SC-T 3057-2022 水產(chǎn)品及其制品中磷脂含量的測(cè)定 液相色譜法

ＩＣＳ

CCS

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20備案號(hào)：XXXX-XXXX中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SC／Ｔ

3057—2022

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中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 發(fā)布SC/T

３０５７—２０２２前言本文件按照

GB/T１１—２０２０?標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第１部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則?的規(guī)定起草.請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利.本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任.本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)漁政管理局提出.S本文件由全國(guó)水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)水產(chǎn)品加工分技術(shù)委員會(huì)(AC/TC１５６/SC３)歸口.S本文件起草單位:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所、國(guó)家水產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心、中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所.本文件主要起草人:王聯(lián)珠、彭吉星、孫言春、譚志軍、郭瑩瑩、趙新楠、朱文嘉、文藝曉、吳海燕、郭萌萌、鄭關(guān)超.ⅠSC/T

３０５７—２０２２水產(chǎn)品及其制品中磷脂含量的測(cè)定液相色譜法范圍本文件描述了用液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品及其制品中磷脂含量的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、試樣制備與保存、測(cè)定步驟、結(jié)果計(jì)算、方法靈敏度和精密度.本文件適用于魚、貝、蝦等水產(chǎn)品及其制品中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰膽堿、鞘磷脂、溶血磷脂酰膽堿５種磷脂含量的測(cè)定.規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款.其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件.分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T１５６８７動(dòng)植物油脂試樣的制備GB/T３０８９１—２０１４水產(chǎn)品抽樣規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義.原理試樣中磷脂經(jīng)氯仿Ｇ甲醇溶液提取,固相萃取柱凈化,液相色譜Ｇ蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量.試劑和材料警示Ｇ應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格遵循有毒物質(zhì)的使用規(guī)程.采取有效措施保證組織和個(gè)人安全.除另有說明,所有試劑均為色譜純,試驗(yàn)用水應(yīng)符合

一級(jí)水的規(guī)定.５１試劑５１１正己烷(C

H１４).５１２異丙醇(C

HO).５１３氯仿(CHCl).５１４甲醇(CHOH).５１５乙酸(CHCOOH).５１６乙醚(C

H１０O).５１７三乙胺(C

H１５N).５１８鹽酸(HCl):優(yōu)級(jí)純.５１９氯化鈉(NaCl):優(yōu)級(jí)純. １２９２５１１０無(wú)水硫酸鈉(NaSO):優(yōu)級(jí)純,２０℃烘干４h,干燥器內(nèi)冷卻至室溫, １２９２５１１１正己烷Ｇ異丙醇溶液(＋３):量?。矗癿L正己烷和６０mL異丙醇,混勻.５１１２氯仿Ｇ甲醇溶液(＋１):量?。筸L氯仿和１mL甲醇,混勻.５１１３氯仿Ｇ甲醇溶液(＋１):量?。玻埃癿L氯仿和１００mL甲醇,混勻.５１１４０９％氯化鈉溶液:稱?。筭氯化鈉,加１０００mL水溶解.１SC/T

３０５７—２０２２２１５１１５氯仿Ｇ異丙醇溶液(＋１):量取２００mL氯仿和１００mL異丙醇,混勻.２１５１１６乙酸Ｇ乙醚溶液(＋７２):量?。磎L乙酸和２８８mL乙醚,混勻.５１１７鹽酸溶液:量取５４mL鹽酸,加水定容至１００mL,混勻.２５１１８氯仿Ｇ甲醇Ｇ鹽酸溶液(?。玻埃癿L氯仿和１００mL甲醇,加入１mL２％鹽酸溶液,２混勻.５１１９００４％三乙胺正己烷溶液:準(zhǔn)確量取０４mL三乙胺,加正己烷定容至１０００mL,混勻.５１２０１３％乙酸溶液:準(zhǔn)確量?。保常癿L乙酸,加水定容至１０００mL,混勻.５２標(biāo)準(zhǔn)品５宜選擇動(dòng)物性來源標(biāo)準(zhǔn)品,

種磷脂標(biāo)準(zhǔn)品詳細(xì)信息見附錄

A.５５３標(biāo)準(zhǔn)溶液配制５３１單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液５ ５５分別準(zhǔn)確稱取各磷脂標(biāo)準(zhǔn)品適量(精確至０１mg),其中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿５ ５５脂酰膽堿用正己烷Ｇ異丙醇溶液(１１１)溶解,磷脂酰肌醇先用０５mL氯仿Ｇ甲醇溶液(１１２)溶解后再加入正己烷Ｇ異丙醇溶液(１１１)稀釋并定容,配制成質(zhì)量濃度分別為磷脂酰乙醇胺１０００mg/L、磷脂酰肌醇１０００mg/L、磷脂酰膽堿鞘磷脂和溶血磷脂酰膽堿的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,于－１８℃下避光密封保存,有效期為１個(gè)月.５３２混合標(biāo)準(zhǔn)中間液５分別準(zhǔn)確移?。保竚L各磷脂單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于同一１０mL棕色容量瓶中,用正己烷－異丙醇溶液５(１１１)稀釋并定容,配制成質(zhì)量濃度分別為磷脂酰乙醇胺１８０mg/L、磷脂酰肌醇１８０mg/L、磷脂酰膽堿５４０mg/L、鞘磷脂１８０mg/L和溶血磷脂酰膽堿３６０mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液,現(xiàn)用現(xiàn)配.５３３系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液５１ ３ ４ ９ １３ ９ １ ２ ５ ２ ６９ １ ３分別準(zhǔn)確移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間液于１０mL棕色容量瓶中,用５１ ３ ４ ９ １３ ９ １ ２ ５ ２ ６９ １ ３制成質(zhì)量濃度分別為磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和鞘磷脂:０mg/L、０mg/L、５mg/L、０mg/L、８０mg/L,磷脂酰膽堿:０mg/L、０mg/L、３５mg/L、７０mg/L、４０mg/L;溶血磷脂酰膽堿:０mg/L、０mg/L、０mg/L、８０mg/L、６０mg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配.５４材料１氨基固相萃取柱:０００mL,或性能相當(dāng)者.１儀器和設(shè)備６１液相色譜儀:配蒸發(fā)光散射檢測(cè)器.０６２天平:感量為０１mg,００１g和０６３渦旋振蕩器.６４離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥４０００r/min.６５氮吹儀.６６超聲波清洗儀.６７固相萃取裝置.試樣制備與保存７１試樣制備濕基試樣制備按照

GB/T３０８９１—２０１４中附錄B的規(guī)定執(zhí)行;干制品試樣至少２００g,粉碎后全部過０４２mm

孔徑分析篩,充分混勻后裝入潔凈容器中密封備用;油脂試樣參照

GB/T１５６８７的規(guī)定執(zhí)行,分取裝入潔凈容器中密封備用.７２試樣保存２,min,％ABC００４０５７８０４０５０１０１５０４０５０１０１５１４０５７２００４０５７SC/T

３０５７—２０２２－１８℃以下避光保存.測(cè)定步驟８１提取和凈化８１１固體試樣８１１１提?。担矗担?５３ ５濕基試樣稱?。眊~２g(精確至干制品試樣稱?。埃眊~０２g(５４５５ ５３ ５離心管中,加入１５mL氯仿Ｇ甲醇溶液(１１３),渦旋混合后超聲提?。常癿in,離心５min,收集上清液,殘?jiān)偌尤耄保祄L氯仿Ｇ甲醇溶液(１１３)重復(fù)上述操作兩次,合并上清液至分液漏斗中,加入１０mL氯化鈉溶液(１１４),振蕩搖勻后靜置分層,收集下層提取液,加入適量無(wú)水硫酸鈉(１１０)脫水過濾,０℃氮吹至近干,加入２mL氯仿(１３)溶解,待凈化.８１１２凈化５５ ５５ ５氨基固相萃取柱先用５mL氯仿活化,將待凈化液移入氨基固相萃取柱(４),依次用１０mL５５ ５５ ５丙醇溶液(１１５)和１０mL乙酸－乙醚溶液(１１６)淋洗小柱,再依次用１０mL甲醇和１０mL氯仿Ｇ甲醇Ｇ鹽酸溶液(１１８)洗脫,收集全部洗脫液,于３０℃下氮吹至近干,加入正己烷－異丙醇溶液(１１１)溶解并定容至１０mL,過０４５μm

尼龍濾膜后待測(cè).８１２油脂試樣５稱取０２g~０５g油脂試樣(精確至加入氯仿(１３)溶解并定容至１０mL,準(zhǔn)確移?。保祄L按照８１１２進(jìn)行凈化操作.８２測(cè)定８２１色譜參考條件１３a)色譜柱:硅膠整體柱

(００mm×４６mm),或性能相當(dāng)者;１３b)柱溫:０℃;２c)進(jìn)樣量:０μL;２１５d)流速:５mL/min;１５e)載氣壓力:０PSI;６f)漂移管溫度:５℃,噴霧器:加熱模式７５％;６５ ５g)流動(dòng)相:A

相００４％三乙胺正己烷溶液(１１９),B

相異丙醇(１４),C

相１３％乙酸溶５ ５５(１２０);梯度洗脫程序見表１.５表１流動(dòng)相梯度洗脫程序８２２標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制５１將系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液表１流動(dòng)相梯度洗脫程序８２２標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制５１為橫坐標(biāo)、以相應(yīng)色譜峰峰面積的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.５種磷脂混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的液相色譜圖見附錄B.標(biāo)準(zhǔn)曲線方程依蒸發(fā)光散射檢測(cè)原理,按公式()計(jì)算.ya１lg

＝blgx＋lg

ya１式中:y

———峰面積;３磷脂類化合物,mg/g,mg/g磷脂酰乙醇胺０１００２０磷脂酰肌醇０１００２０磷脂酰膽堿０３００６０鞘磷脂０１００２０溶血磷脂酰膽堿０２００４０磷脂類化合物,mg/g,mg/g磷脂酰乙醇胺２００４００磷脂酰肌醇２００４００磷脂酰膽堿６００１２００鞘磷脂２００４００溶血磷脂酰膽堿４００８００Xi ＝c ×Xi ＝c ×V

＋F

()bx ———磷脂標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度,單位為毫克每升(mg/L);ba、

———與蒸發(fā)溫度、流動(dòng)相性質(zhì)等條件有關(guān)的常數(shù).８２３試樣溶液測(cè)定取試樣溶液注入液相色譜儀中,按８２１的色譜條件進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰面積,外標(biāo)法定量.試樣溶液中各磷脂色譜峰保留時(shí)間與相應(yīng)磷脂標(biāo)準(zhǔn)色譜峰保留時(shí)間的相對(duì)偏差不應(yīng)大于５０％.試樣溶液中各磷脂的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),超出范圍的試樣溶液可適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定.８３空白試驗(yàn)除不稱取試樣外,采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行測(cè)定.結(jié)果計(jì)算２試樣中各磷脂的含量按公式()計(jì)算.２m

×１０００式中:Xi

———試樣中各磷脂的含量,單位為毫克每克(mg/g);Ci ———從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中各磷脂的質(zhì)量濃度,單位為毫克每升(mg/L);V ———試樣溶液的最終定容體積,單位為毫升(mL);F ———稀釋倍數(shù);gm ———試樣的質(zhì)量,單位為克();g１０００———換算系數(shù).計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下２次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后２位.１０方法靈敏度和精密度１０１方法檢出限和定量限固體試樣的方法檢出限和定量限見表２,油脂試樣的方法檢出限和定量限見表３.表２固體試樣方法檢出限和定量限表３表２固體試樣方法檢出限和定量限表３油脂試樣方法檢出限和定量限１０２精密度４序號(hào)中文名稱英文名稱英文縮寫CAS,％生物來源磷脂酰乙醇胺PhosphatidylethanolaminePE３９３８２Ｇ０８Ｇ６≥９７雞蛋黃磷脂酰肌醇PhosphatidylinositolPI３８３９０７Ｇ３３Ｇ３≥９９牛肝臟磷脂酰膽堿PhosphatidylcholinesPC８００２Ｇ４３Ｇ５≥９９雞蛋黃鞘磷脂linSM８５１８７Ｇ１０Ｇ６≥９８雞蛋黃溶血磷脂酰膽堿LysophosphatidylcholineLPC９００８Ｇ３