人3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸（CMPF）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

第第頁(yè)人3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸（CMPF）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人（Human）3羧基4甲基5丙基2呋喃丙酸（CMPF）

ELISA檢測(cè)試劑盒

使用說(shuō)明書(shū)

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被3羧基4甲基5丙基2呋喃丙酸（CMPF）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的3羧基4甲基5丙基2呋喃丙酸（CMPF）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘

取上清。

5.保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.酶標(biāo)儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.試劑盒保存在28℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

無(wú)

樣本稀釋液

6mL

3mL

無(wú)

檢測(cè)抗體HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

無(wú)

底物B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2張

2張

無(wú)

說(shuō)明書(shū)

1份

1份

無(wú)

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無(wú)

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0S5）濃度依次為：0、7.5、15、30、60、120pg/mL

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

2.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

3.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

4.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

5.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900、

2.靈敏度：最低檢測(cè)濃度小于1.0pg/mL。

3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.貯藏：28℃，避光防潮保存。

6.有效期