GB 9454-2017 飼料添加劑 DL-α-生育酚乙酸酯

代替GB/T9454—2008飼料添加劑DL-a-生育酚乙酸酯2017-10-14發(fā)布中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)的第1章、第3章和第5章為強(qiáng)制性的，其余為推薦性的。本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T9454—2008《飼料添加劑維生素E》。本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T9454—2008相比，主要技術(shù)內(nèi)容差異如下：——標(biāo)準(zhǔn)名稱由《飼料添加劑維生素E》更改為《飼料添加劑DL-a-生育酚乙酸酯》;——DL-a-生育酚乙酸酯含量由≥92.0%修改為≥93.0%;——酸度由原1g試樣消耗的0.1mol/L氫氧化鈉不得超過2.0mL修改為1g試樣消耗的0.1mol/L氫氧化鈉不得超過1.0mL;——增加了衛(wèi)生指標(biāo)砷要求及相應(yīng)的測(cè)定方法；——增加了比旋度和色譜峰鑒別；——原標(biāo)準(zhǔn)第一法(仲裁法)僅保留毛細(xì)管柱氣相色譜法，刪除了填充柱氣相色譜法，并將內(nèi)標(biāo)物更改為十六酸十六酯；——毛細(xì)管柱氣相色譜法色譜條件中增加了分流比20:1,流速改為2mL/min,柱溫改為270℃~——出廠檢驗(yàn)由“本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定所有指標(biāo)為出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目”更改為“第3章所列項(xiàng)目中，外觀與性狀、本標(biāo)準(zhǔn)由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省獸藥飼料監(jiān)察所、中國飼料工業(yè)協(xié)會(huì)、上海市獸藥飼料檢測(cè)所、浙江新和成股份有限公司、浙江醫(yī)藥股份有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：——GB/T9454—1998、GB/T9454—2000、GB/T9454-2008。1飼料添加劑DL-a-生育酚乙酸酯本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料添加劑DL-a-生育酚乙酸酯的要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則以及標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以異植物醇為主原料，經(jīng)化學(xué)合成制得的飼料添加劑DL-α-生育酚乙酸酯?；瘜W(xué)名：DL-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基)-6-苯并二氫吡喃醇乙酸酯相對(duì)分子質(zhì)量：472.74(按2007年國際相對(duì)原子質(zhì)量)結(jié)構(gòu)式：2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有修改單)適用于本文件。GB/T601化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備GB/T603化學(xué)試劑試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB10648飼料標(biāo)簽GB/T14699.1飼料采樣3.1外觀和性狀本品為微綠黃色或黃色的黏稠液體，幾乎無臭，遇光色漸變深；本品在無水乙醇、丙酮、乙醚或石油醚中易溶，在水中不溶。3.2技術(shù)指標(biāo)技術(shù)指標(biāo)應(yīng)符合表1的要求。2DL-a-生育酚乙酸酯含量/%比旋度折光率(np)吸收系數(shù)(284nm)(E|cm)酸度(消耗0.1mol/L氫氧化鈉滴定液的體積)/mL生育酚(消耗0.01mol/L硫酸鈰滴定液的體積)/mL重金屬(以Pb計(jì))/(mg/kg)總砷(As)/(mg/kg)4試驗(yàn)方法除特殊說明外，所用試劑均為分析純；色譜和光譜分析中所用水應(yīng)符合GB/T6682中一級(jí)水的規(guī)定，其他試驗(yàn)用水符合GB/T6682中三級(jí)水的規(guī)定；試劑和溶液的制備應(yīng)符合GB/T601和GB/T6034.2.1.8氫氧化鉀的乙醇溶液：取氫氧化鉀3.5g,置錐形瓶中，加乙醇適量使溶解并稀釋成100mL,用橡皮塞密塞，靜置24h后，迅速傾取上清液，置于具橡皮塞的4.2.2.2旋光儀。3GB9454—2017水浴中加熱約15min,溶液顯橙紅色。4.2.3.2稱取試樣約10mg,加氫氧化鉀的乙醇溶液(4.2.1.8)2mL,煮沸5min,放冷，加水4mL與乙醚(4.2.1.4)10mL,振搖，靜置使分層；取乙醚層2mL,加2,2'-聯(lián)吡啶的乙醇溶液(4.2.1.6)數(shù)滴與三氯化鐵的乙醇溶液(4.2.1.7)數(shù)滴，4.2.3.3紅外鑒別：試樣用溴化鉀(4.2.1.5)壓片，在紅外分光光度計(jì)上測(cè)量。試樣的紅外吸收?qǐng)D譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品的圖譜一致(標(biāo)準(zhǔn)品圖譜可參見附錄A)。4.2.3.4比旋度準(zhǔn)確稱取2.50g試樣，用無水乙醇(4.2.1.1)溶解并在20℃±0.5℃下恒溫定容至25mL,搖勻。在室溫20℃±0.5℃下，將測(cè)定管用無水乙醇(4.2.1.1)沖洗數(shù)次后再緩緩注入無水乙醇(4.2.1.1)適量(注意不要產(chǎn)生氣泡),置于旋光儀內(nèi)校正零點(diǎn)，同法將試樣溶液(4.2.3.4.1)置于旋光儀內(nèi)讀取旋光DL-a-生育酚乙酸酯在20℃、鈉光譜的D線(589.3nm)的比旋度[a],按式(1)計(jì)算：……(1)l——測(cè)定管的長度，單位為分米(dm);c——每100mL試樣溶液中含有被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量，單位為克(g)。4.2.3.5在含量測(cè)定項(xiàng)(4.3)下記錄的色譜圖，供試品溶液的DL-a-生育酚乙酸酯色譜主峰保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液的一致。4.3DL-α-生育酚乙酸酯含量4.3.1試劑和溶液4.3.1.2正己烷(色譜純)。4.3.1.3十六酸十六酯(色譜純)。4.3.1.5內(nèi)標(biāo)溶液：稱取十六酸十六酯(4.3.1.3)適量，加正己烷(4.3.1.2)溶解并稀釋成每毫升中含有4.3.1.6標(biāo)準(zhǔn)溶液I(氣相法):稱取DL-a-生育酚乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品(4.3.1.4)適量(精確至0.01mg),置棕色具塞瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液(4.3.1.5)使溶解并稀釋成含DL-a-生育酚乙酸酯約2mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。4.3.1.7標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅱ(液相法):稱取DL-a-生育酚乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品(4.3.1.4)約20mg(精確至0.01mg),置50mL棕色容量瓶中，加甲醇(4.3.1.1)適量溶解，并定容至刻度.搖勻。4.3.2儀器和設(shè)備4.3.2.2氣相色譜儀：配氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)。4.3.2.3高效液相色譜儀：配置紫外檢測(cè)器(UV)和柱溫箱。4.3.2.4超聲波清洗器。4GB9454—20174.3.3第一法氣相色譜法(仲裁法)4.3.3.1試樣溶液制備稱取試樣適量(精確至0.01mg),置棕色具塞瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液(4.3.1.5)使溶解并稀釋成含DL-a-生育酚乙酸酯約2mg/mL的溶液。4.3.3.2參考色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)4.3.3.2.1參考色譜條件參考色譜條件如下：——色譜柱：用100%二甲基聚硅氧烷為固定相的毛細(xì)管柱，30m(長度)×0.25mm(內(nèi)徑)×0.25μm～0.35μm(膜厚),或相當(dāng)者；——柱箱溫度：270℃~280℃;——進(jìn)樣口溫度：290℃~300℃;——檢測(cè)器溫度：290℃~300℃;——載氣：氮?dú)猓兌取?9.999%,流速2mL/min;——分流比：20:1;4.3.3.2.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取標(biāo)準(zhǔn)溶液I(4.3.1.6),按色譜條件(4.3.3.2.1)注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。理論塔板數(shù)按DL-α-生育酚乙酸酯計(jì)算應(yīng)不低于5000,DL-生育酚乙酸酯峰與內(nèi)標(biāo)物峰的分離度應(yīng)大于3(DL-a-生育酚乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的毛細(xì)管氣相色譜圖參見附錄B中的圖B.1)。4.3.3.3測(cè)定步驟取標(biāo)準(zhǔn)溶液I(4.3.1.6)及試樣溶液(4.3.3.1),分別連續(xù)注樣3次～5次，按峰面積計(jì)算校正因子，并用其平均值計(jì)算試樣中DL-a-生育酚乙酸酯的含量。4.3.3.4結(jié)果計(jì)算與表示DL-a-生育酚乙酸酯含量X?,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)表示，按式(2)、式(3)計(jì)算：式中：f——DL-a-生育酚乙酸酯的質(zhì)量校正因子；P?——DL-a-生育酚乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品純度，%;A?——標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；A?——標(biāo)準(zhǔn)溶液中DL-a-生育酚乙酸酯的峰面積；A?——試樣溶液中DL-a-生育酚乙酸酯的峰面積；A?——試樣溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；m?——DL-a-生育酚乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，單位為克(g);m?——標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量，單位為克(g);……………(2)5GB9454—2017m?——試樣溶液中內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量，單位為克(g);m?——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。以兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，結(jié)果保留3位有效數(shù)字，兩次平行測(cè)定的絕對(duì)差值應(yīng)不大于其算術(shù)平均值的3%。4.3.4第二法高效液相色譜法4.3.4.1試樣溶液制備稱取試樣約20mg(精確至0.01mg),置50mL棕色容量瓶中，加甲醇(4.3.1.1)約40mL,置超聲波清洗器中超聲溶解10min,冷卻至室溫，用甲醇(4.3.1.1)定容至刻度，充分搖勻后過0.45μm濾膜，濾液作為試樣溶液。4.3.4.2參考色譜條件與系統(tǒng)適用性4.3.4.2.1參考色譜條件參考色譜條件如下：——色譜柱：Cis柱，柱長150mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑4μm～5μm或性能相當(dāng)者；——流動(dòng)相：甲醇(4.3.1.1)+水=98+2;——檢測(cè)波長：285nm;4.3.4.2.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅱ(4.3.1.7),按色譜條件(4.3.4.2.1)分別連續(xù)注樣3次～5次。理論塔板數(shù)按DL-α-生育酚乙酸酯峰計(jì)算應(yīng)不低于1200,DL-a-生育酚乙酸酯峰和DL-a-生育酚峰的分離度應(yīng)大于1.5(DL-a-生育酚乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖參見附錄C中的圖C.1)。4.3.4.3測(cè)定步驟取標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅱ(4.3.1.7)及試樣溶液(4.3.4.1)分別注入液相色譜儀，得到色譜峰面積(A、A;),用外標(biāo)法計(jì)算。4.3.4.4結(jié)果計(jì)算與表示DL-a-生育酚乙酸酯含量X?,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)表示，按式(4)計(jì)算：式中：mg——DL-a-生育酚乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量，單位為克(g);m;——試樣的質(zhì)量，單位為克(g);Ps——DL-a-生育酚乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品純度，%;A;——試樣溶液中DL-a-生育酚乙酸酯的峰面積；A、——標(biāo)準(zhǔn)溶液中DL-α-生育酚乙酸酯的峰面積。以兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，結(jié)果保留3位有效數(shù)字，兩次平行測(cè)定的絕對(duì)差值應(yīng)不大于其算術(shù)平均值的3%。6GB9454—20174.4折光率4.4.1儀器和設(shè)備阿貝折光儀或與其相當(dāng)?shù)膬x器，讀數(shù)精度至0.0001。4.4.2測(cè)定步驟測(cè)定前，將試樣置20℃±0.5℃恒溫室中至少1h,或20℃±0.5℃恒溫水浴至少0.5h,按儀器說明書的要求進(jìn)行操作，重復(fù)讀數(shù)3次，取3次讀數(shù)的平均值，為試樣的折光率。4.5吸收系數(shù)4.5.1試劑和溶液無水乙醇。4.5.2儀器和設(shè)備4.5.2.1分析天平，感量0.1mg。4.5.2.2紫外分光光度計(jì)。4.5.3測(cè)定步驟稱取試樣約0.15g(精確至0.1mg),置100mL棕色容量瓶中，加無水乙醇(4.5.1)溶解并稀釋至刻度，搖勻。吸取10.00mL,置100mL棕色容量瓶中，加無水乙醇(4.5.1)稀釋至刻度，搖勻。以無水乙醇(4.5.1)作空白對(duì)照，在284nm的波長處測(cè)定吸光度。4.5.4結(jié)果計(jì)算與表示試樣的吸收系數(shù)以Elm表示，按式(5)計(jì)算：式中：A——試樣溶液的吸光度；C——每100mL溶液中含有試樣的質(zhì)量，單位為克(g);L——光路的長度，單位為厘米(cm)。4.6.1試劑和溶液4.6.1.3氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：c(NaOH)=0.1mol/L,按GB/T601規(guī)定制備和標(biāo)定。4.6.1.4酚酞指示液：取酚酞1g,加乙醇100mL使溶解，即得。4.6.2測(cè)定步驟量取乙醇(4.6.1.1)與乙醚(4.6.1.2)各15mL,置錐形瓶中，加酚酞指示液(4.6.1.4)0.5mL,滴加氫7氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(4.6.1.3)至微顯粉紅色，加試樣1.0g,溶解后，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(4.6.1.3)滴定至微顯粉紅色，記錄加試樣后消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，應(yīng)不得過1.0mL。4.7生育酚4.7.1.2二苯胺溶液：取二苯胺1g,加硫酸100mL使溶解，即得。4.7.1.3硫酸鈰標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：c[Ce(SO?),·4H?O]=0.01mol/L,按GB/T601規(guī)定制備和標(biāo)定。稱取試樣0.1g(精確至0.01g),加無水乙醇(4.7.1.1)5mL溶解后，加二苯胺溶液(4.7.1.2)1滴，用硫酸鈰標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(4.7.1.3)滴定至顯紫色，消耗的硫酸鈰標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積應(yīng)不得過1.0mL。4.8.1.4鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：1000μg/m4.8.1.6氨水溶液(10%):按GB/T603制備。4.8.1.7鹽酸溶液I:取鹽酸63mL,加水適量使成100mL,搖勻。4.8.1.8鹽酸溶液Ⅱ:取鹽酸18mL,加水適量使成100mL,搖勻。4.8.1.9硫代乙酰胺溶液：取硫代乙酰胺4g,加水使溶解成100mL,置冰箱中冷藏保存。臨用前取1.0mL及混合液[由氫氧化鈉溶液(4.8.1.5)15mL、水5.0mL及甘油20mL組成]5.0mL,置水浴上加4.8.1.10乙酸鹽緩沖液(pH3.5):取乙酸銨25g,加水25mL溶解，加鹽酸溶液I(4.8.1.7)38mL,用鹽酸溶液Ⅱ(4.8.1.8)或氨水溶液(4.8.1.6)準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH至3.5(電位計(jì)指示),用水稀釋至100mL,搖勻。4.8.1.12鉛標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：吸取鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.8.1.4)2.00mL,置200mL量瓶中，用水稀釋至刻度，4.8.2測(cè)定與結(jié)果判定稱取試樣2g(精確至0.01g),置瓷坩堝中，緩緩熾灼至完全炭化，放冷。加硫酸(4.8.1.1)0.5mL~1mL使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，在550℃熾灼使完全灰化，放冷。加硝酸(4.8.1.2)0.5mL,蒸干至氧化氮蒸氣除盡后，放冷。加鹽酸(4.8.1.3)2.0mL,置水浴上蒸干后加水15mL,滴加氨水溶液8(4.8.1.6)至對(duì)酚酞指示液(4.8.1.11)顯微紅色，再加乙酸鹽緩沖液(4.8.1.10)2.0mL,微熱溶解后，移置納氏比色管，加水稀釋成25mL,作為乙管。另取制備試樣溶液的試劑，置瓷坩堝中蒸干后，加乙酸鹽緩沖液(4.8.1.10)2.0mL與水15mL,微熱溶解后，移置納氏比色管中，加鉛標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.8.1.12)2.00mL,再用水稀釋成25mL,作為甲管。在甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺溶液(4.8.1.9)各2.0mL,搖勻，放置2min,同置白紙上，自上向下透視，觀察比較甲管與乙管的顏色，如乙管所顯顏色未深于甲管，則判定為符合規(guī)定。4.9.1試劑與溶液4.9.1.2氧化鎂。4.9.1.3無砷鋅粒：以能通過1號(hào)篩的無砷鋅為宜，如使用鋅粒較大時(shí)，用量應(yīng)酌情增加，反應(yīng)時(shí)間延長4.9.1.6鹽酸溶液：取鹽酸18mL,加水適量使成100mL,搖勻。4.9.1.8酸性氯化亞錫溶液：取氯化亞錫20g,加鹽酸(4.9.1.1)使溶解成50mL,濾過，搖勻。本液使用期限為3個(gè)月。4.9.1.9乙酸鉛溶液：取乙酸鉛10g,加新沸過的冷水溶解，滴加醋酸使溶液澄清，加新沸過的冷水至4.9.1.11砷標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：吸取砷標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.9.1.4)5.00mL,置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，再吸取2.00mL,置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻(每毫升相當(dāng)于1μg的As)。4.9.1.13乙酸鉛棉花：取脫脂棉，浸入乙酸鉛溶液(4.9.1.9)與水的等體積混合液中，濕透后，瀝去多余的溶液，并使之疏松，在100℃以下干燥后，貯于磨口塞玻璃瓶中備用。4.9.2測(cè)定與結(jié)果判定取試樣1.0g(精確至0.01g)于瓷坩堝中，加硝酸鎂溶液(4.9.1.5)10mL和氧化鎂(4.9.1.2)1g,混勻，浸泡4h,于低溫或水浴上蒸干，用小火緩緩熾灼至完全炭化，放冷。在550℃熾灼使完全灰化，加2mL水濕潤灰分，加酚酞指示液(4.9.1.10)1滴，如顯紅色，滴加鹽酸溶液(4.9.1.6)至紅色褪去，移入錐5mL和酸性氯化亞錫溶液(4.9.1.8)5滴，在室溫放置10min后，加無砷鋅粒(4.9.1.3)2g,立即將頂端平面放有溴化汞試紙(4.9.1.12)和裝有乙酸鉛棉花(4.9.1.13)的導(dǎo)氣管密塞于錐形瓶上，并將錐形瓶置于25℃~40℃水浴中，反應(yīng)45min,取出溴化汞試紙，即得。9另取制備試樣砷斑的試劑，置瓷坩堝中與試樣同法處理后，移入錐形瓶中，加鹽酸(4.9.1.1)5mL與水21mL,再加入砷標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.9.1.11)3.00mL,照“試樣砷斑的制備”(4.9.2.1)項(xiàng)下自“碘化鉀溶液”起同法操作。取出溴化汞試紙，肉眼比較砷斑顏色，如試樣砷斑顏色未深于標(biāo)準(zhǔn)砷斑顏色，則判定為符合規(guī)定。5檢驗(yàn)規(guī)則5.1采樣方法按GB/T14699.1執(zhí)行。以相同原料、相同生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的均勻一致的產(chǎn)品為一個(gè)生產(chǎn)批次。5.3出廠檢驗(yàn)第3章所列項(xiàng)目中，外觀