土壤α-葡萄糖苷酶（Solid-α-GlucosidaseS-α-GC）試劑盒說明書

第第頁土壤α-葡萄糖苷酶（Solid-α-Glucosidase，S-α-GC）試劑盒說明書土壤α葡萄糖苷酶（SolidαGlucosidase，SαGC）試劑盒說明書微量法100管/48樣注意：正式測(cè)定前務(wù)必取23個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：SαGC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間的糖苷鍵生成葡萄糖，是纖維素分解酶系中重要組成成分之一，在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。測(cè)定原理：SαGC能夠催化對(duì)硝基苯αD吡喃葡萄糖苷生成對(duì)硝基苯酚，后者在400nm有特征光吸收。自備用品：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。試劑組成和配制：試劑一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自備）試劑二：粉劑×1瓶，20℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍20℃保存；試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存；試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存；樣品處理：新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。測(cè)定步驟：1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。2、加樣表試劑名稱測(cè)定管對(duì)照管風(fēng)干土樣（g）0.020.02試劑一（μL）1010室溫振蕩混勻15min90℃振蕩混勻15min試劑二（μL）130蒸餾水130試劑三（μL）160160混勻，37℃振蕩反應(yīng)1h后，90℃水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻。10000g25℃離心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）上清液（μL）7070試劑四（μL）130130充分混勻，室溫靜置2min后，400nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。SαGC活力計(jì)算：a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=0.0032x0.0027；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。SαGC活力（μmol/d/g土樣）＝(ΔA+0.0027)÷0.0032×V反總÷W÷T=112.5×(ΔA+0.0027)T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V反總：反應(yīng)體系總體積：3×104L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=0.0016x0.0027；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。SαGC活力（μmol/d/g土樣）＝(ΔA+0.0027)÷0.0016×V反總÷W÷T=225×