（高清版）GBT 21606-2022 化學(xué)品 急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)方法

代替GB/T21606—2008,GB/T27823—2011化學(xué)品急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)方法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB/T21606—2022 I Ⅱ l2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ) 3.1術(shù)語(yǔ)和定義 l3.2縮略語(yǔ) 4試驗(yàn)方法 24.1動(dòng)物種屬選擇 24.2飼養(yǎng)條件 24.3動(dòng)物準(zhǔn)備 24.4試驗(yàn)內(nèi)容 5試驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告 45.1試驗(yàn)數(shù)據(jù) 45.2試驗(yàn)報(bào)告 附錄A(規(guī)范性)試驗(yàn)需要考慮因素 6附錄B(規(guī)范性)檢測(cè)程序流程圖劑量范圍預(yù)試驗(yàn) 附錄C(規(guī)范性)檢測(cè)程序流程圖正式試驗(yàn) 參考文獻(xiàn) I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T21606—2008《化學(xué)品急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)方法》和GB/T27823—2011《化學(xué)品急性經(jīng)皮毒性固定劑量試驗(yàn)方法》,與GB/T21606—2008和GB/T27823—2011相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：a)增加了“規(guī)范性引用文件”一章(見(jiàn)第2章);b)更改了“術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)”(見(jiàn)第3章，GB/T21606—2008和GB/T27823—2011的第2章);c)將“試驗(yàn)基本原則”“試驗(yàn)原則”更改為“試驗(yàn)需要考慮因素”,設(shè)定為附錄A(見(jiàn)附錄A,GB/T21606—2008的第4章和GB/T27823—2011的第3章);d)更改了附錄“預(yù)試驗(yàn)流程圖”和“正式試驗(yàn)流程圖”內(nèi)容(見(jiàn)附錄B和附錄C,GB/T27823—2011的附錄A和附錄B);e)刪除了GB/T21606—2008的第3章、第5章～第8章、規(guī)范性附錄B和附錄D,刪除了GB/T27823—2011的規(guī)范性附錄C。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)危險(xiǎn)化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC251)提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所、中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院、中檢科健(天津)檢驗(yàn)檢測(cè)有限責(zé)任公司、廈門(mén)豐力揚(yáng)科技有限公司、廣東義勝檢測(cè)有限公司。向小云。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——GB/T21606—2008;——GB/T27823—2011;——本次為第一次修訂。Ⅱ根據(jù)科學(xué)發(fā)展和動(dòng)物福利保護(hù)的要求，需要對(duì)化學(xué)品試驗(yàn)指南進(jìn)行定期回顧考查和更新。近期，重要相關(guān)期刊匯總分析了數(shù)百種農(nóng)藥和千余種工業(yè)化學(xué)品的急性經(jīng)口、急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)大于或等于98%的物質(zhì)，基于急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)所進(jìn)行的危害分類等同或高于源自急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分類結(jié)果。由此可見(jiàn)，依據(jù)急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)所進(jìn)行的分類對(duì)于急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)源性的物質(zhì)危害分類具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值和相關(guān)性。隨著毒理學(xué)毒性替代方法技術(shù)的不斷更新，已發(fā)布的經(jīng)皮毒性試驗(yàn)方法GBT21606—2008和GB/T27823—2011亟需修訂和校正。及時(shí)修訂是必要的，原因——公認(rèn)單性別(常為雌性)試驗(yàn)證據(jù)充分；——為增加單一急性經(jīng)皮毒性LD?的數(shù)據(jù)價(jià)值，需進(jìn)一步明確置信區(qū)間(CI);——依據(jù)全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度(GHS)的原則，設(shè)置充分適當(dāng)?shù)膭┝糠秶兄谑茉囄锏奈：Ψ诸?。傳統(tǒng)方法在評(píng)價(jià)急性毒性時(shí)常以動(dòng)物死亡作為唯一毒性終點(diǎn)。1984年，英國(guó)毒理學(xué)會(huì)提出選擇固定劑量進(jìn)行受試物染毒的方式。該方法有效避免了僅以動(dòng)物死亡作為觀察終點(diǎn)的弊端，將幾個(gè)固定劑量中的某個(gè)劑量出現(xiàn)的明顯中毒癥狀作為觀察終點(diǎn)，該劑量作為受試物的毒性分級(jí)依據(jù)。本方法也采用上述設(shè)置固定劑量的方式。此次文件的更新是基于生物統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，通過(guò)對(duì)多個(gè)急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)方案的評(píng)估和比較后確認(rèn)最優(yōu)化的試驗(yàn)方案。本方法借鑒急性經(jīng)口毒性固定劑量法和急性毒性分級(jí)的試驗(yàn)方案進(jìn)行層級(jí)化設(shè)計(jì)，并綜合分析實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡率和/或?yàn)l死狀態(tài)開(kāi)展受試物的急性經(jīng)皮毒性評(píng)價(jià)。本試驗(yàn)方案具有高復(fù)現(xiàn)性、動(dòng)物使用數(shù)量少等優(yōu)點(diǎn)。本方法可提供受試物的危害性質(zhì)信息。對(duì)于可引起急性經(jīng)皮毒性的受試物，可根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，按照全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽(GHS)的原則，對(duì)受試物進(jìn)行急性經(jīng)皮毒性的分級(jí)和分類。1GB/T21606—2022化學(xué)品急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)方法1范圍本文件規(guī)定了化學(xué)品急性經(jīng)皮毒性固定劑量試驗(yàn)方法的術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告。試驗(yàn)需要考慮因素依據(jù)附錄A。本文件適用于固定劑量法測(cè)試化學(xué)品的急性經(jīng)皮毒性。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB14925實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施3術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)下列術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)適用于本文件。3.1術(shù)語(yǔ)和定義急性經(jīng)皮毒性acutedermaltoxicity受試物在短時(shí)間內(nèi)(24h以內(nèi))一次性經(jīng)皮染毒所產(chǎn)生的有害作用。劑量dose給予受試物的量。注：表示為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單位體重所給予的受試物量(如，mg/kg)。動(dòng)物在死亡或垂死狀態(tài)出現(xiàn)前的一種表現(xiàn)。注：嚙齒類動(dòng)物臨近死亡的表現(xiàn)包括抽搐、側(cè)臥、斜臥和震顫等(詳見(jiàn)人道終點(diǎn)指南文件No.19)。半數(shù)致死量medianlethaldoseLD??由統(tǒng)計(jì)學(xué)方法推導(dǎo)出的受試物通過(guò)染毒途徑暴露可以引起50%動(dòng)物出現(xiàn)死亡的劑量。注：LD?值用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單位體重的受試物質(zhì)量(mg/kg)表示。試驗(yàn)的上限劑量。2在即使給予治療的情況下，動(dòng)物仍然即將死亡或無(wú)法存活的狀態(tài)。注：詳見(jiàn)人道終點(diǎn)指南文件No.19?？深A(yù)見(jiàn)的死亡predictabledeath出現(xiàn)的臨床表現(xiàn)提示動(dòng)物一定將在試驗(yàn)結(jié)束之前的某個(gè)時(shí)間死亡。注：例如，喪失了飲水和進(jìn)食的能力。指被檢測(cè)的物質(zhì)。3.2縮略語(yǔ)GHS:全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度(GloballyHarmonizedSystemofClassificationandLabelingofChemicals)UVCBs:未知或有多種組成成分的物質(zhì)、復(fù)雜的反應(yīng)產(chǎn)物或生物材料(ChemicalSubstancesofUnknownorVariableComposition,ComplexReactionProductsandBiologicalMaterials)4試驗(yàn)方法4.1動(dòng)物種屬選擇4.1.1優(yōu)先選擇健康成年大鼠。常規(guī)的急性經(jīng)口和急性吸入毒性試驗(yàn)研究表明，性別之間的敏感性差異通常不大，但在存在性別差異時(shí)，雌性動(dòng)物通常更為敏感。但若化學(xué)結(jié)構(gòu)相似物質(zhì)的毒理學(xué)或毒代動(dòng)力學(xué)信息表明雄性動(dòng)物更敏感，則應(yīng)選擇雄性動(dòng)物，并予以說(shuō)明。4.1.2應(yīng)選擇毒性試驗(yàn)中常采用的動(dòng)物種屬。雌性動(dòng)物應(yīng)未孕未產(chǎn)。用于染毒的每一只動(dòng)物應(yīng)為成年動(dòng)物(8周齡～10周齡),體重(200g～300g),且體重應(yīng)在已染毒動(dòng)物平均體重的±20%內(nèi)。動(dòng)物應(yīng)4.2飼養(yǎng)條件動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的溫度應(yīng)保持在20℃~26℃的范圍內(nèi)。相對(duì)濕度維持在40%～70%。采用人工照明，12h明、暗交替。采用常規(guī)實(shí)驗(yàn)室飼料喂養(yǎng)，自由飲用無(wú)菌水(依據(jù)GB14925)。4.3.1在開(kāi)始染毒前至少適應(yīng)性飼養(yǎng)5d,出于動(dòng)物福利考慮應(yīng)使用群體籠養(yǎng)。試驗(yàn)中應(yīng)隨機(jī)選擇動(dòng)物并編號(hào)標(biāo)記。4.3.2染毒前一天，應(yīng)仔細(xì)去除受試動(dòng)物背部或側(cè)面的毛(去毛面積至少為體表面積的10%)。按需麻醉動(dòng)物，以便在試驗(yàn)操作中易于控制并減少應(yīng)激反應(yīng)。應(yīng)注意避免動(dòng)物皮膚擦傷(以免改變皮膚滲透性)。確定去毛和受試物涂覆區(qū)域時(shí)應(yīng)考慮動(dòng)物體重。受試物應(yīng)盡可能均勻地涂敷在動(dòng)物背部及側(cè)面皮膚的去毛區(qū)(去毛面積至少為體表面積的310%)。受試物為高毒時(shí)，涂敷表面積可適當(dāng)減小，但應(yīng)盡可能使受試物涂抹均勻、覆蓋輕薄。在24h接觸期內(nèi)，應(yīng)使用多孔紗布覆蓋，再用無(wú)刺激性膠布固定，確保受試物與皮膚接觸。還應(yīng)以適當(dāng)方式進(jìn)一步覆蓋染毒部位，防止紗布脫落并避免動(dòng)物舔食。必要時(shí)，在不影響動(dòng)物活動(dòng)的前提下，可使用適當(dāng)約束裝置。在24h接觸期內(nèi)，可將動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，以避免籠中其他動(dòng)物舔食受試物。當(dāng)受試物為固體時(shí)，應(yīng)將其充分研磨及與適量賦形劑混勻(常使用水，但必要時(shí)可選擇其他適宜的賦形劑),確保受試物與皮膚良好接觸。當(dāng)使用其他賦形劑時(shí)，應(yīng)考慮賦形劑對(duì)受試物皮膚滲透性的影響，應(yīng)記錄賦形劑的使用量(通常為0.5mL～1mL)。液體受試物一般不需稀釋。在24h接觸期結(jié)束時(shí)，應(yīng)用水或其他溶劑去除殘余的受試物。除特殊原因(例如，由于嚴(yán)重毒性作用，與其他動(dòng)物接觸可能會(huì)增加痛苦或可加劇局部皮膚反應(yīng))外，結(jié)束皮膚受試物接觸的動(dòng)物應(yīng)群體飼養(yǎng)，盡量減少分籠飼養(yǎng)的時(shí)間。4.4.2動(dòng)物數(shù)量及劑量水平在正式試驗(yàn)中，每個(gè)劑量組使用2只動(dòng)物，按照流程依次染毒。通常，急性經(jīng)皮毒性未知或較高(例如：LDo<200mg/kg),未達(dá)豁免標(biāo)準(zhǔn)，需進(jìn)行急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)。當(dāng)受試物信息不足或缺失時(shí)，宜以200mg/kg為起始劑量，對(duì)一只動(dòng)物進(jìn)行毒性劑量范圍的預(yù)試驗(yàn)，最大程度地減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量并優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)(依據(jù)附錄B中毒性劑量范圍預(yù)試驗(yàn)流程圖)。根據(jù)毒性劑量范圍預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，按錄C流程圖中的試驗(yàn)方案，對(duì)另外2只動(dòng)物進(jìn)行正式試驗(yàn)，以確定毒性的分類結(jié)果。該試驗(yàn)設(shè)計(jì)具有生物統(tǒng)計(jì)評(píng)估數(shù)據(jù)的支持，通過(guò)比較大量試驗(yàn)方案與其各自分類預(yù)測(cè)的結(jié)果，驗(yàn)證了其可信性，即在正式試驗(yàn)中只需2只動(dòng)物即可對(duì)受試物進(jìn)行正確分類。若受試物信息充分，但仍不能豁免試驗(yàn)時(shí)，則應(yīng)基于全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度(GHS)急性經(jīng)皮毒性分類，選擇其他起始劑量(例如：50mg/kg、1000mg/kg或2000mg/kg)以及相同試驗(yàn)方案(先進(jìn)行毒性劑量范圍預(yù)試驗(yàn)，隨后進(jìn)行正式試驗(yàn))。動(dòng)物的染毒時(shí)間間隔取決于中毒癥狀的出現(xiàn)、持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重程度，最少間隔48h。直到確認(rèn)染毒動(dòng)物存活，再對(duì)下一個(gè)劑量組的動(dòng)物染毒。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的觀察期至少為14d。動(dòng)物于染毒后30min內(nèi)至少觀察一次，并在24h內(nèi)定時(shí)觀察，尤其需要注意2h～6h的反應(yīng)，此后每天觀察一次，共觀察14d。但具體觀察期應(yīng)取決于毒性反應(yīng)的性質(zhì)、出現(xiàn)時(shí)間、發(fā)生率及持續(xù)時(shí)間等。毒性反應(yīng)的發(fā)生和結(jié)束時(shí)間非常重要，尤其是在出現(xiàn)遲發(fā)毒性反應(yīng)時(shí)，需要具體判斷并準(zhǔn)確記錄。應(yīng)系統(tǒng)記錄所有觀察結(jié)果，對(duì)每只動(dòng)物單獨(dú)記錄具體表現(xiàn)。對(duì)處于瀕死狀態(tài)、嚴(yán)重痛苦和/或具有持久痛苦表現(xiàn)的動(dòng)物，應(yīng)及時(shí)實(shí)施安樂(lè)死。盡可能準(zhǔn)確記錄安樂(lè)死動(dòng)物的時(shí)間以及動(dòng)物發(fā)現(xiàn)死亡的時(shí)間。觀察內(nèi)容應(yīng)包括動(dòng)物皮膚和皮毛、眼睛和黏膜的變化，呼吸、循環(huán)、植物性神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)昏迷等情況。此外，可進(jìn)一步在清除受試物24h、48h和72h時(shí)根據(jù)Draize標(biāo)準(zhǔn)觀察染毒部位的情況，以便為皮膚刺激試驗(yàn)提供有效信息。應(yīng)在染毒前、染毒后(至少每周一次)、試驗(yàn)結(jié)束處死前稱量動(dòng)物體重。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(包括試驗(yàn)中死亡的動(dòng)物或人道處死的動(dòng)物)都應(yīng)進(jìn)行大體解剖檢查。應(yīng)記錄每只動(dòng)4物的大體病理變化。對(duì)首次染毒24h或更長(zhǎng)時(shí)間后仍存活的動(dòng)物，可考慮對(duì)其產(chǎn)生異常的組織、器官或染毒部位進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，以便提供更為細(xì)化的支持信息。5試驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告5.1試驗(yàn)數(shù)據(jù)5.1.1應(yīng)提供個(gè)體動(dòng)物的數(shù)據(jù)。所有數(shù)據(jù)均應(yīng)以表格形式匯總，并說(shuō)明各劑量組使用的動(dòng)物數(shù)量、產(chǎn)生毒性癥狀的動(dòng)物數(shù)量、試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)死亡或安樂(lè)處死的動(dòng)物數(shù)量、每個(gè)動(dòng)物的死亡時(shí)間、毒性效應(yīng)的描述和時(shí)間進(jìn)程及其恢復(fù)情況、動(dòng)物的解剖結(jié)果等。5.1.2遵照附錄B和附錄C中所述，應(yīng)確定受試物的分類。流程圖展示了以起始劑量開(kāi)始試驗(yàn)的具體步驟。根據(jù)毒性劑量范圍預(yù)試驗(yàn)，按以下三種方式之一開(kāi)展正式試驗(yàn)：a)在相同劑量水平下進(jìn)行試驗(yàn)以確認(rèn)分類結(jié)果；b)在較高劑量水平下進(jìn)行試驗(yàn)；或c)在較低劑量水平下進(jìn)行試驗(yàn)?；趧?dòng)物福利的考慮，正式試驗(yàn)中無(wú)需重復(fù)使用毒性劑量范圍預(yù)試驗(yàn)中的致死劑量。正式試驗(yàn)中各劑量組采用額外的2只動(dòng)物以證實(shí)受試物合適的危害分類。5.2試驗(yàn)報(bào)告5.2.1體內(nèi)試驗(yàn)的基本原理及現(xiàn)有試驗(yàn)數(shù)據(jù)的綜合分析已有的相關(guān)試驗(yàn)結(jié)果描述。列出每一步測(cè)試的數(shù)據(jù)。所開(kāi)展的體內(nèi)試驗(yàn)操作的權(quán)重分析。可知的受試物自身穩(wěn)定性。可知的受試物在賦形劑中的溶解性和穩(wěn)定性。單一組分物質(zhì)：a)物理性狀和其他相關(guān)的理化性質(zhì)(例如，酸/堿屬性);b)鑒別資料，包括國(guó)際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)(IUPAC)或美國(guó)化學(xué)文摘服務(wù)社名稱(CAS名稱)、CAS號(hào)、簡(jiǎn)化分子線性輸入規(guī)范(SMILES)或國(guó)際化合物標(biāo)識(shí)編碼(InChI編碼)、分子結(jié)構(gòu)式；d)實(shí)際可行的雜質(zhì)成分鑒別等。多組分物質(zhì)，未知或有多種組成成分的物質(zhì)、復(fù)雜的反應(yīng)產(chǎn)物或生物材料(UVCBs)和混合物：盡可能地提供受試物的化學(xué)成分鑒別資料(如上所述),混合物中各組分的定量和相關(guān)的理化性質(zhì)。5.2.3賦形劑(如果適用)需說(shuō)明使用賦形劑的理由，選用的賦形劑不是水時(shí)也應(yīng)說(shuō)明理由。5動(dòng)物數(shù)量、周齡和性別(如使用雄性，需說(shuō)明不選用雌性的理由)。飼料和飲水的質(zhì)量等詳細(xì)信息(包括飼料的種類/來(lái)源、飲水的來(lái)源)。動(dòng)物隨機(jī)分組的方法。受試物的詳細(xì)成分，包括染毒時(shí)所用的受試物的物理性狀。給予受試物染毒的詳細(xì)信息，包括染毒量、染毒面積和染毒時(shí)間。選擇起始染毒劑量的理由。列表體現(xiàn)每只動(dòng)物的毒性表現(xiàn)和染毒劑量(例如，死亡情況、毒性表現(xiàn)的性質(zhì)、嚴(yán)重程度和持續(xù)時(shí)間等)。列表體現(xiàn)動(dòng)物體重和體重的變化情況。每只動(dòng)物染毒當(dāng)天的體重、染毒后每周的體重、死亡及安樂(lè)死時(shí)的體重、試驗(yàn)過(guò)程中死亡動(dòng)物的死亡日期和死亡時(shí)間。每只動(dòng)物毒性表現(xiàn)的時(shí)間過(guò)程，以及是否可以恢復(fù)。若有可能，提供每只動(dòng)物尸檢和組織病理學(xué)的檢查結(jié)果。如對(duì)皮膚刺激性進(jìn)行進(jìn)一步分析，使用Draize標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估。資料解釋過(guò)程。5.2.7結(jié)果討論和解釋6(規(guī)范性)試驗(yàn)需要考慮因素A.1除非與受試物潛在經(jīng)皮毒性相關(guān)數(shù)據(jù)的權(quán)重證據(jù)分析具有明確的經(jīng)皮毒性的指向性，一般情況下，急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)不作為首選試驗(yàn)。試驗(yàn)前，應(yīng)充分了解受試物的所有信息，包括化學(xué)物的特征、化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、其他體內(nèi)外毒性試驗(yàn)結(jié)果、現(xiàn)有定量構(gòu)效關(guān)系(QSAR)數(shù)據(jù)和其他結(jié)構(gòu)相關(guān)物質(zhì)的毒性數(shù)據(jù)；受試物的可能用途、人群暴露的可能性和試驗(yàn)測(cè)試數(shù)據(jù)的用途。該信息有助于提供測(cè)試依據(jù)和選擇適當(dāng)?shù)钠鹗紕┝俊１痉椒▌┝吭O(shè)計(jì)的原則為使用預(yù)期中等毒性的劑量，避免使用預(yù)期的致死劑量。A.2本試驗(yàn)的目的在于估測(cè)受試物的急性經(jīng)皮毒性劑量范圍，化學(xué)物質(zhì)的分類信息應(yīng)與分類和標(biāo)簽規(guī)范一致。急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)所提供的信息僅限于特定靶器官，而急性毒性的評(píng)價(jià)則不限于單一靶器官，需匯總分析急性毒性各個(gè)試驗(yàn)終點(diǎn)后作出綜合性的判定。對(duì)于急性經(jīng)皮毒性的試驗(yàn)結(jié)果需要具體問(wèn)題具體分析，明確該試驗(yàn)結(jié)果對(duì)于急性毒性評(píng)價(jià)的具體價(jià)值和意義。A.3出于動(dòng)物福利的考慮，盡量避免采用具有腐蝕性或嚴(yán)重刺激性的受試物劑量。受試物的pH值和緩沖能力(酸/堿儲(chǔ)存量)可提供相關(guān)參考信息。體外試驗(yàn)可用于檢測(cè)受試物的潛在腐蝕性。瀕死動(dòng)物或極度痛苦的動(dòng)物應(yīng)被人道處死，并應(yīng)在解釋試驗(yàn)結(jié)果時(shí)將其等同于試驗(yàn)中死亡的動(dòng)物。處死瀕死動(dòng)物或極度痛苦動(dòng)物的準(zhǔn)則以及辨別動(dòng)物是否瀕死的準(zhǔn)則詳見(jiàn)相關(guān)指南文件。A.4若開(kāi)展本試驗(yàn)，應(yīng)同時(shí)考慮受試物對(duì)于局部和系統(tǒng)的影響。經(jīng)皮毒性試驗(yàn)中明確的皮膚刺激性證據(jù)(例如，3級(jí)或4級(jí)紅斑和/或3級(jí)或4級(jí)水腫)可明確受試物具有皮膚刺激作用，無(wú)需再進(jìn)行其他驗(yàn)證性試驗(yàn)。A.5對(duì)混配產(chǎn)品(包括殺蟲(chóng)劑、生物殺滅劑和其他配制產(chǎn)品)的綜合評(píng)估提示，這類產(chǎn)品的急性經(jīng)皮毒性很少大于急性經(jīng)口毒性。實(shí)際上，在大多數(shù)情況下(99%),皮膚毒物的LD?o≥2000mg/kg。因此，若經(jīng)口LD?o>2000mg/kg,則豁免急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)，以減少動(dòng)物的使用數(shù)量。此外，通過(guò)對(duì)比體內(nèi)試驗(yàn)數(shù)據(jù)與GHS計(jì)算數(shù)據(jù)(參閱GHS第3.1.3章混合物分類標(biāo)準(zhǔn)),基于各成分的急性毒性估計(jì)值(ATE)對(duì)混合物進(jìn)行計(jì)算分類，這些數(shù)據(jù)的一致性>98%(沒(méi)有低估，即假陰性),因此提供了豁免經(jīng)皮毒性試驗(yàn)的另一方法。雖然混合物中的各成分間一般不產(chǎn)生協(xié)同作用，但仍應(yīng)考慮混合物中各成分相互作用所致毒性的可能性。A.6根據(jù)附錄B的內(nèi)容設(shè)置合適的固定劑量組，受試物采用單性別動(dòng)物逐步染毒。根據(jù)受試物的現(xiàn)有信息，可能需要進(jìn)行毒性劑量范圍預(yù)試驗(yàn)(例如：受試物的現(xiàn)有信息很少或缺失)。初始劑量應(yīng)選擇可能產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)而不會(huì)引起嚴(yán)重的毒性作用或死亡的劑量。根據(jù)是否存在毒性反應(yīng)或死亡的情況，在后續(xù)試驗(yàn)中適當(dāng)增加或降低劑量。A.7將受試物按照不同劑量水平涂布于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的皮膚上，每組使用一個(gè)劑量。隨后，觀察毒性作用和動(dòng)物的死亡情況。對(duì)試驗(yàn)期間死亡的動(dòng)物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖，在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死其他所有動(dòng)物并進(jìn)行大體解剖檢查。綜合分析觀察結(jié)果對(duì)受試物進(jìn)行危害分類。7(規(guī)范性)檢測(cè)程序流程圖劑量范圍預(yù)試驗(yàn)劑量范圍預(yù)試驗(yàn)流程見(jiàn)圖B.1。開(kāi)始★50mgkgABABA結(jié)果AB圖B.1劑量范圍預(yù)試驗(yàn)流程8(規(guī)范性)檢測(cè)程序流程圖正式試驗(yàn)正式試驗(yàn)流程見(jiàn)圖C.1。開(kāi)始*2只動(dòng)物G[[S類別分類12233445朱分類結(jié)果AB無(wú)顯著毒性且無(wú)死亡2只動(dòng)物B2只動(dòng)物200mg/kgB→全部死亡2只動(dòng)物50mg:kg圖C.1正式試驗(yàn)流程9[1]Thomas,H.D.andDewhurst,I.C.(2007).Whatdoesadermalacutetoxicitystudyaddtotheinformationonaplantprotectionpesticide?Toxicol.231,114-15.[2]Creton,S.,Dewhurst,I.C.,Earl,L.K.etal.(2010).Acutetoxicitytestingofchemicals—Opportunitiestoavoidredundanttestingandusealternativeapproaches.Crit.Rev.Toxicol.40,50-83.[3]Seidle,T.,Prieto,P.andBulgheroni,A.(2011).Examiningtheregulatoryvalueofmulti-routemammalianacutesystemictoxicitystudies.ALTEX28,95-102.[4]Indans,I.,Fry,T.,Parsons,P.,etal.(1998).Classificationandlabellingofnewindustri-alchemicalsforacutetoxicity,skinandeyeirritation.Hum.Exp.Toxicol.17,529.[5]Seidle,T.,Robinson,S.,Holmes,T.etal.(2010).Cross-SectorReviewofDriversandAvailable3RsApproachesforAcuteSystemicToxicityTesting.Tox.Sci.116,382-96.[6]Moore,N.P.,Andrew,D.J.,Bjerke,D.L.etal.(2013).Canacutedermalsystemictytestsbereplacedwithoraltests?Acomparisonofroute-specificsystemictoxicityandhazardclassi-ficationsundertheGloballyHarmonizedSystemofClassificationandLabellingofChemicals(GHS).Reg.Toxicol.Pharmacol.66,30-37.[7]OECD(2016).GuidanceDocumentonWaivingorBridgingofMammalianAcuteToxicityTests.DraftdatedJanuary2016.SeriesonTestingandAssessmentNo.237,Environment,HealthandSafetyPublications,OECD,Paris.[8]BritishToxicologySocietyWorkingPartyonToxicity(1984).Sproachtotheclassificationofsubstancesandpreparationsonthebasisoftheiracutetoxicity.HumanToxicol.3,85-92.[9]OECD(2002).OECDGuidelineforTestingofChemicals:AcuteToxicClassMethod(No.423).OECD,Paris.[10]UN(2015).UnitedNationsGloballyHarmonizedofChemicals(GHS),FifthRevisedEdition,UNNewYorkandGeneva.Availableat:[/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html].[11]MielkeH.,StricklandJ.,JacobsM.N.,MehtaJ.M.(2017)BiometricalEvaluationofthePerformanceoftheRevisedTestGuideline402forAssessingAcuteDermalToxicity.Inpress.Regu-latoryToxicologyandPharmacolo[12]OECD(2002).OECDGuidelineforTestingofChemicals:AcuteOralToxicity-FixedDoseProcedure(No.420).OECD,Paris.[13