動(dòng)物遺傳育種學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)1

動(dòng)物遺傳育種學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

向釗王維林王玲周沛周萍

西南大學(xué)榮昌校區(qū)

二OO八年二月

目錄

實(shí)驗(yàn)一小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本制作2

實(shí)驗(yàn)二人體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及染色體標(biāo)本制備5

實(shí)驗(yàn)三染色體顯帶技術(shù)9

實(shí)驗(yàn)四染色體組型分析15

實(shí)驗(yàn)五植物多倍體誘發(fā)20

實(shí)驗(yàn)六果蠅的單因子雜交實(shí)驗(yàn)22

實(shí)驗(yàn)七人群?jiǎn)位蜻z傳基因頻率分析28

實(shí)驗(yàn)八群體蛋白多態(tài)聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測(cè)33

實(shí)驗(yàn)九動(dòng)物血液DNA提取39

實(shí)驗(yàn)十RAPD——?jiǎng)游顳NA多態(tài)檢測(cè)42

實(shí)驗(yàn)十一遺傳力計(jì)算44

實(shí)驗(yàn)十二遺傳相關(guān)計(jì)算47

實(shí)習(xí)十三體尺測(cè)量與外貌鑒定49

實(shí)習(xí)十四生長發(fā)育的計(jì)算與生長曲線的繪制52

實(shí)習(xí)十五體重估測(cè)與體尺指數(shù)的計(jì)算56

實(shí)習(xí)十六家畜的攝影59

實(shí)習(xí)十七系譜的編制63

實(shí)習(xí)十八系譜審查后裔測(cè)驗(yàn)69

實(shí)習(xí)十九個(gè)體育種值的估計(jì)73

實(shí)習(xí)二十選種指數(shù)的制訂與計(jì)算機(jī)應(yīng)用76

實(shí)習(xí)二十一近交系數(shù)與親緣系數(shù)的計(jì)算85

實(shí)習(xí)二十二群體有效含量的計(jì)算88

附錄一器皿清洗與滅菌消毒91

附錄二培養(yǎng)液和常用試劑的配制94

實(shí)驗(yàn)一小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本制作

一、目的和要求

通過這一實(shí)驗(yàn)，要求學(xué)生了解哺乳動(dòng)物染色體標(biāo)本的制作方法，并對(duì)動(dòng)物

染色體進(jìn)行觀察。

二、實(shí)驗(yàn)原理

由于中的造血干細(xì)胞是生成各種血細(xì)胞和原始細(xì)胞，具有高度的分裂能力，

本實(shí)驗(yàn)采用這一材.料，通過前處理，低滲，固定，制片，染色等步驟制得染色體

標(biāo)本，可觀察到許多處于分裂中期的染色體，可以進(jìn)行染色體組型分析。

三、材料、試劑與儀器設(shè)備

1、材料：小白鼠。

2、設(shè)備：注射器、5#針頭、10ml刻度離心管、1ml吸管、試管架、載玻片、天

平，離心機(jī)，顯微鏡、解剖器具。

3、藥品(配方見附錄)：

秋水仙素(100ug/ml)；

姬姆薩染液；

固定液；

低滲液；

生理鹽水；

2%的檸檬酸鈉溶液；

0.075mol/Lkclo

四、實(shí)驗(yàn)步驟

總體步驟：秋水仙素處理——取骨髓——低滲處理——固定——離心——

再固定——再離心——滴片——染色——鏡檢——封片。

2

1、注射秋水仙素

取65-90日齡健康小鼠，實(shí)驗(yàn)前3-4h左右，腹腔注射秋水仙素(100ug/ml)

0.3-0.4mlo

注射部位很重要，對(duì)于一般嚙齒類注射部位為左或右下腹。將針頭2/3刺入

腹腔后，要輕輕上挑，再行注射。注意一定要注射到腹腔內(nèi)。秋水仙素的主要作

用是：抑制細(xì)胞分裂。

2、取骨髓：

斷頸處死動(dòng)物，迅速取出后肢長骨，清除股骨上的殘余肌肉，并用2%的檸

檬酸鈉溶液沖洗干凈，剪掉股骨兩端關(guān)節(jié)膨大的關(guān)節(jié)頭，暴露骨髓腔，用注射器

連接5號(hào)針頭吸取適量2%的檸檬酸鈉溶液對(duì)準(zhǔn)截?cái)嗟拈L骨髓腔，輕推注射器，

沖洗髓腔中的骨髓細(xì)胞至平皿內(nèi)，連續(xù)沖洗數(shù)次，直至髓腔干凈為止，小心地用

滴管將骨髓細(xì)胞懸液移至10ml刻度離心管中。

3、低滲處理

將離心管放在離心機(jī)上，1000r/min速度離心lOmin,棄去清液，加上低滲

液7-8ml低滲液(Q075mol/Lkcl),處理25分鐘。

4、固定

低滲后以1000r/min速度離心10min。棄去上清液，加入7ml固定液(甲醇:

冰HAC=3:1)，用滴管輕輕打散細(xì)胞團(tuán)塊，繼續(xù)固定30min,再以1000r/min速

度離心lOmin,棄去上清液，加入3-5ml固定液第二次固定30分鐘，1000r/min

速度離心lOmin,棄去上清液，加入甲醇：冰HAC=1：1固定液固定20分鐘。

然后1000r/min速度離心5T0min,除去上清液，留0.1-0.2ml細(xì)胞團(tuán)和上清液,

再加入少許新鮮1：1固定液(約5倍體積)，搖勻成細(xì)胞懸液。

5、滴片

在制作標(biāo)本片前1-2小時(shí)，區(qū)潔凈的載玻片保存于0-4度的冰水中.制作標(biāo)

本片時(shí)將沉淀物吹打均勻后，吸于滴管內(nèi)，滴在冰冷潔凈載玻片，每片2?3滴,

酒精燈上烘烤一下，放在片盤上，空氣干燥法制片，干燥后，加注標(biāo)簽.

6.染色和觀察

將標(biāo)本片反扣在染色缸上，將1:10的Giemsa染液染色緩緩加入染色缸標(biāo)

本片下，不能形成氣泡?？廴?0分鐘后，自來水沖洗。待制片干燥后置顯微

3

鏡下觀察。

在顯微鏡下觀察小白鼠染色體的形態(tài)、數(shù)目及結(jié)構(gòu)特征。在正常的2n情況

下，雄性小白鼠有3個(gè)最短的染色體（19號(hào)染色體一對(duì)和y染色體），雌性有2

個(gè)最短的染色體（19號(hào)染色體一對(duì)）。

五、作業(yè)

選擇染色體清晰，分散度好的細(xì)胞顯微攝影，待做核型分析。

繪出所觀察到的有絲分裂圖像。

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實(shí)驗(yàn)二人體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及染色體標(biāo)本制備

一、目的與要求

1、初步掌握人體外周血淋巴細(xì)胞短期培養(yǎng)的基本方法。

2、初步掌握人體外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本制備的技術(shù)方法

二、實(shí)驗(yàn)原理

人體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（人體末稍血、微量全血短期培養(yǎng)）及其染色體標(biāo)

本制備是國內(nèi)外研究顯示染色體最常用和效果最好的方法。此方法取材方便，

用血量少，操作簡(jiǎn)便，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)的研究和染色體病

的診斷等。人體外周血中的小淋巴細(xì)胞，是已分化、處于Go期的細(xì)胞，幾乎不

具有分裂增殖能力，在離體血培養(yǎng)細(xì)胞中很難找到正在分裂的淋巴細(xì)胞。因此,

需采用刺激細(xì)胞增殖的措施。人們發(fā)現(xiàn)從蕓豆（菜豆）中提取的植物血球凝集素

（植物血凝素PHA）可以刺激小淋巴細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，即在PHA作用下，處在

GO期的小淋巴細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。、淋巴母細(xì)胞具有分裂能力，重新進(jìn)

入增殖周期進(jìn)行有絲分裂。在PHA作用下體外培養(yǎng)72小時(shí)左右，多數(shù)淋巴細(xì)胞

已處于細(xì)胞周期的第二周期。此時(shí)，細(xì)胞分裂相較多，但都處于分裂的不同時(shí)

期。一般制作染色體標(biāo)本，主要是顯示細(xì)胞分裂中期染色體。。因中期染色體

形態(tài)最為典型、最為清晰，最易辨認(rèn)，是研究染色體的最好階段。為了獲得大

量可供分析的中期染色體，需在終止細(xì)胞培養(yǎng)前數(shù)小時(shí)加入適當(dāng)濃度的有絲分

裂阻斷劑——秋水仙素（或其衍生物秋水仙胺）.它可特異地抑制紡錘絲的形成、

阻抑分裂中期活動(dòng)而使細(xì)胞分裂停滯于中期。借此可獲得大量中期分裂相細(xì)胞。

在進(jìn)行染色體標(biāo)本制備的過程中，首先要進(jìn)行低滲處理，使細(xì)胞體積脹大、

染色體松散開而便于觀察分析。最常用的低滲液為0.075mol/L的KC1,也可用

水或1%枸椽酸鈉等。低滲后的細(xì)胞需用固定液固定。醋酸固定液具有膨脹、固

定作用。它和醇類混合固定，有利于染色體松散，可獲得分散好、易于分析的

分裂中期染色體標(biāo)本?，F(xiàn)在常用的固定液為甲醇-冰醋酸（3：1）固定液。

三、材料、試劑與儀器設(shè)備

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1、實(shí)驗(yàn)材料

動(dòng)物靜脈血

2.試劑

同實(shí)驗(yàn)一。另備RPMIT640培養(yǎng)液,520U/ml肝素,40ug/ml秋水仙堿,

PHA,0.075mol/LKC1低滲液，甲醇，冰醋酸，Giemsa染液，二甲苯和香柏油。

3、器材?、儀器設(shè)備

超凈工作臺(tái)，光學(xué)顯微鏡（附照相設(shè)備），隔水式恒溫培養(yǎng)箱，離心機(jī)，冰箱,

高壓蒸汽消毒鍋，鼓風(fēng)干燥箱，無菌正壓濾器，分析天平（感量1/10毫克），架

盤天平，鏈霉素培養(yǎng)瓶及瓶塞，肝素小瓶及瓶塞（取血用），10ml吸管，直頭小

吸管，5ml刻度離心管，2ml或5ml一次性注射器，量筒，燒杯，搪瓷盆，搪瓷

盤，試管架，片盤，片盒，止血帶，棉簽，大吸球，小吸頭，pH試紙，廢液盤、

缸，解剖剪子，鏡子，記號(hào)筆，4℃預(yù)冷的載玻片，酒精燈，火柴，染色缸或染

色玻璃板，擦鏡紙等。

四、實(shí)驗(yàn)步驟及方法

1、取血

在取血前，按照附錄要求進(jìn)行各種用品的清洗、滅菌處理，配制、分裝并凍

存培養(yǎng)液（5ml/瓶）及肝素（0.1ml肝素/瓶，濃度為520U/ml）供取血用。穿刺靜

脈或其他部位，取血前用碘酒、酒精局部消毒，采用無菌手術(shù)取血，2ml注射器

抽取靜脈血IT.5ml,直接接種于肝素小瓶，輕輕搖勻，待接種培養(yǎng)。

不同動(dòng)物靜脈采血部位：

動(dòng)物類型部位動(dòng)物類型部位

兔型類耳部靜脈有蹄類頸靜脈

鱗甲類、刺猬舌下靜脈食肉類前、后爪靜脈

等

鼠類尾靜脈中、小型哺乳心臟

類、兩棲類

靈長類上、下肢靜脈鳥類翼靜脈

2、接種培養(yǎng)

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將事先配制凍存的裝有5ml培養(yǎng)液的鏈霉素培養(yǎng)瓶或其它培養(yǎng)瓶從冰箱中

取出，置室溫融化，碘酒、酒精消毒瓶塞，用2ml注射器將肝素小瓶中靜脈血取

出接種到培養(yǎng)瓶中，每瓶約0.2-0.4ml,輕輕搖勻，使血細(xì)胞充分懸于培養(yǎng)液中，

然后密封瓶塞，或瓶口塞無菌棉塞，置37℃?）2培養(yǎng)箱培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)液為

RPMIT640,總量5ml,其中小牛血清5ml,PHAO.05-0.1ml,肝素50單位和適量

青鏈霉素。PHA在動(dòng)物全血培養(yǎng)中是?個(gè)非常關(guān)鍵的萬分。實(shí)驗(yàn)表明，不同種動(dòng)

物血中淋巴細(xì)胞對(duì)PHA敏感性不同。

3、積累分裂中期細(xì)胞

在血培養(yǎng)70小時(shí)時(shí)（即收獲細(xì)胞前2小時(shí)），各培養(yǎng)瓶內(nèi)加人濃度為

4JDug/ml秋水仙素2滴,終濃度為0.1-0.15ug/ml,搖勻,置37c溫箱繼續(xù)培養(yǎng)

2小時(shí)后收集細(xì)胞、制片。

四、制片

1、收集細(xì)胞：

從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)瓶，用小吸管將培養(yǎng)物吹打均勻，移入5ml刻度離心管

內(nèi)，以2000r/min離心10分鐘，吸去上清液，保留底物。

2、低滲：

每管加入37℃預(yù)溫的0.075moi/LKCL溶液5ml,用吸管輕輕吹打均勻，

置37%溫箱低滲20—25分鐘，以達(dá)到紅細(xì)胞破壞、淋巴細(xì)胞膨脹和染色體分散

之目的。

3、預(yù)固定：

低滲處理后，每管加入2—3滴甲醇：冰醋酸（3：1）固定液，將細(xì)胞輕輕吹

打均勻，置離心機(jī)2000r/min離心10分鐘。

4、固定（一）：

去上清液，加固定液5ml,吹打均勻，2000r/min離心10分鐘。

5、固定（二）：

去上清液，再加入5ml固定液，吹打均勻，2000r/min離心10分鐘。

6、滴片：

去上清液，留底物，每管加入少許（0.2?0.ml）固定液（加入量視底物量而

定），將底物吹打均勻，制成細(xì)胞懸液，然后用吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，約以

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20era或更高的距離滴至預(yù)冷的載玻片上，每片約2?3滴，隨即將玻片在酒精

燈火焰上微烤（一過性微烤數(shù)次），以助細(xì)胞、染色體分散，使之均勻平鋪于玻片

上，將制片放入片盤，空氣干燥后，收集于片盒中。

7、染色和觀察：

待制片晾干后，放人約1:10Giemsa染液的染色缸中染色20分鐘左右.或

架在染色用玻璃板上扣染20分鐘左右（扣染是指染色時(shí)，將染色體制片的細(xì)胞面

朝下，架在玻璃板上，將染液滴人玻璃板和細(xì)胞面之間），自來水輕輕沖洗，晾

干后光鏡下觀察。先用低倍鏡觀察后，選擇分散好的染色體換為高倍及油鏡觀察。

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實(shí)驗(yàn)三染色體顯帶技術(shù)

一、目的要求

初步掌握染色體G顯帶制備的基本方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

自本世紀(jì)60年代末以來，染色體顯帶技術(shù)得到了很大的發(fā)展。人們用物理、

化學(xué)的方法處理染色體標(biāo)本.再用染料對(duì)染色體進(jìn)行分化染色，使其呈現(xiàn)出

明暗相間或深淺不同的帶紋。這一-技術(shù)的應(yīng)用，可以準(zhǔn)確識(shí)別23對(duì)不同類型

的染色體，、并能識(shí)別同一號(hào)染色體上的不同區(qū)帶。從而提高了染色體核型

分析的精確度，為臨床上某些疾病的診斷和病因?qū)W研究提供了有效的手段。

關(guān)于G帶的形成機(jī)理，迄今尚不十分清楚。有人認(rèn)為，在胰酶的作用下，

蛋白質(zhì)不均勻丟失是G帶產(chǎn)生的原因。在染色體上的蛋白質(zhì)經(jīng)處理而丟失

后，這些區(qū)域呈現(xiàn)出淺染（淺帶）。染色體上蛋白質(zhì)和DNA結(jié)合牢固的區(qū)域，

由于蛋白質(zhì)丟失少而呈現(xiàn)深染（深帶）。還有人認(rèn)為，染色體經(jīng)蛋白酶消化

后，染色體的核蛋白破壞，這些區(qū)域裸露的DNA分子的磷酸基團(tuán)能與吉姆

薩染料中的天青和甲基藍(lán)等嚷嗪分子結(jié)合而使染色體著色。也有人認(rèn)為，染

色體上T-A和C-C堿基的含量和分布不同，也與染色體上深淺帶的形

成有關(guān)。A7堿基對(duì)較多的區(qū)域，易與吉姆薩染料結(jié)合而染成深色區(qū)帶：

而G—c堿基對(duì)較多的區(qū)域則相反，即染色體上含C—C堿基多的區(qū)域淺染。

總之，目前說法較多，但主要概括了三種觀點(diǎn).即顯帶是由于①DNA的作用

②蛋白質(zhì)的作用③DNA.、染料和蛋白質(zhì)三者之間相互作用的結(jié)果。這些都有

待于進(jìn)一步研究探討?？梢钥隙?，G顯帶具有很多優(yōu)點(diǎn)：如制備方法簡(jiǎn)便易

行，標(biāo)本可長期保存，帶紋清晰，成本低廉，制備周期短.普通光學(xué)顯微鏡

即可觀察，故已成為當(dāng)今細(xì)胞遺傳學(xué)與分子細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛的一

種技術(shù)，并成為研究分析染色體的主要常規(guī)方法之一。

三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備

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1.試劑：0.85%生理鹽水,0.025%胰蛋白酶溶液。吉姆薩染液.3.8%NaHC03,

二甲苯，松柏油：

2.器材：普通光學(xué)顯微鏡，37℃冰浴箱，普通冰箱.立式染缸，直頭小吸

管，橡皮吸頭.pH試紙.吸水紙（濾紙），扣染玻璃板，擦鏡紙，鏡子。

3、常規(guī)方法制備的人類中期染色體標(biāo)本制片（片齡3~5天最宜）。

四、實(shí)驗(yàn)方法、步驟

1.首先將配制好的0.025%胰酶溶液裝人立式染色缸中調(diào)pH值至7-7.2

放人37~C恒溫箱中預(yù)溫。

2.取染色體制片一張置于胰酶缸中處理15秒左右，迅速投入0.85%生理鹽

水缸中漂洗數(shù)秒（可準(zhǔn)備兩缸鹽水，做兩次漂洗）。

3.用自來水稀釋的吉姆薩染液（自來水：吉姆薩原液=8:1）扣染20分鐘。

4.將標(biāo)本用流水沖洗、涼干。必要時(shí)封片、鏡檢。鏡檢時(shí)，先在低倍鏡下選

擇分散好、長度適中的分裂相，然后轉(zhuǎn)換油鏡觀察其顯帶情況。選擇顯帶

好的標(biāo)本進(jìn)行C顯帶核型分析。

五、注意事項(xiàng)

1.染色體制片胰酶處理前，需37c溫箱烤片一天左右。如滴片后當(dāng)天進(jìn)行

G顯帶，可以將滴片80℃烤箱烤片兩小時(shí)。

2.胰酶預(yù)溫時(shí)要注意預(yù)溫溫度，溫度過高時(shí)胰酶變性失效。

3.胰酶溶液需在使用前配制。染色體在胰酶中的處理時(shí)間可因制片質(zhì)量、片齡

而不同。在不同個(gè)體的染色體制片中也可有差異。此外，不同廠家生產(chǎn)的胰酶

或不同批號(hào)的胰酶，在處理時(shí)間上都可有差別，故每次進(jìn)行染色體C顯帶時(shí)，

最好先試做一張制片.，摸索胰酶處理時(shí)間，以保證獲得最好的染色體G顯帶標(biāo)

本。

六、作業(yè)

1.每位同學(xué)制備兩張良好的G顯帶標(biāo)本。

2.G顯帶過程中應(yīng)注意哪些問題？

3.簡(jiǎn)述染色體G顯帶標(biāo)本制備的基本方法。

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附1：C顯帶技術(shù)

一、目的要求

初步掌握染色體C顯帶的制備方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

c顯帶技術(shù)是一種染色體局部顯帶技術(shù)。染色體經(jīng)堿、酸、鹽處理后.再

經(jīng)Giemsa染色。呈現(xiàn)出特有的著絲粒、次縊痕區(qū)及Y染色體長臂遠(yuǎn)侵段等

的結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū)深染，稱為c帶。此區(qū)域的DNA多為高度重復(fù)序列，并

僅與組蛋白緊密結(jié)合，因而保護(hù)了C帶區(qū)的異染色質(zhì)免受酸、堿、鹽破壞，

并易被Giemsa深染。如該區(qū)域的DNA一旦發(fā)生變性，在改變變性條件后，

即可快速復(fù)性，這是高度重復(fù)序列DNA所具有的特性。其它部位的DNA一

旦被堿破壞變性后，不易發(fā)生復(fù)性，或復(fù)性較慢，因此，不易被Giemsa著

色。所以，染色體兩臂的常染色質(zhì)部分僅顯示出淺淡的染色體-輪廓。優(yōu)良

的C帶標(biāo)本，可使結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū)著色很深。在人類染色體中，染色體的著

絲粒區(qū)、第1_9、16號(hào)染色體的次縊痕區(qū)和11『染色體長臂的遠(yuǎn)側(cè)段明顯深

染。因此，利用c帶？可以準(zhǔn)確地識(shí)別這些染色體，并可確定著絲粒的位置

和數(shù)目、一還可配合其它顯帶技術(shù)對(duì)染色體某些結(jié)構(gòu)異常、Y染色體異常及性

別，做出準(zhǔn)確的診斷.不同個(gè)體、種族，C帶的大小和染色的強(qiáng)度不同，呈現(xiàn)

出多態(tài)性，故C顯帶技術(shù)在多態(tài)性研究和鑒別染色體來源等方

面具有一定的意義。

三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1.試劑：5%T0%飽和Ba(0H)2,0.Imol/LHC1,蒸儲(chǔ)水.70%、80%、

95%酒精和純酒精，2XSSC溶液，Giemsa染液，香柏油或石蠟油，二甲苯。

2.器材：光學(xué)顯微鏡，恒溫水浴箱，溫度計(jì)，立式染缸，鑲子，扣染用

玻璃板，小吸管，50mr量筒，擦鏡紙

3、實(shí)驗(yàn)材.料：常規(guī)方法制備的人類中期染色體標(biāo)本制片。

四、實(shí)驗(yàn)方法、步驟

1.將染色體制片投入58℃飽和Ba(0H)2中5分鐘

2.取出標(biāo)本置0.Imol/LHC1中漂洗。-

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3.蒸儲(chǔ)水漂洗數(shù)次。

4.酒精脫水:70%酒精.-80%精一,一酒％精一純酒精(每個(gè)濃度5分鐘),

空氣干燥。

5.置65℃2XSSC溶液中溫育1.5?2小時(shí)。

6.Giemsa染色20分鐘，自來水沖洗，空氣干燥，顯微

鏡下觀察。

五、C顯帶染色體標(biāo)本觀察

將干燥后的標(biāo)本置顯微鏡低倍鏡下觀察，找到分散好的、染色體長度適宜

的分裂相，換油鏡觀察。

六、注意事項(xiàng)

1.片齡不宜過長，否則影響c帶質(zhì)量。

2.制片從飽和Ba(0H)2中取出時(shí)要迅速投入0.Imol/LHCI中，以免Ba(0H)2

的沉淀物粘貼在玻片上影響C帶的觀察。

3.染色濃度及時(shí)間不宜過高過長，以免影響C帶的質(zhì)量。

七、思考題與作業(yè)

1.每位同學(xué)制備兩張良好的c顯帶標(biāo)本。

2.簡(jiǎn)述染色體C顯帶標(biāo)本制備的基本方法。

附2：核仁形成區(qū)銀染技術(shù)

一、目的要求

1.初步掌握人類染色體核仁形成區(qū)銀染標(biāo)本的制備方法。

2.熟悉核仁形成區(qū)的所在部位。

二、實(shí)驗(yàn)原理

人類D組和G組染色體的隨機(jī)柄部次縊痕區(qū)，稱為核仁形成區(qū)(NOR),與

核仁形成有關(guān)。硝酸銀染色技術(shù)，使具有活性的核仁形成區(qū)特異地染成黑

色。這種銀染色陽性的NOR稱為Ag—NOR,是具有轉(zhuǎn)錄活性的rDNA部位。

12

現(xiàn)已證明，這里是具有轉(zhuǎn)錄活性的18S。RNA和28srRNA基因的所在部位。

此處常伴有豐富的酸性蛋白質(zhì)，而這種蛋白含有較多的一SH基團(tuán)和二硫鍵,

易使硝酸銀中Ag+還原為Ag顆粒.從而使有轉(zhuǎn)錄活性的核仁形成區(qū)鍍上銀顆

粒而呈現(xiàn)出黑色區(qū)域，故被銀染的不是rDNA本身而是酸性蛋白質(zhì)。沒有轉(zhuǎn)

錄活性的NOR則不著色。對(duì)Ag-NOR出現(xiàn)頻率進(jìn)行計(jì)數(shù)，可以了解有活性

的rRNA基因（rDNA）的動(dòng)態(tài)變化，估計(jì)rDNA的轉(zhuǎn)錄活性。人類細(xì)胞中的

Ag-NOR數(shù)目及其在染色體上的位置都是比較穩(wěn)定的，如發(fā)生改變，說明細(xì)胞

內(nèi)rPNA基因活性發(fā)生變化。現(xiàn)認(rèn)為該技術(shù)是研究18srRNA和28srRNA基

因分布和轉(zhuǎn)錄活性的一種簡(jiǎn)易有效的方法，并已廣泛地用于腫瘤細(xì)胞遺傳學(xué),

體細(xì)胞遺傳學(xué)，進(jìn)化遺傳學(xué)和臨床細(xì)胞遺傳學(xué)等領(lǐng)域：

三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1.試劑：50%硝酸銀，明膠一甲酸液，Giemsa染液，蒸儲(chǔ)水。

2.器材：光學(xué)顯微鏡，恒溫水浴箱，小吸管，小吸頭，蓋玻片，擦

鏡紙。

4、實(shí)驗(yàn)材料：外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本制片（片齡在一周以內(nèi)）。

四、實(shí)驗(yàn)方法、步驟

1.先吸取50%AgN0；兩滴滴在染色體標(biāo)本制片上，然后加入明膠一甲、酸液

3滴，輕輕來回?fù)u晃混勻.蓋上蓋玻片。

2.將玻片平置于沸水水浴箱的鐵板上1一2分鐘，待玻片變金黃色，立即用

自來水沖洗。以沖掉蓋玻片、

3.以5%Giemsa溶液復(fù)染10分鐘，自來水沖洗.空氣干燥，鏡下觀

察。

五、標(biāo)本觀察

Ag-NOR計(jì)數(shù)：選擇分散好、數(shù)目全的中期分裂相染色體，計(jì)數(shù)D組6

個(gè)和G組4個(gè)近端著絲粒染色體Ag-NOR的數(shù)目。凡有銀染點(diǎn)的近端著絲粒

染色體，不論單側(cè)或雙側(cè)的。都計(jì)數(shù)為一個(gè)銀染的染色體。

六、注意事項(xiàng)

1.硝酸銀溶液應(yīng)在臨用前配制，配制及使用時(shí)，注意不要濺到四周，以免形成很

13

難除掉的黑色污點(diǎn)。

2.掌握好銀染溫度，溫度越高、反應(yīng)速度越快。

七、思考題和作業(yè)

1.仔細(xì)觀察Ag-NOR形態(tài)、數(shù)目及其在染色體上的位置。

2.了解NOR銀染的原理

14

實(shí)驗(yàn)四染色體組型分析

一、目的與要求

觀察測(cè)量照片上的每條染色體，進(jìn)行配對(duì)、排列、剪貼成核型分析圖，

掌握染色體組型常規(guī)分析法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞分裂的中期是染色體形態(tài)結(jié)構(gòu)最典型的時(shí)期。通過顯微攝影，選

取染色體伸展良好，形態(tài)清晰，有代表性的細(xì)胞分裂中期相進(jìn)行高倍拍攝、放

大、沖曬、得出照片，進(jìn)行核型分析。核型可以代表該個(gè)體的一切細(xì)胞的染色體

組成。

三、實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.小剪刀、鏡子、刻度尺、膠水、白紙（較厚）、染色體標(biāo)本

片。

2.放大的染色體標(biāo)本照片：在所觀察的細(xì)胞中，選取著絲點(diǎn)清楚、分散

好和染色體比較平直的細(xì)胞10個(gè)左右，然后拍照放大。

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟（常規(guī)分析）

（一）計(jì)算染色體數(shù)目

用一定數(shù)目的染色體分散良好的中期細(xì)胞進(jìn)行染色體計(jì)數(shù)。

（二）染色體的形態(tài)特點(diǎn)

記錄主要觀察染色體的長短、著絲點(diǎn)位咒、臂的長短、有無隨體

1.測(cè)量及計(jì)算染色體的兒個(gè)參數(shù)：

（1）染色體的絕對(duì)長度：即每一染色體從一端到另一端的長度,一般以（um）

為單位。

⑵臂比值（r）：r=長臂/短臂

15

存a每條染色體長度

（3）著絲點(diǎn)指數(shù)=,力-九岳秣K相對(duì)長度=M/立*'況岳什kvXC.

該染色體長單倍常染色體長+X長

計(jì)算結(jié)果填入下表。

染色體參數(shù)表

編刊qpq+pIT比相對(duì)長度

]

3

4

2著絲點(diǎn)定位：最常見的方法是根據(jù)臂比值（r）來確定著絲點(diǎn)的位世，可將染色

體分類。

染色體按照臂比分類的標(biāo)準(zhǔn)：

中部著絲點(diǎn)（m）1.0—1.7

亞中部著絲點(diǎn)（Sm）1.7—3.0

亞端部著絲點(diǎn)（St）3.0-7.0

端部著絲點(diǎn)⑴7.0—8

3隨體：有的染色體末端（多數(shù)在短臂上）有一球狀或棒狀小體，這是識(shí)別染色

體的重要標(biāo)志。

4詳細(xì)觀察每個(gè)染色體的形態(tài)特征，把觀察結(jié)果填入下表。

染色體形態(tài)特征表

組號(hào)染色體編號(hào)形態(tài)大小著絲點(diǎn)位置隨體次縊痕鑒別的難易程度

16

（三）染色體的畸變注意染色體的斷裂、缺失、重復(fù)、易位、倒位、等臂染色體、

環(huán)狀染色體、單體交換、粉碎化等。

（四）染色體的排列、組號(hào)和分組根據(jù)染色體長度、著絲點(diǎn)位置并綜合其形態(tài)

等特點(diǎn)，找出成對(duì)的同源染色體。染色體的分組與編號(hào)主要是按照臂比值（r）。

依次排列為m、sm、st和t,在每組中再按長度遞減，將染色體按次序排列起

來。帶隨體的染色體容易識(shí)別，也可單獨(dú)排在最前或最后，以示區(qū)別。性染色

體可不編號(hào)，單獨(dú)排列。

（五）繪圖在所測(cè)量的細(xì)胞中，選取一個(gè)最清晰的標(biāo)準(zhǔn)分裂中期細(xì)胞，放大印

成相片，按上述順序，把成對(duì)的同源染色體剪貼在白紙板上，并附上分裂中期

相片，再進(jìn)行重拍.這樣便構(gòu)成染色體組型圖。將核型圖繪成模式圖

就可得到染色體組型模式圖。

作業(yè)

1.填好以上兩表。

2.剪貼染色體組型圖。

附表

整理工作表

染色體編號(hào)照片染色體長度相對(duì)長臂比著絲粒染色體

暫編號(hào)正編號(hào)長臂短臂全長度％指數(shù)類型

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10.

11.

17

12.

13.

14.

15.

16.

17.

18.

19.

20.

21.

22.

23.

24.

25.

26.

27.

28.

29.

30.

31.

32.

33.

34.

35.

36.

37.

38.

39.

40.

18

41.

42.

43.

44.

45.

46.

47.

48.

19

實(shí)驗(yàn)五植物多倍體誘發(fā)

一、目的與要求

理解射線誘導(dǎo)突變?cè)?；掌握染色體畸變觀測(cè)方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

X射線作用于植物分裂細(xì)胞，生物體接受射線的能量后，染色體直接或間

接被擊斷。擊斷的染色體經(jīng)過重組而形成多種多樣的畸變圖象，形成的染色體斷

片、染色體橋，而微核是染色體斷片在間期仍游離于細(xì)胞質(zhì)中造成的。

三、設(shè)備與器材

X光源，蠶豆苗或洋蔥根，顯微鏡，3：1酒精冰醋酸液

四、步驟與方法

1.沙培蠶豆苗，或?qū)⒀笫[鱗莖培育洋蔥根。

2.待根長1?4厘米時(shí)，將材料置于X光管窗口照射，電壓60?80kV,電

流5?15mA,曝光數(shù)秒到數(shù)分，以制片中能見到較多的染色體畸變圖象為度。

3.照射后培育1?3天，于上午10?11：30,下午15：30-17：00或晚上

0：30—1：30細(xì)胞分裂高峰期，切下0.5厘米左右的根尖數(shù)十條，置于指管中，

用3：1酒精冰醋酸液固定4?24小時(shí)。

4.吸去固定液，加1N鹽酸在60c下解離8?15分鐘。然后吸去鹽酸，用

自來水洗數(shù)次。

5.將根尖放在載玻片上，切留根尖端2?3毫米，滴上一滴醋酸洋紅液，蓋

上蓋玻片，覆上一張濾紙，用大拇指壓片，使細(xì)胞分散。

6.在顯微鏡下觀察。先在低倍鏡下尋找分裂相較多的部位，然后轉(zhuǎn)高倍仔

細(xì)觀察。

耐心地尋找后、末期細(xì)胞中形成的染色體斷片、染色體橋，以及間期細(xì)胞中

形成的微核（衛(wèi)星核）（見圖5—1）。

20

圖4-24植物細(xì)胞染色體畸變的幾種形式

A單橋：B雙橋帶斷片；C斷片；D微核.

這是由于生物體接受射線的能量后，染色體直接或間接被擊斷。擊斷的染色體經(jīng)

過重組而形成多種多樣的畸變圖象。而微核是染色體斷片在間期仍游離于細(xì)胞質(zhì)

中造成的。

發(fā)生染色體畸變的細(xì)胞，在細(xì)胞分裂的過程中會(huì)逐漸死亡或恢復(fù)。輻射后的

材料必須在1?3天內(nèi)觀察。

五、作業(yè)

繪出觀察到的發(fā)生畸變的染色體圖象

21

實(shí)驗(yàn)六果蠅的單因子雜交實(shí)驗(yàn)

一、目的與要求

了解果蠅生活史和各個(gè)時(shí)期的特征及其飼養(yǎng)管理；識(shí)別野生型和某

些突變型的性狀，掌握雌雄鑒別和實(shí)驗(yàn)處理的方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

果蠅為雙翅目昆蟲，屬完全變態(tài)型。用作實(shí)驗(yàn)材料的優(yōu)點(diǎn)：生長迅速，

12天左右可完成一個(gè)世代，每只受精的雌蠅可產(chǎn)卵400—500個(gè)，因此

在短時(shí)間內(nèi)可獲得多數(shù)子代；容易繁殖飼養(yǎng)，突變性狀多達(dá)400個(gè)以上，

且便于觀察，是遺傳學(xué)研究的經(jīng)典材料。

基因在雜合狀態(tài)中保持相對(duì)的獨(dú)立，經(jīng)減數(shù)分裂形成配子時(shí)發(fā)生分

離，配子分離比是1:1,子二代基因型分離比是1:2:1,子二代表現(xiàn)型分

離比是3:1。果蠅野生型（+/+）的長翅為顯性，殘翅型（vg/vg）的殘翅為

隱性。

三、實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.材料?：野生型及幾種突變型果蠅。

2.儀器：放大鏡、雙筒解剖鏡、培養(yǎng)瓶、乙醛、麻醉瓶、白瓷板、解剖針、毛

筆。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1.輕敲培養(yǎng)瓶壁，使果蠅落入瓶底，然后將果蠅倒入麻醉瓶內(nèi)（果蠅有趨光

性，注意光源）。

2.在麻醉瓶塞內(nèi)放入棉花球，并滴上乙酸，蓋上瓶口，進(jìn)行麻醉，使果蠅

保持靜止?fàn)顟B(tài)。麻醉深度視實(shí)驗(yàn)要求而定，若只作觀察后棄掉的果蠅，

則可作深度麻醉，其雙翅向外伸展，與身體呈45角，即表示死亡；若作種

蠅的，則以輕度麻醉為宜，注意果蠅動(dòng)態(tài)，以開始不動(dòng)為準(zhǔn)。

3.將麻醉后的果蠅置于白瓷板上，移至雙筒解剖鏡（或放大鏡放大3—5

22

倍〉，分別觀察各種突變型的性狀。

4.鑒別成蟲的雌雄。

/雄牛雌

雄朱聰叫旺飾;

性別雌蠅雄蠅

23

肉①體型較大.①體型較小。

眼②腹部膨脹，呈橢圓形，尾②腹部星圓筒形，尾端鈍而圓。

觀部較尖。③腹部便I有黑色環(huán)紋3—5節(jié)，末端一

察③腹部有黑色環(huán)紋5—7節(jié)，節(jié)特別粗.顏色較深，致使尾端呈一明顯黑

粗細(xì)均勻.顏色較淺。斑。

解①腹面有6個(gè)腹片。①腹面有4個(gè)腹片。

剖②無性梳。②第一對(duì)足節(jié)前端表面有一束黑色鬃毛

鏡③外生殖器可見生殖孔和肛流蘇，稱性梳。性梳的有無是鑒別雌雄果蠅

觀上板。無濃黑剛毛包圍.的明顯標(biāo)志之?。

察③外生殖器較復(fù)雜，可見抱握器及陰

莖.生殖器被濃黑的剛毛所包圍。

性別鑒別觀察

目

體型四部性板

雄蚓

雄蠅

5.雜交。

5.1野生型及幾種突變型性狀的觀察

\體色眼色翅長翅形

野生型（+）

白眼型（W）

殘翅型翅g）

5.2.選取殘翅果蠅（vg/vg）和野生果蠅（+/+）為親本進(jìn)行雜交（正交或反

24

交均可，但母本一定選用處女蠅）。培養(yǎng)兩瓶，每瓶5—6對(duì)，標(biāo)記為p,

并在標(biāo)簽上注明雜交組合、日期、試驗(yàn)者姓名。置溫箱22—25。c培養(yǎng)。

5.3.7—8天后，移去親本蠅，其后代即為F1代。

5.4.待F1代成蟲出現(xiàn)后，觀察其翅膀。

5.5.在新鮮培養(yǎng)瓶內(nèi)（標(biāo)記為F1）放入5—6對(duì)F1果蠅，這里的雌蠅不必

是處女蠅，在標(biāo)簽里作好其他注明。

5.67—8天后移去F1果蠅，其后代為F2。

5.7待F2成蟲出現(xiàn)后，每天統(tǒng)計(jì)野生型和殘翅型果蠅數(shù)目，連續(xù)統(tǒng)計(jì)7—8

天，把統(tǒng)計(jì)過的果蠅放入死蠅盛留器中。

F1記錄表：

長翅聿義殘翅3長翅3X殘翅早

日期長翅數(shù)殘翅數(shù)長翅數(shù)殘翅數(shù)

F2記錄表

長翅數(shù)殘翅數(shù)數(shù)目長翅數(shù)殘翅數(shù)

日期

五、作業(yè)：

做好上列各表的記錄，并統(tǒng)計(jì)性狀比例，利用X?檢驗(yàn)看是否符合分離規(guī)

律.

25

附：果蠅的培養(yǎng)

（一）果蠅生活史果蠅的一生分為四個(gè)明顯階段：卵、幼蟲、蛹和成蟲。

各階段延續(xù)時(shí)間的長短與溫度關(guān)系甚切，一般最宜在20—25。c培養(yǎng)，

超過30。c會(huì)引起不孕或死亡。溫度過低則延長生活周期并降低生活

力。卵和幼蟲階段為8天，蛹階段為6天，成蟲可以活26—33羽化

后，雌蠅一般在12小時(shí)后開始交配，兩天后產(chǎn)卵，卵產(chǎn)生后1天，孵化

出幼蟲。幼蟲蛻皮2次。幼蟲在蛻皮前后之間的生長期，稱為齡。果

蠅有3齡，第三齡幼蟲的兒丁質(zhì)變硬和變深，成為圍蛹。果蠅整個(gè)生活

史是屬于完全變態(tài)型，變態(tài)發(fā)生在圍蛹中，變態(tài)完成時(shí)，成蟲穿出圍蛹

的前端（蛹蓋）羽化出來，羽化后2天，雌蠅開始產(chǎn)卵。

（二）果蠅飼養(yǎng)

1.培養(yǎng)器皿：透明的玻璃（或塑料）指管或瓶子，可作為果蠅的培養(yǎng)器皿。

器皿的理想大小是50-100cmoo器皿要洗清潔、干燥，但無需滅菌。

塞子用塑料?（聚氮基甲酸乙酯）泡沫或不吸水的棉花制成。塞子在重新使

用之前，應(yīng)加壓滅菌。當(dāng)連續(xù)使用或壓力壓扁塑料塞時(shí)，可把被壓扁的

塑料塞浸到異丙醇中，便會(huì)伸展開來，但使用時(shí)要除掉氣味。塑料塞可

裝在有塑料透氣蓋的容器里。容氣蓋可用于控制溫度和防止果蠅

培養(yǎng)瓶塞被偶然打開。

2.培養(yǎng)基煮制：果蠅能夠飼養(yǎng)在各種發(fā)酵的植物上.也可用煮制的培養(yǎng)

基?，F(xiàn)介紹兒種配方如下基?，F(xiàn)介紹兒種

原料123

自來水750ml.750ml500ml

霉菌抑制劑1g1g1g

瓊脂15g15g15g

無硫糖蜜130ml

玉米粉（黃色）100g

小麥糊100g

26

香蕉果肉500ml

例配方I：將瓊脂15g和霉菌抑制劑1—2g溶解到500ml沸水

中，加130ml無硫糖蜜（或紅糖）再煮沸，將100g黃玉米粉和250ml

冷水混合，然后將此混合物倒入沸液中，再煮幾分鐘，在培養(yǎng)基還很

稀薄容易倒的時(shí)候，傾倒到培養(yǎng)器皿中至2-3cm厚，稍冷后插入滅菌

的吸水紙片（可疊成扇形），置于中央，作為幼蟲化蛹的基地（或把紙片

浸泡在含0.1%霉菌抑制劑中，使用前將其干燥）。隨之用滅菌的塞子塞

好瓶口，冷卻待用（若倒入培養(yǎng)基后，因熱培養(yǎng)基的水分升到壁上，有冷

卻水珠附壁時(shí)，可放在50—60℃溫箱內(nèi)烘干，待水分消失就可停電加塞，

讓其在溫箱內(nèi)自然降溫，冷卻后備用）。若暫不用的培養(yǎng)瓶（已裝瓶）可

放在冰箱保存。

3.抑制蛾：果蠅株系有時(shí)螭患成災(zāi)，任何受侵?jǐn)_的株系都應(yīng)該立即

從實(shí)驗(yàn)室移去，并進(jìn)行滅菌。清潔是阻止螭侵?jǐn)_的最好辦法，所有器皿

和工作臺(tái)而要保持清潔，不得將株系飼養(yǎng)1個(gè)月以上。如果把培養(yǎng)皿

放在經(jīng)1份苯酚節(jié)酯和5份異丙醇混合液或其他殺蛾劑處理的工作

臺(tái)面，也能達(dá)到抑制螭的目的。

（三）原種培養(yǎng)作留種傳代培養(yǎng)用的果蠅，要先檢查果蠅有無混雜，

以防原種丟失。親本數(shù)目一般是每瓶5對(duì)。把已經(jīng)輕度麻醉的種蠅斜放

入培養(yǎng)瓶瓶壁、加塞，培養(yǎng)瓶橫臥，待果蠅蘇醒后再將瓶豎起。以防果

蠅粘在培養(yǎng)基上失去活動(dòng)能力。原種每3周左右換培養(yǎng)基1次，隨

氣溫而定，每一原種培養(yǎng)2—3瓶；標(biāo)明品系及日期。（四）處女蠅

的搜集與實(shí)驗(yàn)交配雌蠅生殖器官有受精囊，可保留大量交配所得的精

子，能使大量卵子受精，因此，作品系間雜交時(shí)，需選用處女蠅。處女

蠅應(yīng)在孵出后每隔8小時(shí)收集1次，收集到的處女蠅與雄蠅分別分瓶飼

養(yǎng)備用。

在雜交試驗(yàn)中，7—8天移去親本果蠅，以免與子代混淆。棄去的果

蠅可放入95%酒精瓶內(nèi)或煤油瓶內(nèi)處死，不要放生，以免污染環(huán)境。

27

實(shí)驗(yàn)七人群?jiǎn)位蜻z傳基因頻率分析

一、目的與要求

理解單基因性狀遺傳規(guī)律，掌握基因頻率與基因型頻率計(jì)算。

二、實(shí)驗(yàn)原理

單基因性狀是指受一對(duì)等位基因控制的性狀。單基因性狀的遺傳方式可分

為：常染色體顯性遺傳(AD)、常染色體隱性遺傳(AR)和伴性遺傳(SL)3大類。伴

性遺傳又可分為：X伴性顯性遺傳(XD)、X伴性隱性遺傳(XR)和Y伴性遺傳。下

面介紹人類一些簡(jiǎn)單的單基因性狀。

2.1人體形態(tài)性狀的遺傳

2.1.1頭形指成年人的頭形，頭橫幅與前后之比例(橫幅/前后)>0.80的為短

頭。俗稱“扁頭”，為AD。比例<0.80者為長頭，是AR。

2.1.2發(fā)旋在頭頂靠后方的中線處有一螺紋即發(fā)旋。螺紋處頭發(fā)紋路有兩種方

式：①右旋，即順時(shí)針方向，是AD。②左旋。即逆時(shí)針方向，是AR。

2.1.3頭發(fā)卷發(fā)是AD,直發(fā)是AR。

2.1.4頭發(fā)顏色黑發(fā)是AD,金發(fā)是AR。

2.1.5前額發(fā)際著生頭發(fā)區(qū)域的邊緣即發(fā)際。前額發(fā)際有兩種情況：①前額發(fā)

際向腦門突出一三角形發(fā)突，即ADo②前額發(fā)際平齊的為AR(圖1)。先天性卵

巢發(fā)育不全癥患者后發(fā)際低，是臨床診斷標(biāo)志之一。

2.1.6眼瞼俗稱“眼皮”。雙眼皮是AD,單眼皮是AR。

28

2.1.7蒙古褶亦稱“內(nèi)眥皺裳”。即上眼皮在眼內(nèi)角向下延伸形成的皮膚皺褶,

此褶不同程度地遮蓋著淚阜。有蒙古褶為AD,無蒙古褶為ARo蒙古褶是大部分

蒙古人種（亦稱黃色人種）的特征。非洲南部的科薩人這種特征也頗明顯（圖2）o

2.1.8眼色即虹膜的顏色。褐色眼或棕色眼是AD,藍(lán)色眼或黑色眼是AR。

2.1.9睫毛長睫毛為AD,短睫毛為ARo

2.1.10耳垂有耳垂，即耳垂下懸，與頭連接處向上凹陷，為ADo無耳垂，即

耳輪一直向下延續(xù)到頭部，為AR（圖3.①）。

2.1.11達(dá)爾文氏結(jié)節(jié)人類耳輪邊緣后上部有一個(gè)小結(jié)節(jié)，稱達(dá)爾文氏結(jié)節(jié)，又

稱耳輪結(jié)節(jié)。一般認(rèn)為這個(gè)突起和猴類耳殼的耳尖相當(dāng)。有這個(gè)結(jié)節(jié)為AD,沒

有為AR。但有的人僅一個(gè)耳有此特征，有的個(gè)體具顯性基因，但由于外顯率低,

類似隱性表現(xiàn)型。也有人認(rèn)為達(dá)爾文氏結(jié)節(jié)與鼻尖厚度是連鎖遺傳（圖3.②）。

2.1.12耳垢亦稱“盯酢”。即外耳道盯酢腺的正常油脂性分泌物，黃色或棕色,

有保護(hù)作用。但耳垢的性質(zhì)則不同，濕耳垢為AD,干耳垢為AR。

2.1.13鼻尖即鼻下端向前的突起。其向下彎曲呈鷹嘴狀，即鉤鼻尖，為ADo

直鼻尖為ARo

2.1.14鼻孔闊鼻孔是AD,狹鼻孔是AR。

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2.1.15卷舌研究我國人的發(fā)音發(fā)現(xiàn)，有的人能按自己的意志，把舌的兩側(cè)邊抬

高卷曲如同英文字母U形，即為卷舌，屬ADo多數(shù)人具有此特征。有的人不能

卷舌，屬AR（圖4）。

2.1.16翻舌（舌內(nèi)翻）研究中國人的發(fā)音還發(fā)現(xiàn)，有的人舌尖部分不用上頜牙齒

的幫助能向后翻轉(zhuǎn)，即為翻舌，為AR（圖5）。這種性狀在人群中出現(xiàn)頻率不高，

根據(jù)國外的統(tǒng)計(jì)只有1/1000弱。不能翻舌的人為AD。舌的活動(dòng)在人群中可見3

種類型：①舌能卷而不能翻。②舌能卷又能翻。③舌不能卷又不能翻。舌不能卷

而能翻則從未見過。Marein（1975）提出卷舌并非遺傳。

2.1.17拇指末節(jié)外翻有些人的拇指末節(jié)能向外彎曲，其彎曲度與拇指中軸可達(dá)

60"，屬AR（圖6）。直立屬AD。

2.1.18食指與無名指長短食指與無名指之間的長短關(guān)系表現(xiàn)為伴性遺傳，控制

基因位于X染色體上。食指短于無名指是隱性基因所決定，為XRo食指長于無

名指,為XD。

檢查的方法是在白紙上畫一橫線，手掌向下放于紙上，使中指指尖方向與橫線垂

直，無名指指尖與橫線相齊，看此時(shí)食指指尖是在橫線的上方還是下方。

2.1.19中指有無毛有人中指生有毛，有的人中指不生毛。中指有毛為AD,無

中指毛為ARo

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2.1.20小指將兩手自然平放于桌上，肌肉放松，此時(shí)小指最末節(jié)向無名指方向

彎曲的為AD。不能彎曲的為AR。

2.1.21手的癖性右癖是AD,左癖是AR。

2.1.22皮膚顏色黑皮膚是AD,白皮膚是AR。

2.2味覺器官生理機(jī)能遺傳

2.2.1苯硫胭嘗味試驗(yàn)

人類對(duì)苯硫眼(PTC)嘗味能力遺傳。苯硫麻是一種白色結(jié)晶狀藥物，由于含

有N-C=S基因，所以有苦澀味。有的人能嘗出1/750,000?1/50,000PTC濃度溶

液的味道(苦味、苦澀、少數(shù)人感到甜味)，這些人稱為嘗味者；有的人只能嘗出

PTC濃度大于1/24,000溶液的味道，這些人均稱為PTC味盲者。嘗味者為AD,

味盲者為AR。我國漢族人群中，PTC味盲約占9%。已知味盲者易患結(jié)節(jié)性甲狀

腺腫，因此可以把PTC的嘗味能力作為一種輔助性診斷指標(biāo)。

2.2.2SB嘗味試驗(yàn)

人類對(duì)化學(xué)物品(SB)的味覺反應(yīng)遺傳。取浸泡于0.1%濃度的SB溶液的紙片，

咀嚼嘗味。有的人感到咸味、有的人感到甜味、有的覺得苦，這些人稱嘗味者，

是AD。有的人什么味道也覺察不出，稱不嘗味者，為AR。

2.3人類色覺性狀的遺傳

人類紅綠色盲的遺傳現(xiàn)象屬于X伴性隱性遺傳(XR),正常為X伴性顯性遺

傳(XD)。我國漢族人群中，男性紅綠色盲發(fā)病率為7%,女性發(fā)病率接近0.5%。

因此，紅綠色盲在人群中男性遠(yuǎn)多于女性。

2.4免疫學(xué)性狀的遺傳

2.4.1人類的AB0血型系統(tǒng)

A型、B型屬于AD,0型屬于AR,AB型屬于共顯性遺傳。根據(jù)分離律的原

理，已知雙親的血型，可以推出子女中可能有什么血型或不可能有什么血型。這

在法醫(yī)學(xué)的親權(quán)鑒定上有一定作用，但只能起否定作用，不能起肯定作用。

2.4.2人類的MN血型系統(tǒng)

M型、N型屬于顯性性狀不存在隱性性狀。MN型屬于共顯性性狀，一對(duì)等位

基因在雜合體中，兩種基因的作用都表達(dá)出來，不存在隱性狀態(tài)，就叫共顯性遺

傳。

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三、步驟與方法

互相觀察全班的同學(xué)的發(fā)旋、前額發(fā)際、眼瞼、耳垂、卷舌、食指與無名指

長短、手的癖性、中指有無毛8個(gè)性狀的表現(xiàn)型，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)表現(xiàn)型頻率。

四、作業(yè)

了解自己父母與親屬的表現(xiàn)型，推測(cè)基因型；

假設(shè)各基因都處于平衡狀態(tài)，計(jì)算基因頻率與基因型頻率。

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實(shí)驗(yàn)八群體蛋白多態(tài)聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測(cè)

一、目的要求

（1）學(xué)習(xí)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)蛋白質(zhì)多態(tài)的原理。

（2）掌握聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳檢測(cè)蛋白質(zhì)多態(tài)的操作技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠為載體的一種區(qū)帶電泳。該凝膠

由丙烯酰胺（Acr）和交聯(lián)劑N,N一甲叉雙丙烯聚酰胺（Bis）聚合而成。

Acr和Bis單獨(dú)存在或混合在一起時(shí)是穩(wěn)定的，且具有神經(jīng)毒性，操作時(shí)應(yīng)戴手

套，避免接觸皮膚，但在具有自由基團(tuán)體系時(shí)就能聚合。引發(fā)自由基團(tuán)的方法有

化學(xué)法和光化學(xué)法兩種?；瘜W(xué)法的引發(fā)劑是過硫酸胺（Ap）,催化劑是四甲基乙

二胺（TEMED）；光化學(xué)法是以光敏感物核黃素來代替過硫酸胺，在紫外光照射

下引發(fā)自由基團(tuán)。采用不同濃度的Acr、Bis、Ap、TEMED使之聚合，產(chǎn)生不

同孔徑的凝膠。因此可按分離物質(zhì)的大小，形狀來選擇凝膠濃度。

盡管聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）有圓盤（disc）和垂直板（verticalslab）型之

分，但兩者的原理完全相同。由于垂直板形具有板薄，以冷卻，分辨率高，操作

簡(jiǎn)單，便于比較與掃描的優(yōu)點(diǎn)，而為大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用。

三、試劑和器材

1、試劑

分離膠緩沖液（Tris-HCl緩沖液PH8.9）：取1N鹽酸48ml,Tris36.3g,用

無離子水溶解后定容至lOOmlo

濃縮膠緩沖液（Tris-HCl緩沖液PH6.7）：取1N鹽酸48ml,Tris5.98g,用

無離子水溶解后定容至100ml。

電泳緩沖液（Tris-甘氨酸緩沖液PH8.3）：稱取Tris6g,甘氨酸28.8g,用無

離子水溶解后定容至ILo用時(shí)稀釋10倍。

30%Acr—Bis貯存液：30gAcr,0.8gBis,用無離子水溶解后定容至100ml,

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不容物過濾去除后置棕色瓶貯于冰箱。

其它：4%考馬斯亮藍(lán)R-250、10%過硫酸鍍(新鮮配制)、25%蔗糖溶液、

0.05%浪酚藍(lán)溶液、7%冰乙酸溶液、TEMED。

2、材料

動(dòng)物血清。

3、器材

夾心式垂直板電泳槽，凝膠膜(135*100*1.5mm),直流穩(wěn)壓電源(電壓300

-600V,電流50—100mA,移液管(1,5,10ml),燒杯(25,50,100ml),細(xì)

長頭的滴管，1ml注射器以及6號(hào)長針頭，微量注射器(IORL或者50|iL),培

養(yǎng)皿(直徑120mm),玻璃板(13*13cm),玻璃紙兩張，日光燈一臺(tái)。

四、操作方法

1、安裝夾心式垂直板電泳槽

夾心式垂直板電泳槽操作簡(jiǎn)單，不易滲漏，這種電泳槽兩側(cè)為有機(jī)玻璃制成

的電極槽，兩個(gè)電極槽中間夾有一個(gè)凝膠膜，該膜由一個(gè)U形硅膠框，長與短

玻璃板及樣品模槽板所組成。電泳槽由上貯槽，下貯槽和回紋狀冷凝管組成，兩

個(gè)電極槽與凝膠模之間靠貯液槽螺絲固定，各部分按下列順序組裝：

(1)裝上貯槽和固定螺絲稍釘，仰放在桌面上。

(2)將長短玻璃分別插到硅相框的凹形槽中。注意勿用