第4節(jié)各類高效液相色譜法

第四節(jié)、各類高效液相色譜法2024/5/211一、吸附色譜

固定相：固體吸附劑，分為極性和非極性，例如：硅膠、氧化鋁和硅酸鎂分子篩、多孔微?；钚蕴俊⒍嗫资亢?/p>

流動相：各種不同極性的一種或多種有機溶劑。

基本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸；適用于分離相對分子量中等的脂溶性試樣，對具有官能團的化合物和異構體有較高選擇性；

缺點：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾流動相：正己烷or環(huán)己烷，以一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷or丙酮作調節(jié)劑2024/5/212二、化學鍵合相色譜法化學鍵合相：采用化學反應的方法將固定液的官能團鍵合在載體表面上形成的固定相鍵合固定相：不流失；化學性質穩(wěn)定；熱穩(wěn)定性好；載樣量大；適于梯度洗脫鍵合相色譜法：正相～和反相～。正相：固定相的極性大于流動相的極性---適用于分離極性與強極性化合物。反相：固定相的極性小于流動相的極性，適用于分離非極性、極性或離子型化合物。2024/5/213硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—

C

2024/5/214鍵合相色譜固定相1）非極性鍵合相：C18、C8、甲基、苯基（反相柱）2）中等極性鍵合相：醚基（正相或反相柱）3）極性鍵合相：氨基、氰基（正相柱）2024/5/215

分離原理正相鍵合相色譜固定相：極性鍵合相---極性有機基團如胺基（-NH2）、腈基（-CN）主要靠范德華作用力的定向作用力、誘導作用力及氫鍵作用力流動相極性增大，洗脫能力增強，組分的K值減小反相鍵合相色譜固定相：極性較小的鍵合相，苯基、烷基等流動相溶劑的極性大于固定相分離機理：疏溶劑作用理論：組分分子中的非極性部分與極性溶劑產生疏溶劑斥力，與鍵合相的疏水基團產生疏水締合作用，產生保留作用；另一方面，組分分子中有極性官能團時，極性部分受到極性溶劑的作用，產生解締作用并減小其保留作用。2024/5/216疏溶劑締合作用示意圖2024/5/217決定組分保留值的因素（烷基鍵合固定相對組分分子的締合作用和解締作用能力之差）：①組分分子結構對保留值的影響：在反相鍵合相色譜中，以疏水結構差異為分離依據(jù)；組分的極性越弱，疏水性越強，保留值越大。②烷基鍵合固定相特性對保留值的影響：固定相提供非極性作用表面，鍵合到硅膠表面的烷基數(shù)量決定組分k的大小。碳鏈↑，疏水性↑，鍵合相的非極性作用的表面積↑，組分的保留值↑，選擇性↑。③流動相性質對保留值的影響：流動相的表面張力↑，介電常數(shù)↑，極性↑，此時組分與烷基鍵合相的締合作用↑，流動相的洗脫強度↓，組分的保留值↑。2024/5/218流動相正相：正己烷or環(huán)己烷，以一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷or丙酮作調節(jié)劑反相：水or緩沖鹽水溶液，加甲醇、乙腈or四氫呋喃2024/5/219三、離子對色譜

原理：將一種（或多種）與組分離子電荷相反的離子（對離子或反離子）加到流動相中使其與組分離子結合形成疏水性離子對化合物，使其能夠在兩相之間進行分配；反相離子對色譜：非極性的疏水固定相(C18柱，ODS)，含有對離子Y+的甲醇-水或乙腈-水作為流動相，樣品離子X-進入流動相后，生成疏水性離子對Y+

X-后；在兩相間分配。可以同時分離離子型化合物和中性化合物。2024/5/2110根據(jù)被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子強度大的酸堿物質。分析酸性物質常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。分析堿性物質常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與多種堿性樣品形成很強的離子對。

離子對色譜法常用ODS柱（即C18），流動相為甲醇-水或乙腈-水，水中