梅毒的實驗室檢查講解

胡學軍嘉善中醫(yī)醫(yī)院檢驗科梅毒的實驗室檢查梅毒的定義定義：梅毒是一種慢性傳染性疾病。是由梅毒螺旋體（蒼白螺旋體）引起，患病后病程漫長，早期侵犯生殖器和皮膚，晚期侵犯全身各器官，并生多種多樣的癥狀和體征，病變幾乎能累及全身各個臟器。病原體為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(Treponemapallidumsubspeciespallidum)

蒼白亞種梅毒蒼白螺旋體地方亞種地方性梅毒極細亞種雅司病密螺旋體屬

品他螺旋體品他病4

微生物形態(tài)

螺旋細密（5-15um長，0.1-0.2um寬）、規(guī)則一端/兩端鉤狀，菌體成8、S或C形在暗視野顯微鏡下運動活潑

G-,Fontana鍍銀染色,染成棕褐色5形態(tài)與染色暗視野顯微鏡下觀察6梅毒螺旋體梅毒螺旋體，F(xiàn)ontana鍍銀染色傳播途徑梅毒患者的皮膚、粘膜中含梅毒螺旋體，未患病者在與梅毒患者的性接觸中，皮膚或粘膜若有細微破損則可得病。獲得性梅毒（后天）早期梅毒病人是傳染源，95%是通過不潔性交傳染，少數(shù)通過接吻，握手、輸血、接觸污染的內(nèi)衣濕毛巾、茶杯、煙斗、哺乳、尿布等傳染。胎兒梅毒（先天）：孕婦體內(nèi)螺旋體，一般在妊娠3—4月通過胎盤感染嬰兒。

免疫性特異性抗體感染2周后產(chǎn)生特異性IgM抗體,不能通過胎盤感染4周后出現(xiàn)特異性IgG抗體,可通過胎盤非特異性抗體刺激機體產(chǎn)生抗心磷脂抗體/反應(yīng)素RPR

和

TRUST等方法可檢出：5～7周或硬下疳后2～3周完全治愈的早期梅毒可再感染梅毒的實驗室檢測方法顯微鏡檢測法：

（1）暗視野顯微鏡檢查（2）鍍銀染色檢查血清學檢測法：

非梅毒螺旋體抗原血清試驗

（1）VDRL(性病研究實驗室試驗)：需滅活（2）USR（不加熱血清反應(yīng)素試驗）（3）RPR(加速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗)

（4）TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗)

梅毒螺旋體抗原血清試驗（1）FTA-ABS

（2）TPPA/TPHA

（3）TP-ELISA

（4）發(fā)光法（5）膠體金法

暗視野顯微鏡檢查標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液方法：暗視野顯微鏡下查找梅毒螺旋體。結(jié)果：典型的梅毒螺旋體呈白色發(fā)光,其螺旋較密而均勻。運動方式：①伸縮其螺旋間距離而移動（主要方式）②蛇行式③旋轉(zhuǎn)式評價：①.簡單、可靠。②.早期：硬下疳（梅毒血清學試驗仍陰性）。③.陰性不能排出患梅毒的可能性

暗視野顯微鏡下的梅毒螺旋體螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方法，WHO指定其為性病實驗室必備項目之一鍍銀染色檢查基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結(jié)果：棕褐色的梅毒螺旋體

梅毒血清試驗梅毒螺旋體侵入人體后產(chǎn)生：抗心磷脂抗體：即非特異性抗體、反應(yīng)素

RPR、TRUST抗梅毒螺旋體抗體：IgG、IgM

ELISA、TPPA兩種抗體1．抗心磷脂抗體血清學試驗（RPR，TRUST等）目的：檢測血清中抗心磷脂抗體

抗原：心磷脂甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST):原理：抗原以膽固醇晶粒為載體，包被上心磷脂和卵磷脂，構(gòu)成VDRL（抗類脂）抗原顆粒。再把抗原顆粒結(jié)合到甲基胺紅上，當抗原與血清中反應(yīng)素以一定的比例相互作用時，出現(xiàn)凝集，凝集顆粒呈紅色。甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST):特點：敏感度高、特異性低，易出現(xiàn)假陽性用途作為篩選定量檢測：觀察療效、復發(fā)和再感染2、梅毒螺旋體抗體血清學試驗：方法：1、梅毒螺旋體抗體測定(ELISA法)2、TPPA（明膠凝集實驗）等梅毒螺旋體抗體測定(ELISA法)

特點：檢測總抗體（1）用作篩查和確認試驗：敏感性、特異性高

（2）不用于觀察療效、復發(fā)和再感染：感染梅毒螺旋

體后，體內(nèi)產(chǎn)生的抗螺旋體抗體持續(xù)存在，甚至

終生，即使經(jīng)過足夠的抗梅治療，其血清反應(yīng)仍

持續(xù)陽性TPPA（明膠凝集實驗）

確證實驗/確診實驗采用梅毒螺旋體天然抗原作為診斷抗原特異性和靈敏度高，檢測的是IgM抗體，可以檢測到潛伏梅毒，但操作繁瑣，費用高梅毒血清試驗假陽性因素：技術(shù)性：標本的污染溶血操作失誤生物學假陽性：某些疾病：結(jié)核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性心臟病、風疹、系統(tǒng)性硬化癥等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂，到血液中假陽性（多見于TRUST）生理機能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學假陽性梅毒螺旋體抗體測定(ELISA法)結(jié)果的解讀

陰性對照OD≤0.1，陽性對照OD＞0.8時實驗正常，否則實驗無效。計算方法：cut-off(co)值=0.12+陰性對照平均OD值s/co值=病人OD值/cut-off(co)值，s/co值大于或等于1判為陽性，s/co值小于1判為陰性注s/co值在0.5~2.0之間的灰區(qū)樣本需復檢確認后報告梅毒檢測流程圖A1(ELISA)A1+A1-A2(PRP或TRUST）A1+A2+感染：既往或現(xiàn)在A1+A2-A3（TP