藥用植物種質(zhì)資源保存規(guī)范

1藥用植物種質(zhì)資源保存規(guī)范本文件規(guī)定了藥用植物種質(zhì)資源保存原則、保存方法、質(zhì)量監(jiān)測(cè)與更新以及技術(shù)檔案的要求。本文件適用于深圳市藥用植物種質(zhì)資源的保存。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T2930.2草種子檢驗(yàn)規(guī)程凈度分析GB/T2930.4草種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)GB/T2930.8草種子檢驗(yàn)規(guī)程水分測(cè)定GB/T2930.9草種子檢驗(yàn)規(guī)程重量測(cè)定GB/T3543.3農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程凈度分析GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)GB/T3543.6農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程水分測(cè)定GB/T3543.7農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程其他項(xiàng)目檢驗(yàn)GB/T14072—1993林木種質(zhì)資源保存原則與方法GB/T20399自然保護(hù)區(qū)總體規(guī)劃技術(shù)規(guī)程SZDB/Z130—2015植物種質(zhì)資源離體保存庫(kù)建設(shè)規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1種質(zhì)資源germplasmresources具有不同遺傳基礎(chǔ)的植物個(gè)體和群體的各種繁殖材料總稱。[來(lái)源：GB/T14072-1993,2.2,有修改]3.2原地保存conservationinsitu又稱就地保存，指將種質(zhì)資源在原生地保存。[來(lái)源：GB/T14072-1993,2.7]3.3遷地保存conservationexsitu又稱異地保存，指將種質(zhì)資源遷移出原生地栽培保存。[來(lái)源：GB/T14072-1993,2.8]23.4種子保存seedconservation將成熟種子干燥至適宜的含水量，并在適宜的低溫條件下長(zhǎng)期保存以維持種子活力的方法。3.5離體保存conservationinvitro將離體培養(yǎng)的小植株、器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等材料，采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄑ泳徎蛲Ｖ蛊渖L(zhǎng)，需要時(shí)可立即恢復(fù)其生長(zhǎng)，并再生植株的方法。[來(lái)源：SZDB/Z130-2015,3.6,有修改]3.6外植體explant用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體等起始培養(yǎng)材料。[來(lái)源：SZDB/Z130-2015,3.14]4種質(zhì)資源保存原則4.1優(yōu)先保存原則優(yōu)先保存本地區(qū)分布的各級(jí)重點(diǎn)保護(hù)藥用植物、珍稀瀕危藥用植物、嶺南特色藥用植物和有科研價(jià)值、生態(tài)價(jià)值或經(jīng)濟(jì)價(jià)值的藥用植物。4.2分類保存原則針對(duì)本地區(qū)珍稀瀕危藥用植物（見表A.1）、各級(jí)重點(diǎn)保護(hù)藥用植物、在深圳有分布的嶺南特色藥用植物以及其他有經(jīng)濟(jì)和應(yīng)用價(jià)值的藥用植物實(shí)施分類保存。對(duì)每個(gè)物種進(jìn)行分類標(biāo)記，特別需要重點(diǎn)保護(hù)的物種需要?jiǎng)澏▏?yán)格限制的區(qū)域進(jìn)行特殊保存。4.3因地制宜原則依據(jù)種質(zhì)資源的生物學(xué)和生態(tài)學(xué)習(xí)性、瀕危程度、生境破壞程度以及環(huán)境特點(diǎn)等，因地制宜選擇原地保存、遷地保存、種子保存和離體保存等方法。5種質(zhì)資源保存方法5.1原地保存5.1.1保護(hù)區(qū)選址原則依據(jù)不同情況設(shè)立兩類保護(hù)區(qū)：a）一類是以保護(hù)生物多樣性為主，重點(diǎn)關(guān)注其中的藥用植物；b）一類是對(duì)某一種或幾種藥用植物建立專屬保護(hù)區(qū)。保護(hù)區(qū)選址應(yīng)同時(shí)滿足以下基本條件：a）植物生境受威脅嚴(yán)重，人為干擾加?。籦）生態(tài)系統(tǒng)、氣候環(huán)境、自然條件和種群數(shù)量具有代表性；c）遠(yuǎn)離公路、礦區(qū)、工業(yè)設(shè)施所在地、規(guī)?；B(yǎng)殖區(qū)、潛在淹沒地、滑坡塌方或規(guī)劃中的建設(shè)用地。5.1.2保護(hù)區(qū)選址方法3對(duì)擬建立保護(hù)區(qū)的藥用植物進(jìn)行全面調(diào)查，查明其地理分布，并取樣分析其遺傳多樣性；根據(jù)調(diào)查結(jié)果和遺傳多樣性分析的數(shù)據(jù)，確定某種藥用植物的遺傳多樣性分布中心；以其遺傳多樣性分布中心確定保護(hù)區(qū)具體地理位置。5.1.3保護(hù)區(qū)建設(shè)根據(jù)主要保存植物的生長(zhǎng)、繁殖特點(diǎn)和相關(guān)法規(guī)建立以保存藥用植物為核心的自然保護(hù)區(qū)，設(shè)立核心保護(hù)區(qū)和一般控制區(qū)。保護(hù)區(qū)的具體規(guī)劃和建設(shè)要求參照GB/T20399相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。5.1.4數(shù)據(jù)觀測(cè)和記錄保護(hù)區(qū)的藥用植物觀察記錄項(xiàng)目見表B.1。所有的觀測(cè)記錄資料應(yīng)建立詳細(xì)的檔案。5.2遷地保存5.2.1條件遵守國(guó)際和國(guó)內(nèi)的相關(guān)政策和規(guī)定，不收集任何非法購(gòu)買或不允許收集的物種，不引種攜帶病蟲害或入侵性植物，并具備下列條件之一：a）當(dāng)藥用植物種群原有生境破碎成斑塊狀，或者原生境不復(fù)存在；b）當(dāng)藥用植物種群數(shù)目下降到極低水平，個(gè)體難以繁殖；c）當(dāng)藥用植物種群的生存環(huán)境突然變化導(dǎo)致面臨生存危機(jī)。5.2.2方法主要有傳統(tǒng)的花園、農(nóng)場(chǎng)、種質(zhì)資源圃和植物園等形式，參考遷地保存目標(biāo)植物的生境，重點(diǎn)做好以下工作：a）引進(jìn)的非本地物種需根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)性分析報(bào)告決定隔離試種時(shí)間，從境外引入的一年生植物不得少于一個(gè)生長(zhǎng)周期，多年生植物不得少于2年；b）加強(qiáng)栽培管理，保證植物正常生長(zhǎng)繁殖，繁殖期管理要有利于促進(jìn)種群自然繁殖更新；c）需進(jìn)行復(fù)份異地保存，以防止因自然災(zāi)害或意外導(dǎo)致資源丟失。5.2.3數(shù)據(jù)觀測(cè)和記錄建立永久檔案，按照表B.1規(guī)定的內(nèi)容詳細(xì)記錄每個(gè)個(gè)體的采集情況及栽培管理措施。5.3種子保存5.3.1接納登記接納登記的種子材料按照表B.1規(guī)定的內(nèi)容填寫基本信息。接納登記時(shí)需檢查種子質(zhì)量、數(shù)量和健康狀況，選擇當(dāng)季收獲的新種子。5.3.2去雜清選按照GB/T2930.2-2017第6章、GB/T3543.3-1995第5章的規(guī)定，清除雜質(zhì)、其他植物種子和空癟、霉變種子，種子凈度不低于98%。5.3.3分類、排序、編號(hào)、建檔清選好的種子，按科屬分類，依次進(jìn)行編號(hào)、登記，建立檔案。5.3.4重量測(cè)定4從凈度分析后并充分混合的凈種子中，分出一部分作為試驗(yàn)樣品，按需求任選百粒法、千粒法、全量法中的一種測(cè)定種子重量，具體測(cè)量要求、方法應(yīng)按照GB/T2930.9-2017第4章、GB/T3543.7-1995第12章中的規(guī)定執(zhí)行。5.3.5發(fā)芽率測(cè)定測(cè)定種子發(fā)芽率應(yīng)按以下規(guī)定：a）從待測(cè)種子中隨機(jī)取數(shù)量相等的3份種子，數(shù)量根據(jù)種子大小而定，中小粒種子（千粒重<100g）每份100粒；大粒種子（100g≤千粒重≤500g）每份50粒；特大粒種子（千粒重>500g）每份25粒；b）種子發(fā)芽率檢測(cè)按GB/T2930.4-2017第5章、GB/T3543.4-1995第6章規(guī)定的試驗(yàn)程序進(jìn)行，若無(wú)規(guī)定，則參照相關(guān)文獻(xiàn)或研究獲得適宜方法后進(jìn)行；c）種子入庫(kù)前，一般要求栽培種發(fā)芽率≥85%，野生種、稀有種及特殊遺傳材料發(fā)芽率≥70%。5.3.6干燥符合入庫(kù)的種子應(yīng)及時(shí)干燥，干燥時(shí)間的長(zhǎng)短依藥用植物種子的大小、數(shù)量、最初含水量和干燥條件而定：a）若干燥的種子份數(shù)少，將種子裝入粗紗布袋，按種子與硅膠的重量比為1:1，在干燥器中室溫下脫水干燥；b）若干燥的種子份數(shù)多，在溫度10℃~25℃,相對(duì)濕度10%～15%的干燥箱（間）干燥；c）頑拗型種子不耐脫水，需因具體植物材料而定。5.3.7含水量測(cè)定按照GB/T2930.8-2017第6章、GB/T3543.6-1995第5章中給出測(cè)定程序，根據(jù)植物種子的特性分別選擇低恒溫烘干法、高恒溫烘干法測(cè)定種子含水量。5.3.8包裝稱重經(jīng)干燥處理的種子稱量記錄重量后，及時(shí)密封包裝，包裝材料可選擇玻璃罐、塑料瓶、螺紋鋁盒或鋁箔袋等。5.3.9入庫(kù)保存根據(jù)種子的特性及保存需求可選擇以下保存方法：a）長(zhǎng)期庫(kù)保存：貯藏溫度為零下18℃~零下20℃,相對(duì)濕度小于50%，種子含水量5%~7%，一般可保存50年以上；b）中期庫(kù)保存：貯藏溫度為零下4℃~4℃,相對(duì)濕度小于65%，種子含水量5%～9%，一般可保存15年以上；c）短期庫(kù)保存：貯藏溫度為10℃~15℃,相對(duì)濕度小于65%，種子含水量5%～9%，一般可保存5年；d）頑拗型種子保存：該類種子不耐脫水及低溫，在不影響種子發(fā)芽率的前提下，應(yīng)盡可能降低貯藏溫度及種子含水量，并添加殺菌劑保存種子，以達(dá)到短期貯存的目的；或利用超低溫保存技術(shù)（液氮）長(zhǎng)期保存頑拗性種子或其離體胚或胚軸，具體的保存方法參照相關(guān)文獻(xiàn)或研究獲得適宜方法后進(jìn)行。5.3.10入庫(kù)定位根據(jù)種質(zhì)庫(kù)保存材料的特點(diǎn)，制定庫(kù)編號(hào)和庫(kù)位號(hào)的編碼規(guī)則，可以種子入庫(kù)年份+采集地首字母+種子入庫(kù)先后順序號(hào)的格式編號(hào)（見圖1），對(duì)符合入庫(kù)條件的每一份材料編碼后入庫(kù)定位保存，并輸入種質(zhì)資源管理數(shù)據(jù)庫(kù)。5圖1入庫(kù)編號(hào)示例5.4孢子保存孢子的采集和保存需符合以下要求：a）需注意孢子的成熟度和采收時(shí)期，避免同時(shí)采集不同種類的孢子時(shí)出現(xiàn)相互混雜現(xiàn)象；b）采集時(shí)將覆有成熟孢子的葉片剪下，蒸餾水沖洗干凈，濾紙吸干水分，紙袋包裝后置于通風(fēng)干燥處陰干；孢子自然干燥、脫落后收集孢子，容器密封；c）依據(jù)不同植物的特性，選擇4℃、零下15℃~零下20℃或是超低溫（液氮）保存。5.5離體保存5.5.1保存材料選擇來(lái)源可靠、種源純正的外植體材料，參照SZDB/Z130－2015中5.3的規(guī)定進(jìn)行外植體消毒和離體培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)產(chǎn)生的材料作為離體保存的材料。5.5.2保存容器依材料情況選擇不同規(guī)格大小的試管或組培瓶，塑料蓋封口，用標(biāo)簽寫明種質(zhì)編號(hào)。5.5.3保存條件與數(shù)量根據(jù)保存需求，參照SZDB/Z130－2015中5.4、5.5描述的要求，可選擇以下兩種保存方法：a）常溫保存：保存溫度25℃,環(huán)境相對(duì)濕度適宜，光照強(qiáng)度1500lx～3000lx，光照時(shí)間10h～16h，培養(yǎng)基依種質(zhì)資源而定，每份種質(zhì)資源保存10管（或瓶）以上，每管（或瓶）1~10個(gè)繁殖材料，每2～3個(gè)月繼代一次；b）低溫保存：保存溫度5℃~18℃,環(huán)境相對(duì)濕度適宜，光照強(qiáng)度1500lx～3000lx，光照時(shí)間8h～12h，培養(yǎng)基依種質(zhì)資源而定，每份種質(zhì)資源保存10管（或瓶）以上，每管（或瓶）1～10個(gè)繁殖材料，每12～15個(gè)月繼代一次。6種質(zhì)資源質(zhì)量監(jiān)測(cè)與更新6.1長(zhǎng)期庫(kù)保存種子材料種子發(fā)芽率測(cè)定方法見5.3.5，種子發(fā)芽率監(jiān)測(cè)間期為10年；當(dāng)種子發(fā)芽率低于85%時(shí)，種子發(fā)芽率監(jiān)測(cè)間期依據(jù)種類的不同而縮短。6.2中期庫(kù)保存種子材料種子發(fā)芽率測(cè)定方法見5.3.5，種子發(fā)芽率監(jiān)測(cè)間期為5年。6.3種子材料更新當(dāng)入庫(kù)保存的種子材料出現(xiàn)下列情況之一時(shí)，應(yīng)繁殖更新：6a）藥用植物種子發(fā)芽率降至50%以下；b）自花授粉藥用植物每份活種子數(shù)量低于600粒，異花授粉藥用植物每份活種子數(shù)量低于800粒；c）當(dāng)種子在中期庫(kù)絕種時(shí)，長(zhǎng)期庫(kù)應(yīng)繁殖更新。6.4離體保存材料離體保存材料受培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件等影響，培養(yǎng)出的組培苗遺傳特性發(fā)生變化，其形態(tài)上也表現(xiàn)出不同于原種質(zhì)的特征時(shí)（如葉片變細(xì)長(zhǎng)或不規(guī)則扭曲、植株黃化、白化、植株變矮等），應(yīng)更新離體保存材料。離體保存的材料變異率應(yīng)≤2%。7技術(shù)檔案種質(zhì)資源保存相關(guān)單位須及時(shí)記錄、收集、整理和分析當(dāng)年的各項(xiàng)技術(shù)資料，建立系統(tǒng)的技術(shù)檔案；所有檔案資料應(yīng)同時(shí)保存紙質(zhì)文檔和電子文檔，紙質(zhì)文檔內(nèi)容應(yīng)清晰明確，電子文檔應(yīng)有備份；每年分類整理，編號(hào)目錄，裝訂成冊(cè)，歸檔保存。7（資料性）深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄表A.1列出了深圳市珍稀瀕危藥用植物名單。表A.1深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄序號(hào)植物書1AngiopterisfokiensisHieron.2BraineainsignisⅡⅡ3欏AlsophiladenticulateBakerⅡⅡ4AlsophilaspinulosaⅡ√Ⅱ5DipterischinensisⅡⅡ6眾Cyrtomiumfalcatum7Phlegmariurusfordii8蕨Loxogramesalicifolia(Makino)9OphioglossumreticulatumLinn.Ⅱ萁OsmundaangustifoliaOsmundajaponicaCeratopterisⅡ柏Selaginellapulvinata(Hook.Amentotaxus√ActinidiafulvicomaⅡActinidiahenryiActinidialatifoliaⅡ8表A.1深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄（續(xù)）序號(hào)植物書青IlexgracilifloraCalophyllummembranaceumGardn.瑚AucubachinensisArgyreiaacutaLour.Erycibeobtusifolia蕷DioscoreapersimilisAdenantheramicrospermaTeijsm.檀DalbergiabalansaeEntadaphaseoloides豆OrmosiaemarginataSpatholobussuberectusDunn.SemiliquidambarcathayensisH.T.Ⅱ√IlliciumternstroemioidesA.楠Beilschmiediabrevipaniculata木DysoxylumhongkongenseTonaciliateRoem.Ⅱ√TinosporasagittataArtocarpushypargyreusHance.√ArtocarpusstyracifoliusNepenthesmirabilisCamptothecaacuminateDecne.Ⅱ9表A.1深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄（續(xù)）序號(hào)植物書蘭AcamperigidaⅡⅡAnoectochilusⅡⅡAppendiculacornutaⅡⅡArundinagraminifolia(D.ⅡⅡBulbophyllumafineⅡⅡBulbophyllumambrosia(Hance)ⅡⅡBulbophyllumkwangtungenseⅡⅡBulbophyllumⅡⅡCalantheformosanaⅡⅡCalanthetriplicataⅡⅡCleisostomapaniculatumⅡⅡCleisostomaⅡⅡCleisostomasimondiivar.guangdongenseⅡⅡCoelogynefimbriataⅡⅡCymbidiumgoeringiiⅠⅡ蘭EriacorneriRchb.f.ⅡⅡEulophiagramineaⅡⅡGeodorumdensiflorumⅡⅡGodyerafoliosaⅡⅡ表A.1深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄（續(xù)）序號(hào)植物書蘭GodyeraproceraⅡⅡGodyeraseikoomontanaⅡⅡGodyeraviridifloraⅡⅡHabenariadentataⅡⅡHabenariarhodocheilaHance.ⅡⅡHabenarialinguellaⅡⅡLiparisbotanensisⅡⅡLiparisnervosaⅡⅡLiparisnigraⅡⅡLiparisstricklandianaRchb.ⅡⅡLudisiadiscolo