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文檔簡介
目次
前言..................................................................................................................................................................iii
1適用范圍.........................................................................................................................................................1
2規(guī)范性引用文件...........................................................................................................................................1
3術(shù)語和定義.....................................................................................................................................................1
4監(jiān)測原則........................................................................................................................................................1
5監(jiān)測方法........................................................................................................................................................2
6監(jiān)測內(nèi)容和指標(biāo)...........................................................................................................................................4
7監(jiān)測時間和頻次...........................................................................................................................................4
8數(shù)據(jù)分析........................................................................................................................................................4
9質(zhì)量控制和安全措施...................................................................................................................................6
10監(jiān)測報告編制.............................................................................................................................................6
附錄A(資料性附錄)地表和地下大型真菌樣方記錄表...........................................................................7
附錄B(資料性附錄)木生大型真菌記錄表...............................................................................................8
附錄C(資料性附錄)瀕危物種樣方記錄表...............................................................................................9
附錄D(資料性附錄)大型真菌監(jiān)測報告編寫格式.................................................................................10
i
前言
為貫徹落實《中華人民共和國環(huán)境保護法》和《中國生物多樣性保護戰(zhàn)略與行動計劃》
(2011-2030年),規(guī)范我國大型真菌監(jiān)測工作,掌握大型真菌多樣性的現(xiàn)狀及其受環(huán)境
變化的影響,保護生物多樣性,制定本標(biāo)準(zhǔn)。
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大型真菌監(jiān)測的主要內(nèi)容、技術(shù)要求和方法。
本標(biāo)準(zhǔn)附錄A、B、C、D為資料性附錄。
本標(biāo)準(zhǔn)為指導(dǎo)性標(biāo)準(zhǔn)。
本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。
本標(biāo)準(zhǔn)由環(huán)境保護部科技標(biāo)準(zhǔn)司組織制訂。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位:中國科學(xué)院微生物研究所和環(huán)境保護部南京環(huán)境科學(xué)研究所。
本標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境保護部2014年□□月□□日批準(zhǔn)。
本標(biāo)準(zhǔn)自2014年□□月□□日起實施。
本標(biāo)準(zhǔn)由環(huán)境保護部解釋。
ii
生物物種監(jiān)測技術(shù)指南大型真菌
1適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大型真菌監(jiān)測的主要內(nèi)容、技術(shù)要求和方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于中華人民共和國范圍內(nèi)大型真菌多樣性監(jiān)測。
2規(guī)范性引用文件
本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用
于本標(biāo)準(zhǔn)。
HJ623-2011區(qū)域生物多樣性評價標(biāo)準(zhǔn)
HJ628-2011生物遺傳資源采集技術(shù)規(guī)范(試行)
GB8170數(shù)值修約規(guī)則
GB10111利用隨機數(shù)骰子進行隨機抽樣的辦法
GB4883數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理和解析正態(tài)樣本異常值的判斷和處理
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3.1真菌fungi
指在傳統(tǒng)上被定義為行吸收營養(yǎng)、具細胞壁、能產(chǎn)孢、無葉綠素、以無性和有性兩種方
式繁殖的真核有機體。
3.2大型真菌macrofungi
泛指所有能夠形成肉眼可見的子實體的真菌。
3.3盤菌cupfungi
指有性階段形成子囊盤的子囊菌,包括絕大多數(shù)所有肉眼可見的子囊菌,其子囊果為杯
狀、盤狀、鐘狀、馬鞍狀、舌狀、羊肚狀等。
3.4地下真菌hypogeousfungi
指子實體整個生長過程都在地表以下的大型真菌,包括子囊菌和擔(dān)子菌的部分種類。
3.5菌根mycorrhiza
指真菌菌絲與植物根系形成的共生聯(lián)合體。
3.6外生菌根ectomycorrhiza
指菌絲只生長于細胞間隙,而不侵入寄主植物細胞壁內(nèi)的一種菌根。
3.7外生菌根真菌ectomycorrhizalfungi
指與木本植物根系形成外生菌根共生關(guān)系的一些大型真菌,絕大多數(shù)為擔(dān)子菌,少數(shù)為
子囊菌。
4監(jiān)測原則
4.1科學(xué)性原則。監(jiān)測樣地和監(jiān)測對象應(yīng)具有代表性,能夠全面反映監(jiān)測區(qū)域典型大型真菌
群落的物種和遺傳多樣性、分布格局及其動態(tài)變化。
4.2可操作性原則。監(jiān)測方案應(yīng)考慮所擁有的人力、資金和后勤保障等條件,使監(jiān)測工作切
1
實可行。應(yīng)采用效率高、成本低的監(jiān)測方法。
4.3持續(xù)性原則。監(jiān)測工作應(yīng)滿足生物多樣性保護和管理的需要,并能對生物多樣性保護和
管理起到指導(dǎo)及預(yù)警的作用。監(jiān)測樣地、樣線和樣方一經(jīng)確定,不能隨意改動。
4.4保護性原則。大型真菌對其所處生態(tài)系統(tǒng)的形成、演化和穩(wěn)定都發(fā)揮著重要作用,任何
對大型真菌的破壞都不可避免地給整個生態(tài)系統(tǒng)造成不良影響。應(yīng)做到不破壞樣地及周邊的
大型真菌資源和其他物種及其生境,避免超出客觀需要的頻繁監(jiān)測。
5監(jiān)測方法
5.1監(jiān)測準(zhǔn)備
5.1.1收集監(jiān)測區(qū)域氣候、地理和植被等自然環(huán)境的資料,掌握常見植物和大型真菌的分布
及其鑒別知識,準(zhǔn)備監(jiān)測區(qū)域高分辨率地形圖。
5.1.2準(zhǔn)備好監(jiān)測器具,包括樣方設(shè)置、標(biāo)本采集制備、菌種分離、鑒定、生物量測定、記
錄、防護、環(huán)境因子檢測等方面的工具。
5.2監(jiān)測對象
5.2.1具有重要經(jīng)濟、生態(tài)價值和受威脅的大型真菌。包括可食用和藥用的種類,與樹木共
生的外生菌根真菌,降解植物殘體的腐生大型真菌,以及一些寄生于動植物、依靠寄主營養(yǎng)
的種類等。
5.2.2能夠反映環(huán)境變化和評估生態(tài)系統(tǒng)健康程度的指示物種。
5.3樣地設(shè)置
5.3.1代表性樣地法。在監(jiān)測區(qū)域內(nèi),選取物種種類和數(shù)量都比較豐富的地點。這種地點的
監(jiān)測結(jié)果無法準(zhǔn)確反映整個監(jiān)測區(qū)域的情況,其結(jié)果也不能用于統(tǒng)計分析。
5.3.2隨機抽樣法。將監(jiān)測區(qū)域劃分為若干樣地。每個樣地內(nèi)劃分為許多固定面積的樣方并
編號,然后用Fisher的隨機數(shù)字表進行隨機取樣,通常采用的是不放回的方法。該方法的缺
點是當(dāng)樣地地形復(fù)雜時,到達取樣地點可能要耗費很多時間,另外大型真菌分布的不均勻性
會對結(jié)果造成一定的影響。這時可采用分層隨機抽樣法。
5.3.3分層隨機抽樣法??煽紤]生境類型、氣候、海拔、土地利用類型或物種豐富度等因素
進行分層,使層內(nèi)變異盡量小。
5.4野外采樣
5.4.1子實體顯見的地生大型真菌采樣
5.4.1.1這種方法主要適用于地表子實體顯見大型真菌的抽樣監(jiān)測。
5.4.1.2在所選的樣地內(nèi)設(shè)置若干條樣線,樣線不一定是直線。樣線應(yīng)覆蓋樣地內(nèi)主要生境
類型,每種生境類型至少有2條樣線,每條樣線至少保持50m距離,每條樣線長度在0.5-1km。
用GPS儀定位樣線起點和終點坐標(biāo),在1:10萬地圖上標(biāo)注樣線。
5.4.1.3沿著樣線,每隔20m設(shè)置一個半徑1.262m、面積5㎡的圓型樣方,使每種生境類
型的樣方數(shù)量達50個左右。樣方內(nèi)生境必須盡可能同質(zhì)。用一定標(biāo)志標(biāo)明樣方的位置。
5.4.1.4統(tǒng)計所選樣方中地表大型真菌的種類、個體數(shù)量(樣方記錄表見附錄A)。對于無法
2
鑒別種類的大型真菌,采集少量子實體,對其進行編號后,放入相應(yīng)的袋子。
5.4.1.5在進行樣方采樣時,應(yīng)同時拍攝樣方原生境照片,并詳細記錄采集日期、地點、海
拔、生態(tài)特征(如著生基質(zhì)、周圍植被、共生生物等)、采集人等。
5.4.2子實體較小種類的樣方取樣
5.4.2.1這種方法主要適合于子實體較小種類的監(jiān)測(如子囊菌中的一些盤菌等)。
5.4.2.2樣地每年至少抽樣兩次,一般在子實體發(fā)生季節(jié)的中間和末尾進行。
5.4.2.3在靠近5.4.1中大型真菌樣方的附近建立樣方。
5.4.2.4以0.56m為半徑,建立1㎡的圓形樣方,以1周內(nèi)可完成抽樣調(diào)查為標(biāo)準(zhǔn),確定樣
方數(shù)目。
5.4.2.5統(tǒng)計所選樣方中子實體小型真菌的種類、個體數(shù)量,少量采集樣方內(nèi)各小型真菌物
種子實體用于鑒定,編號后放入相應(yīng)的袋子。同時按5.4.1.5記錄相關(guān)信息。
5.4.3木腐大型真菌采樣
5.4.3.1被調(diào)查的圓木直徑必須大于20cm,長度超過2m,并且倒伏在地面上。
5.4.3.2按照腐朽程度將圓木劃分為三個等級:一等,剛剛倒伏,樹皮仍完整;二等,中度
腐爛,樹皮脫落,用刀可以不費力地切入到2cm深處;三等,完全腐爛,手指可以損毀。
每個樣地內(nèi),每個腐朽等級選擇30個圓木作為樣品。
5.4.3.3每棵圓木用一彩色的塑料標(biāo)牌標(biāo)記并編號,同時在地圖上標(biāo)記其位置。鑒定倒木的
種類,記錄其長度和直徑。如果圓木兩端直徑差異較大,則需要記錄兩端及中間直徑。如果
圓木存在主要的分枝,則每個分枝也需要進行測量。
5.4.3.4統(tǒng)計每棵圓木上生長的大型真菌種類和個體數(shù)(記錄表見附錄B)。對于無法鑒別種
類的大型真菌,采集少量子實體,對其進行編號后,放入相應(yīng)的袋子。同時按5.4.1.5記錄
相關(guān)信息。
5.4.4地下真菌抽樣—樣線法
5.4.4.1取樣的樣方沿著一條通過樣地的線設(shè)置,這條線不一定是直線。在樣地內(nèi),樣線可
分散。如果同一區(qū)域內(nèi)重復(fù)設(shè)置樣線,樣線至少保持20m距離。
5.4.4.2沿著樣線,每隔6m設(shè)置一個4㎡的圓形樣方。通常每5-15ha面積設(shè)置25個樣方,
總?cè)用娣e達100㎡。
5.4.4.3如果監(jiān)測地區(qū)是一個斜坡,可以在斜坡的頂部、中部和底部各設(shè)置一條樣線,每個
樣線的樣方數(shù)分別為8、9和8個。
5.4.4.4統(tǒng)計所選樣方中地下真菌的種類、個體數(shù)量,少量采集樣方內(nèi)各地下真菌物種子實體
用于鑒定,編號后放入相應(yīng)的袋子。同時按5.4.1.5記錄相關(guān)信息。
5.4.5瀕危物種采樣
5.4.5.1在所選樣地內(nèi)有瀕危物種分布的地塊上,設(shè)置若干10m×10m的樣方。
5.4.5.2統(tǒng)計樣方內(nèi)瀕危物種的種類和個體數(shù)(記錄表見附錄C)。采集大小適中的個別子實
體,對其稱重,用以推測樣方內(nèi)該物種子實體的生物量,或通過以往年份采集子實體樣品重
量推測其生物量。同時按5.4.1.5記錄相關(guān)信息。
5.5標(biāo)品制備和保存
5.5.1大型真菌標(biāo)本制備和保存。采集的標(biāo)本應(yīng)及時分離菌種和制作用于提取DNA的組織
3
塊。標(biāo)本采用烘干箱在40–50℃溫度下及時烘干。含水量較多且個體較大標(biāo)本烘干時需要剖
開、切成薄片后烘干。烘干的標(biāo)本置于-40℃以下的冰柜中冷凍殺蟲一周以上,個別體積較
大標(biāo)本的冷凍時間應(yīng)延長。冷凍后的標(biāo)本保存在標(biāo)本館等適宜場所。
5.5.2用于提取DNA的組織塊的制備和保存。用解剖刀或鑷子從子實體上選取無深色色素
且較為干凈的組織,用干凈的吸水紙包裹后,放入裝有變色硅膠的封口袋中干燥處理。為保
證干燥的效果,應(yīng)及時更換變色硅膠,以獲得完全干燥的樣品。干燥后的組織塊保存在放有
少量變色硅膠的自封袋內(nèi),并避開高溫高濕的環(huán)境。
5.5.3土壤和菌根樣品的處理和保存。清洗掉外生菌根上的土壤粒子以及植物碎片等雜質(zhì)。
將含有菌根的土樣放在土壤篩中,用水管輕輕地沖掉其表面比較松散的雜質(zhì)。把樹根浸泡在
水里,并置于解剖鏡下,用纖細的鑷子和軟的小毛刷仔細清洗。清洗干凈的外生菌根放在塑
料管的蒸餾水中,然后放入-20℃的冰箱中待用。
5.5.4大型真菌子實體形態(tài)鑒定。依據(jù)形態(tài)特征對大型真菌子實體進行鑒定。對標(biāo)本的宏觀
和微觀形態(tài)特征以及化學(xué)顯色反應(yīng)進行觀察和描述,對照權(quán)威文獻鑒定物種。
5.5.5大型真菌子實體和培養(yǎng)物的分子鑒定。通過DNA測序獲得標(biāo)本特征性基因的序列信
息,與Genbank和監(jiān)測人員自測的可靠的大型真菌基因序列相對照,給出標(biāo)本正確的名稱。
6監(jiān)測內(nèi)容和指標(biāo)
6.1大型真菌多樣性監(jiān)測指標(biāo),包括種類組成、分布格局、密度、頻度、物種多樣性指數(shù)和
群落演替指數(shù)等。
6.2特定物種監(jiān)測指標(biāo),包括遺傳多樣性、分布格局等。
6.3環(huán)境變化對大型真菌影響監(jiān)測的指標(biāo),包括植物種類組成、分布格局、樹齡、郁閉度、
氣溫、地溫、降水量、土壤含水量、空氣濕度、光照條件、空氣污染程度、土壤和子實體污
染物蓄積量等。
7監(jiān)測時間和頻次
7.1監(jiān)測時間應(yīng)貫穿監(jiān)測區(qū)域大型真菌子實體的生長季節(jié),北方地區(qū)在6月末至9月初,中
南部亞熱帶地區(qū)在5月至10月,南方熱帶地區(qū)在4月至11月。
7.2一般自生長季的起始至末期,每兩周監(jiān)測1次;在子實體發(fā)生盛季,可每周監(jiān)測1次。
7.3對于一些形成革質(zhì)或木栓質(zhì)子實體的一年生種類,在生長季的初期、中期和末期各監(jiān)測
1次。
7.4子實體多年生的種類在每個生長季的末期監(jiān)測1次。
7.5由于子實體的發(fā)生年際存在差異,在保證監(jiān)測結(jié)果可比性的基礎(chǔ)上,監(jiān)測時間和頻次可
根據(jù)生長季作一定的微調(diào)。但監(jiān)測時間和頻次一經(jīng)確定,一般應(yīng)保持固定。
8數(shù)據(jù)分析
8.1密度。指單位面積上某物種的個體數(shù),按式(1)計算。
DiNi/A(1)
2
式中,Di——物種i的密度,株/m;
Ni——樣方內(nèi)物種i的個體數(shù),株,每個克隆株按一個個體計數(shù);
4
A——樣方面積,m2。
8.2相對密度。按式(2)計算。
D
RDEi100
D
i(2)
式中,RDE——相對密度,%;
2
Di——樣方內(nèi)某物種i的密度,株/m;
D
i——樣方中所有物種密度的總和,株/m2。
8.3頻度。指某物種在樣地中出現(xiàn)的百分率,按(3)計算。
Q
Fi100(3)
iQ
式中,F(xiàn)i——物種i的頻度,%;
Qi——樣地內(nèi)某物種i出現(xiàn)的樣方數(shù),個;
Q
——樣地內(nèi)被調(diào)查的樣方總數(shù),個。
8.4相對頻度。按式(4)計算。
F
RFEi100
F
i(4)
式中,RFE——相對頻度,%;
Fi為——物種i的頻度,%;
F
i——所有物種的總頻度,%。
8.5豐富度指數(shù)
Patrick(1949)豐富度指數(shù)Dp=S
Margalef(1958)豐富度指數(shù)DMa=(S1)/lnN
Menhinick(1964)豐富度指數(shù)DMe=S/N
式中,S——物種數(shù),
N——樣地內(nèi)所有物種的個體數(shù)。
8.6多樣性指數(shù)
多樣性指數(shù)
Shannon-WienerH’=PilnPi
多樣性指數(shù)2
SimpsonD=1Pi
式中,Pi為物種i的個體數(shù)占樣地內(nèi)總個體數(shù)的比例,i=1,2,…,S。
8.7均勻度指數(shù)
均勻度指數(shù)
Pielou1Jsw=(PilnPi)/lnS)
均勻度指數(shù)2
Pielou2Jsi=(1Pi)/(11/S)
8.8S?rensen相似性指數(shù)
2j
C
sab
式中,Cs——相似性指數(shù),(%);
j——兩個群落或樣地共有種數(shù),個;
a——樣地A的物種數(shù),個;
5
b——樣地B的物種數(shù),個。
8.9大型真菌群落演替指數(shù)按式(5)計算。
S
E1LMi
S
LMo(5)
式中,E——演替速率;
SLMi——第i時刻群落的相似性指數(shù);
SLMo——初始群落的相似性指數(shù)。
9質(zhì)量控制和安全措施
9.1嚴(yán)格按照指南要求進行監(jiān)測樣地、樣線和樣方的設(shè)置。采取相應(yīng)措施保護好樣地、樣線
和樣方。
9.2編制監(jiān)測區(qū)域大型真菌鑒定手冊,對觀測人員開展監(jiān)測知識培訓(xùn),提升觀測人員的監(jiān)測
能力和水平。
9.3認真填寫監(jiān)測記錄表,需要更正時,應(yīng)在錯誤數(shù)據(jù)(文字)上劃一橫線,在其上方寫上
正確內(nèi)容,并在所劃橫線上加蓋修改者簽章。
9.4保持記錄本完整,作廢的表格需寫明原因并加蓋經(jīng)手人簽章,不得撕毀其中任一表格。
原始記錄及數(shù)據(jù)整理過程記錄都需要建立檔案并存檔。
9.5建立數(shù)據(jù)審核程序,全面、細致地審核監(jiān)測數(shù)據(jù)的正確性和完整性,發(fā)現(xiàn)可疑、缺漏數(shù)
據(jù)及時補救。
9.6建立數(shù)據(jù)備份制度,將所有監(jiān)測數(shù)據(jù)和文檔換成電子文檔并進行備份(光盤、硬盤),
防止數(shù)據(jù)丟失。
9.7購買必要的防護用品和應(yīng)急藥品,做好安全防護工作,防止毒蛇和昆蟲叮咬,在確保人
身安全的情況下方可進行監(jiān)測,避免單人作業(yè)。
10監(jiān)測報告編制
大型真菌監(jiān)測報告應(yīng)包括前言,監(jiān)測區(qū)域概況,監(jiān)測方法,監(jiān)測區(qū)域大型真菌的種類組
成、區(qū)域分布、種群動態(tài)、面臨的威脅,對策建議等。監(jiān)測報告編寫格式見附錄D。
6
附錄A
(資料性附錄)
地表和地下大型真菌樣方記錄表
樣地名稱:樣線編號:
樣方編號:調(diào)查日期:
樣方海拔(m):樣方經(jīng)度:樣方緯度:
樣方地貌類型:樣方坡向:樣方坡度:
樣方植被類型:樣方郁閉度:
樣方內(nèi)主要木本植物:
樣方內(nèi)主要草本植物:
前1周天氣狀況最高氣溫:最低氣溫:總降雨量:
當(dāng)日天氣狀況日照:氣溫:地溫:
樣方土壤類型:樣方土壤pH:樣方土壤含水量
調(diào)查人:
備注:
序號物種名稱株數(shù)成熟個體數(shù)(株)
7
附錄B
(資料性附錄)
木生大型真菌記錄表
樣地名稱:圓木編號:
圓木所在地海拔(m):調(diào)查日期:
圓木所在地經(jīng)緯度:圓木所在地坡向:
圓木所在地地貌類型:圓木所在地坡度:
圓木所在地植被類型:圓木所在地郁閉度:
圓木所在地主要木本植物:
圓木所在地主要草本植物:
圓木種名:圓木直徑:圓木長度:
圓木腐朽程度:□1等□2等□3等
前1周天氣狀況最高氣溫:最低氣溫:總降雨量:
當(dāng)日天氣狀況日照:氣溫:地溫:
調(diào)查人:
備注:
序號物種名稱株數(shù)成熟個體數(shù)(株)
8
附錄C
(資料性附錄)
瀕危物種樣方記錄表
樣地名稱:樣方編號:
樣方面積:調(diào)查日期:
樣方海拔(m):樣方緯度:
樣方經(jīng)度:樣方坡向:
樣方地貌類型:樣方坡度:
樣方植被類型:樣方郁閉度:
樣方內(nèi)主要木本植物:
樣方內(nèi)主要草本植物:
前1周天氣狀況最高氣溫:最低氣溫:總降雨量:
當(dāng)日天氣狀況日照:氣溫:地溫:
樣方土壤類型:樣方土壤pH:樣方土壤含水量
調(diào)查人:
備注:
序號物種名稱株數(shù)成熟個體數(shù)(株)
9
附錄D
(資料性附錄)
大型真菌監(jiān)測報告編寫格式
大型真菌監(jiān)測報告由封面、報告目錄、正文、致謝、參考文獻、附錄等組成。
1.封面
包括報告標(biāo)題、監(jiān)測單位、編寫單位及編寫時間等。
2.報告目錄
一般列出二到三級目錄。
3.正文
包括:
(1)前言;
(2)監(jiān)測區(qū)域概況;
(3)監(jiān)測目標(biāo);
(4)工作組織;
(5)監(jiān)測方法;
(6)大型真菌的種類組成、區(qū)域分布、種群動態(tài)、面臨的威脅;
(7)對策建議。
4.致謝
5.參考文獻
按照《文后參考文獻著錄規(guī)則》(GB/T7714-2005)的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
10
中華人民共和國環(huán)境保護標(biāo)準(zhǔn)
HJ□□—20□□
生物物種監(jiān)測技術(shù)指南大型真菌
TechnicalGuidelinesforSpeciesMonitoringMacrofungi
(征求意見稿)
生物物種監(jiān)測技術(shù)指南大型真菌
1適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大型真菌監(jiān)測的主要內(nèi)容、技術(shù)要求和方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于中華人民共和國范圍內(nèi)大型真菌多樣性監(jiān)測。
2規(guī)范性引用文件
本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用
于本標(biāo)準(zhǔn)。
HJ623-2011區(qū)域生物多樣性評價標(biāo)準(zhǔn)
HJ628-2011生物遺傳資源采集技術(shù)規(guī)范(試行)
GB8170數(shù)值修約規(guī)則
GB10111利用隨機數(shù)骰子進行隨機抽樣的辦法
GB4883數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理和解析正態(tài)樣本異常值的判斷和處理
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3.1真菌fungi
指在傳統(tǒng)上被定義為行吸收營養(yǎng)、具細胞壁、能產(chǎn)孢、無葉綠素、以無性和有性兩種方
式繁殖的真核有機體。
3.2大型真菌macrofungi
泛指所有能夠形成肉眼可見的子實體的真菌。
3.3盤菌cupfungi
指有性階段形成子囊盤的子囊菌,包括絕大多數(shù)所有肉眼可見的子囊菌,其子囊果為杯
狀、盤狀、鐘狀、馬鞍狀、舌狀、羊肚狀等。
3.4地下真菌hypogeousfungi
指子實體整個生長過程都在地表以下的大型真菌,包括子囊菌和擔(dān)子菌的部分種類。
3.5菌根mycorrhiza
指真菌菌絲與植物根系形成的共生聯(lián)合體。
3.6外生菌根ectomycorrhiza
指菌絲只生長于細胞間隙,而不侵入寄主植物細胞壁內(nèi)的一種菌根。
3.7外生菌根真菌ectomycorrhizalfungi
指與木本植物根系形成外生菌根共生關(guān)系的一些大型真菌,絕大多數(shù)為擔(dān)子菌,少數(shù)為
子囊菌。
4監(jiān)測原則
4.1科學(xué)性原則。監(jiān)測樣地和監(jiān)測對象應(yīng)具有代表性,能夠全面反映監(jiān)測區(qū)域典型大型真菌
群落的物種和遺傳多樣性、分布格局及其動態(tài)變化。
4.2可操作性原則。監(jiān)測方案應(yīng)考慮所擁有的人力、資金和后勤保障等條件,使監(jiān)測工作切
1
實可行。應(yīng)采用效率高、成本低的監(jiān)測方法。
4.3持續(xù)性原則。監(jiān)測工作應(yīng)滿足生物多樣性保護和管理的需要,并能對生物多樣性保護和
管理起到指導(dǎo)及預(yù)警的作用。監(jiān)測樣地、樣線和樣方一經(jīng)確定,不能隨意改動。
4.4保護性原則。大型真菌對其所處生態(tài)系統(tǒng)的形成、演化和穩(wěn)定都發(fā)揮著重要作用,任何
對大型真菌的破壞都不可避免地給整個生態(tài)系統(tǒng)造成不良影響。應(yīng)做到不破壞樣地及周邊的
大型真菌資源和其他物種及其生境,避免超出客觀需要的頻繁監(jiān)測。
5監(jiān)測方法
5.1監(jiān)測準(zhǔn)備
5.1.1收集監(jiān)測區(qū)域氣候、地理和植被等自然環(huán)境的資料,掌握常見植物和大型真菌的分布
及其鑒別知識,準(zhǔn)備監(jiān)測區(qū)域高分辨率地形圖。
5.1.2準(zhǔn)備好監(jiān)測器具,包括樣方設(shè)置、標(biāo)本采集制備、菌種分離、鑒定、生物量測定、記
錄、防護、環(huán)境因子檢測等方面的工具。
5.2監(jiān)測對象
5.2.1具有重要經(jīng)濟、生態(tài)價值和受威脅的大型真菌。包括可食用和藥用的種類,與樹木共
生的外生菌根真菌,降解植物殘體的腐生大型真菌,以及一些寄生于動植物、依靠寄主營養(yǎng)
的種類等。
5.2.2能夠反映環(huán)境變化和評估生態(tài)系統(tǒng)健康程度的指示物種。
5.3樣地設(shè)置
5.3.1代表性樣地法。在監(jiān)測區(qū)域內(nèi),選取物種種類和數(shù)量都比較豐富的地點。這種地點的
監(jiān)測結(jié)果無法準(zhǔn)確反映整個監(jiān)測區(qū)域的情況,其結(jié)果也不能用于統(tǒng)計分析。
5.3.2隨機抽樣法。將監(jiān)測區(qū)域劃分為若干樣地。每個樣地內(nèi)劃分為許多固定面積的樣方并
編號,然后用Fisher的隨機數(shù)字表進行隨機取樣,通常采用的是不放回的方法。該方法的缺
點是當(dāng)樣地地形復(fù)雜時,到達取樣地點可能要耗費很多時間,另外大型真菌分布的不均勻性
會對結(jié)果造成一定的影響。這時可采用分層隨機抽樣法。
5.3.3分層隨機抽樣法??煽紤]生境類型、氣候、海拔、土地利用類型或物種豐富度等因素
進行分層,使層內(nèi)變異盡量小。
5.4野外采樣
5.4.1子實體顯見的地生大型真菌采樣
5.4.1.1這種方法主要適用于地表子實體顯見大型真菌的抽樣監(jiān)測。
5.4.1.2在所選的樣地內(nèi)設(shè)置若干條樣線,樣線不一定是直線。樣線應(yīng)覆蓋樣地內(nèi)主要生境
類型,每種生境類型至少有2條樣線,每條樣線至少保持50m距離,每條樣線長度在0.5-1km。
用GPS儀定位樣線起點和終點坐標(biāo),在1:10萬地圖上標(biāo)注樣線。
5.4.1.3沿著樣線,每隔20m設(shè)置一個半徑1.262m、面積5㎡的圓型樣方,使每種生境類
型的樣方數(shù)量達50個左右。樣方內(nèi)生境必須盡可能同質(zhì)。用一定標(biāo)志標(biāo)明樣方的位置。
5.4.1.4統(tǒng)計所選樣方中地表大型真菌的種類、個體數(shù)量(樣方記錄表見附錄A)。對于無法
2
鑒別種類的大型真菌,采集少量子實體,對其進行編號后,放入相應(yīng)的袋子。
5.4.1.5在進行樣方采樣時,應(yīng)同時拍攝樣方原生境照片,并詳細記錄采集日期、地點、海
拔、生態(tài)特征(如著生基質(zhì)、周圍植被、共生生物等)、采集人等。
5.4.2子實體較小種類的樣方取樣
5.4.2.1這種方法主要適合于子實體較小種類的監(jiān)測(如子囊菌中的一些盤菌等)。
5.4.2.2樣地每年至少抽樣兩次,一般在子實體發(fā)生季節(jié)的中間和末尾進行。
5.4.2.3在靠近5.4.1中大型真菌樣方的附近建立樣方。
5.4.2.4以0.56m為半徑,建立1㎡的圓形樣方,以1周內(nèi)可完成抽樣調(diào)查為標(biāo)準(zhǔn),確定樣
方數(shù)目。
5.4.2.5統(tǒng)計所選樣方中子實體小型真菌的種類、個體數(shù)量,少量采集樣方內(nèi)各小型真菌物
種子實體用于鑒定,編號后放入相應(yīng)的袋子。同時按5.4.1.5記錄相關(guān)信息。
5.4.3木腐大型真菌采樣
5.4.3.1被調(diào)查的圓木直徑必須大于20cm,長度超過2m,并且倒伏在地面上。
5.4.3.2按照腐朽程度將圓木劃分為三個等級:一等,剛剛倒伏,樹皮仍完整;二等,中度
腐爛,樹皮脫落,用刀可以不費力地切入到2cm深處;三等,完全腐爛,手指可以損毀。
每個樣地內(nèi),每個腐朽等級選擇30個圓木作為樣品。
5.4.3.3每棵圓木用一彩色的塑料標(biāo)牌標(biāo)記并編號,同時在地圖上標(biāo)記其位置。鑒定倒木的
種類,記錄其長度和直徑。如果圓木兩端直徑差異較大,則需要記錄兩端及中間直徑。如果
圓木存在主要的分枝,則每個分枝也需要進行測量。
5.4.3.4統(tǒng)計每棵圓木上生長的大型真菌種類和個體數(shù)(記錄表見附錄B)。對于無法鑒別種
類的大型真菌,采集少量子實體,對其進行編號后,放入相應(yīng)的袋子。同時按5.4.1.5記錄
相關(guān)信息。
5.4.4地下真菌抽樣—樣線法
5.4.4.1取樣的樣方沿著一條通過樣地的線設(shè)置,這條線不一定是直線。在樣地內(nèi),樣線可
分散。如果同一區(qū)域內(nèi)重復(fù)設(shè)置樣線,樣線至少保持20m距離。
5.4.4.2沿著樣線,每隔6m設(shè)置一個4㎡的圓形樣方。通常每5-15ha面積設(shè)置25個樣方,
總?cè)用娣e達100㎡。
5.4.4.3如果監(jiān)測地區(qū)是一個斜坡,可以在斜坡的頂部、中部和底部各設(shè)置一條樣線,每個
樣線的樣方數(shù)分別為8、9和8個。
5.4.4.4統(tǒng)計所選樣方中地下真菌的種類、個體數(shù)量,少量采集樣方內(nèi)各地下真菌物種子實體
用于鑒定,編號后放入相應(yīng)的袋子。同時按5.4.1.5記錄相關(guān)信息。
5.4.5瀕危物種采樣
5.4.5.1在所選樣地內(nèi)有瀕危物種分布的地塊上,設(shè)置若干10m×10m的樣方。
5.4.5.2統(tǒng)計樣方內(nèi)瀕危物種的種類和個體數(shù)(記錄表見附錄C)。采集大小適中的個別子實
體,對其稱重,用以推測樣方內(nèi)該物種子實體的生物量,或通過以往年份采集子實體樣品重
量推測其生物量。同時按5.4.1.5記錄相關(guān)信息。
5.5標(biāo)品制備和保存
5.5.1大型真菌標(biāo)本制備和保存。采集的標(biāo)本應(yīng)及時分離菌種和制作用于提取DNA的組織
3
塊。標(biāo)本采用烘干箱在40–50℃溫度下及時烘干。含水量較多且個體較大標(biāo)本烘干時需要剖
開、切成薄片后烘干。烘干的標(biāo)本置于-40℃以下的冰柜中冷凍殺蟲一周以上,個別體積較
大標(biāo)本的冷凍時間應(yīng)延長。冷凍后的標(biāo)本保存在標(biāo)本館等適宜場所。
5.5.2用于提取DNA的組織塊的制備和保存。用解剖刀或鑷子從子實體上選取無深色色素
且較為干凈的組織,用干凈的吸水紙包裹后,放入裝有變色硅膠的封口袋中干燥處理。為保
證干燥的效果,應(yīng)及時更換變色硅膠,以獲得完全干燥的樣品。干燥后的組織塊保存在放有
少量變色硅膠的自封袋內(nèi),并避開高溫高濕的環(huán)境。
5.5.3土壤和菌根樣品的處理和保存。清洗掉外生菌根上的土壤粒子以及植物碎片等雜質(zhì)。
將含有菌根的土樣放在土壤篩中,用水管輕輕地沖掉其表面比較松散的雜質(zhì)。把樹根浸泡在
水里,并置于解剖鏡下,用纖細的鑷子和軟的小毛刷仔細清洗。清洗干凈的外生菌根放在塑
料管的蒸餾水中,然后放入-20℃的冰箱中待用。
5.5.4大型真菌子實體形態(tài)鑒定。依據(jù)形態(tài)特征對大型真菌子實體進行鑒定。對標(biāo)本的宏觀
和微觀形態(tài)特征以及化學(xué)顯色反應(yīng)進行觀察和描述,對照權(quán)威文獻鑒定物種。
5.5.5大型真菌子實體和培養(yǎng)物的分子鑒定。通過DNA測序獲得標(biāo)本特征性基因的序列信
息,與Genbank和監(jiān)測人員自測的可靠的大型真菌基因序列相對照,給出標(biāo)本正確的名稱。
6監(jiān)測內(nèi)容和指標(biāo)
6.1大型真菌多樣性監(jiān)測指標(biāo),包括種類組成、分布格局、密度、頻度、物種多樣性指數(shù)和
群落演替指數(shù)等。
6.2特定物種監(jiān)測指標(biāo),包括遺傳多樣性、分布格局等。
6.3環(huán)境變化對大型真菌影響監(jiān)測的指標(biāo),包括植物種類組成、分布格局、樹齡、郁閉度、
氣溫、地溫、降水量、土壤含水量、空氣濕度、光照條件、空氣污染程度、土壤和子實體污
染物蓄積量等。
7監(jiān)測時間和頻次
7.1監(jiān)測時間應(yīng)貫穿監(jiān)測區(qū)域大型真菌子實體的生長季節(jié),北方地區(qū)在6月末至9月初,中
南部亞熱帶地區(qū)在5月至10月,南方熱帶地區(qū)在4月至11月。
7.2一般自生長季的起始至末期,每兩周監(jiān)測1次;在子實體發(fā)生盛季,可每周監(jiān)測1次。
7.3對于一些形成革質(zhì)或木栓質(zhì)子實體的一年生種類,在生長季的初期、中期和末期各監(jiān)測
1次。
7.4子實體多年生的種類在每個生長季的末期監(jiān)測1次。
7.5由于子實體的發(fā)生年際存在差異,在保證監(jiān)測結(jié)果可比性的基礎(chǔ)上,監(jiān)測時間和頻次可
根據(jù)生長季作一定的微調(diào)。但監(jiān)測時間和頻次一經(jīng)確定,一般應(yīng)保持固定。
8數(shù)據(jù)分析
8.1密度。指單位面積上某物種的個體數(shù),按式(1)計算。
DiNi/A(1)
2
式中,Di——物種i的密度,株/m;
Ni——樣方內(nèi)物種i的個體數(shù),株,每個克隆株按一個個體計數(shù);
4
A——樣方面積,m2。
8.2相對密度。按式(2)計算。
D
RDEi100
D
i(2)
式中,RDE——相對密度,%;
2
Di——樣方內(nèi)某物種i的密度,株/m;
D
i——樣方中所有物種密度的總和,株/m2。
8.3頻度。指某物種在樣地中出現(xiàn)的百分率,按(3)計算。
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