(高清版)GBT 40179-2021 植物中有機酸的測定 液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法

ICSCCS07.080A40GB/T40179—2021液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40179—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由全國生化檢測標準化技術委員會(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：中國測試技術研究院生物研究所、四川大學、中國計量大學、北京工商大學、河北省食品檢驗研究院。1GB/T40179—2021植物中有機酸的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1范圍本文件規(guī)定了植物中有機酸的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法?；郊姿岷?,4-二羥基苯甲酸的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1有機酸organicacids植物材料中一類具有酸性的有機化合物。4原理試樣用50%甲醇溶液加熱回流提取后，經(jīng)反相色譜柱分離，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定和確證，內(nèi)標工作曲線法定量。5試劑或材料除非另有說明，本方法使用的試劑均為色譜純。水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.2甲酸。5.30.1%甲酸溶液：移取甲酸1.0mL于1L容量瓶中，用水定容至刻度。5.450%甲醇溶液：移取甲醇500.0mL于1L容量瓶中，用水定容至刻度。信息詳見附錄A中表A.1,純度均≥98%。5.6單一標準儲備液：分別準確稱取各有機酸標準品適量(精確到0.01mg),其中富馬酸、反式-烏頭酸2GB/T40179—2021酸、2,5-二羥基苯甲酸和3,4-二羥基苯甲酸用甲醇溶解，混勻，配制成濃度均為1000.0mg/L的有機酸單一標準儲備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個月。5.7混合標準儲備液：分別準確吸取適量各有機酸單一標準儲備液于同一10mL容量瓶中，用50%甲的混合標準儲備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個月。5.8內(nèi)標儲備液：準確稱取琥珀酸-2,2,3,3-d?標準品適量(精確到0.01mg),用50%甲醇溶液溶解，混勻，配制成濃度為100mg/L的內(nèi)標儲備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個月。5.9內(nèi)標溶液：準確吸取內(nèi)標儲備液1.0mL于100mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀釋并定容至刻5.10混合標準工作溶液：分別準確吸取適量混合標準儲備液于10mL容量瓶中，再分別準確加入2.5mL內(nèi)標溶液，用50%甲醇溶液稀釋配制成濃度均為0.10mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L、0.75、1.0mg/L、1.25mg/L的系列混合標準工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5.110.22μm親水性尼龍微孔濾膜。6儀器設備6.1液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀：配電噴霧離子源(ESI)。6.2電子天平：感量為0.0001g和0.01mg。6.3高速離心機：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。6.4高速均質(zhì)器。6.5高速粉碎機。6.6冷凝回流裝置。7分析步驟7.1樣品制備取金銀花、黨參、山楂、枸杞等有代表性干制成兩份，裝入潔凈的盛樣容器內(nèi)，密封并標識，于0℃~4℃下避光保存，一周內(nèi)測定。7.2試樣處理稱取約1.5g干樣或10g鮮樣(精確至0.001g)于100mL圓底燒瓶中，加入內(nèi)標儲備液625μL和離心5min,取2.0mL上清液于10mL容量瓶中，用50%甲醇溶液定容至刻度，混勻，過0.22μ3GB/T40179—2021b)流動相：流動相A為0.1%甲酸溶液，流動相B為甲醇，梯度洗脫程序見表1;時間/min流動相B體積分數(shù)/%05655555在相同實驗條件下進行樣品測定時，如果樣品中待測物質(zhì)的保留時間和標準工作溶液中對應的保留時間一致(變化范圍在士2.5%以內(nèi)),且樣品譜圖中待測組分監(jiān)測離子的相對豐度和濃度相當?shù)臉藴适?0士30士50見附錄B中表B.1,多反應監(jiān)測圖參見附錄C。4GB/T40179—20217.5平行試驗按7.2～7.4的規(guī)定對同一試樣進行兩次平行測定。8試驗數(shù)據(jù)處理樣品中待測物含量的計算見式(1): (1)式中：X——試樣中被測組分含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——從內(nèi)標標準工作曲線上得到的被測組分溶液質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——試樣溶液總體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術平均值表示，結(jié)果保留兩位小數(shù)。9精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。本方法測定14種有機酸的定量限參見附錄A中表A.1。5(資料性)有機酸化合物信息及定量限有機酸化合物信息及定量限見表A.1。表A.1有機酸化合物信息及定量限序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質(zhì)量定量限/(mg/kg)干樣鮮樣1富馬酸fumaricacidC?H?O?0.492反式-烏頭酸t(yī)rans-aconiticacid4023-65-8C?H?O?0.253沒食子酸gallicacidC?H?O?0.120.8242,5-二羥基苯甲酸2,5-dihydroxybenzoicacid490-79-9C?H?O?0.120.825己二酸adipicacidC?H??O?0.496綠原酸chlorogenicacid327-97-90.120.827對羥基苯甲酸p-hydroxybenzoicacid99-96-7C?H?O?0.030.2083,4-二羥基苯甲酸3,4-dihydroxybenzoicacid99-50-3C?H?O?0.120.829香草酸vanillicacidCgHgO?0.986.52咖啡酸caffeicacid331-39-5C,HgO?0.25丁香酸syringicacid530-57-4C?H??O?0.49對香豆酸p-coumaricacid501-98-4C?H?O?0.120.82阿魏酸ferulicacidC??H??O?0.25水楊酸salicylicacid69-72-7C?H?O?0.120.82琥珀酸-2,2,3,3-d?succinicacid-2,2,3,3-d?14493-42-6C?H?D?O?GB/T40179—2021(資料性)e)干燥氣溫度：290℃;序號中文名稱保留時間min定量離子對m/定性離子對m/z源內(nèi)碎裂電壓V碰撞能量V1富馬酸115.0/71.0115.0/71.0;115.0/32.12反式-烏頭酸173.0/85.1173.0/85.1;173.0/128.93沒食子酸8.80169.0/125.0169.0/125.0;169.0/124.042,5-二羥基苯甲酸153.0/109.0153.0/109.0;153.0/108.05己二酸145.1/101.2145.1/101.2;145.1/83.26綠原酸353.1/191.0353.1/191.0;353.1/85.07對羥基苯甲酸137.0/93.0137.0/93.0;137.0/65.083,4-二羥基苯甲酸153.0/109.1153.0/109.1;153.0/108.09香草酸167.1/152.0167.1/152.0;167.1/108.0咖啡酸179.0/135.1179.0/135.1;179.0/134.0丁香酸197.1/182.0197.1/182.0;197.1/123.0對香豆酸163.0/119.0163.0/119.0;163.0/93.1阿魏酸193.1/134.0193.1/134.0;193.1/178.0水楊酸137.0/93.0137.0/93.0;137.0/65.1琥珀酸-2,2,3,3-d?121.0/77.0121.0/77.0;121.0/102.06響應值/104響應值/104響應值/104響應值/104響應值/104(資料性)15種有機酸的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜MRM15種有機酸的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜MRM圖見圖C.1～圖C.15。響應值門03時應值/103響應值/104i/min8.80minr/mll圖C.1富馬酸的MRM圖圖C.2反式-烏頭酸的MRM圖圖C.3沒食子酸的MRM圖4.5-4-0//min圖C.42,5-二羥基苯甲酸的圖C.5己二酸的MRM圖圖C.6綠原酸的MRM圖MRM圖//minminl/min16.6216.62min2.5-/min對羥基苯甲酸的MRM圖3,4-二羥基苯甲酸的MRM圖響應值/10響應值/10響應值/104GB/T40179—2021響應值/1043.5-3-2.5-2-0.5-0