕优c精子的間距為2個以上精子，2億/ml以下。2）血細胞計計算法：通過計算每毫升精液中所含精子數(shù)多少來衡量精子的密度。一般采用血細胞計進行。對牛、羊等精子密度高的精液使用紅細胞吸管，而對馬、豬精子密度低的精液則使用白細胞吸管。原精液200μL，3%NaCl稀釋（豬精液一般稀釋10倍、牛精液一般稀釋100倍），計數(shù)板上放蓋玻片，滴上1滴稀釋精液，計數(shù)5個中方格精子。1ml原精液內的精子數(shù)＝5個中方個數(shù)的精子數(shù)×5×10×1000×稀釋倍數(shù)（如為原精液則不×稀釋倍數(shù)）以圖示次序計數(shù)，精子的頭部為準，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進行計數(shù)格線上的精子。3）光電比色計測定法：是目前評定精子密度一種較準確的方法，適用于牛、羊精液，如果除去精液膠塊，也可測定豬、馬精液。此法是根據(jù)精子越多，精液越濃，其透光率越低的特性，使用光電比色計通過反射光和透光程度來測定精子的密度?，F(xiàn)有精子密度儀專用于測定精子密度，快速而準確。豬精子密度檢測方法估測法精子密度儀法和CASA法血細胞計數(shù)法主觀性強，誤差大＜一個精子為“密”＝一個精子為“中”＞一個精子為“稀”最準確，但速度慢滴上1滴稀釋精液原精液200μL3%NaCl稀釋10倍計數(shù)板上放蓋玻片計數(shù)5個中方格精子將該數(shù)乘以50萬

方便、時間短、重復性好豬精子密度一般為2~3億/ml生產上主要以精子密度儀法檢測牛精子密度測定程序放計數(shù)板于載物臺上取樣稀釋精液精液注入計數(shù)室鏡檢精子計數(shù)密度計算計數(shù)板和蓋玻片一定要清潔取500ul3%氯化鈉于小試管中,加入5ul原精液,混合均勻取25ul小心地從計數(shù)板與蓋玻片的接縫中加入,使其自行吸入計數(shù)室中用100倍和400倍觀察計數(shù)五個中方格的總精子數(shù),計數(shù)以頭部為準,在格線上的數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右精子密度=5個中方格總精子數(shù)5×10×1000×100精子形態(tài)檢查精子形態(tài)正常與否對受精率有著密切關系。如果精液中含有大量畸形精子和頂體異常精子，則受精能力就會降低。1）精子畸形率：精液中形態(tài)不正常的精子稱為畸形精子，精子畸形率是指精液中畸形精子數(shù)占總精子數(shù)的百分比。在各種動物的正常精液，精子畸形率一般不超過20%，牛不得超過18%，水牛不超過15%，羊不超過14%，豬不超過18%，否則不能用于輸精。一般檢查方法是做成抹片、固定，伊紅或姬姆薩等染色后普通顯微鏡觀察計數(shù)。畸形精子各種各樣，一般可分為四類：①頭部畸形：頭部瘦小、細長、缺損、雙頭等。②頸部畸形：膨大、纖細、帶有原生滴、雙勁等。③中段畸形：膨大、纖細、彎曲、屈折、帶有原生滴等。④主段畸形：彎曲、屈折、缺損、帶有原生滴等。豬精子畸形率檢測取中層精液抹片固定液固定20minGiemsa染色90min水洗并風干置1000倍油鏡下觀察精子＞300個畸形率檢查方法相差顯微鏡直接觀察伊紅或姬姆薩等染色后普通顯微鏡觀察畸形率要求染色后顯微鏡觀查影響：畸形率過高會減少精液的受精能力要求：一般要求不超過18%為宜改善：增加精液的用量可以提高其受精效果2）精子頂體異常率：精子的正常頂體內含有多種與受精有關的酶類，在受精過程中起著重要的作用，因此，精子頂體正常與否和精子存活、受精能力有密切的關系。頂體異常有頂體膨脹、缺損、部分脫落、全部脫落等。在正常情況下，牛的頂體異常率不超過5.9%，豬不超過2.3%，如頂體異常率顯著增加，牛超過14%，豬超過4.3%,會直接影響受精率。新鮮精液經過保存或低溫打擊，精子的頂體異常率顯著增加，牛為14.1%，豬為4.3%，精液經過冷凍后變化更大，牛40%，豬45%。精子的其他檢查1）精子生存時間和生存指數(shù)精子生存時間：指精子在體外一定條件下（稀釋液、稀釋倍數(shù)、保存溫度和方法等）的總生存時間。具體算法：所有間隔時間累加后減去最后兩次間隔時間的一半即為精子的存活時間。精子生存指數(shù)：相鄰兩次檢查的間隔時間與平均活力的積之和。是精子存活時間與精子活率下降變化的一項綜合指標。精子生存時間越長，則生存指數(shù)越大，說明精子生活力越強，品質越好。檢查時間間隔時間(h)活率2次檢查平均活率h×平均活率日/月時間6/4600.8—1480.60.75.62280.50.554.47/4680.30.43.21480.20.252.02280.10.151.28/468擺動0.050.4∑=48∑=16.8生存指數(shù)：∑（h×平均活率）=16.8

生存時間：48-8/2=44h2）精子耗氧量測定精子呼吸時消耗氧氣多少與精子活力和密度有密切關系。耗氧量是指1億精子在37溫箱中孵育1h所消耗的氧氣量，可用瓦氏呼吸器測定其耗氧量，計算出精子的耗氧量。

3）精液果糖分解測定精