細(xì)胞工程期末復(fù)習(xí)必考

細(xì)胞工程期末復(fù)習(xí)（必考）細(xì)胞工程：研究真核細(xì)胞的核—質(zhì)關(guān)系以及細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)基因轉(zhuǎn)移的技術(shù)。組織工程：研究開(kāi)發(fā)用于修復(fù)或改善人體病損組織或器官的結(jié)構(gòu)、功能的生物活性替代物的一門(mén)科學(xué)。染色體工程：是按照一定的設(shè)計(jì)，有計(jì)劃的消減添加或替換同種或異種染色體從而達(dá)成定向改變遺傳特性和選育新品種的一種技術(shù)。細(xì)胞連接：使細(xì)胞間的聯(lián)系結(jié)構(gòu)。細(xì)胞表面的特化結(jié)構(gòu)或特化區(qū)域，是細(xì)胞間建立長(zhǎng)期組織上聯(lián)系的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。涉及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、跨膜蛋白、胞質(zhì)溶膠蛋白、細(xì)胞骨架蛋白等。細(xì)胞全能性：指分化細(xì)胞保存著所有的核基因組，具有生物個(gè)體成長(zhǎng)、發(fā)育所需要的所有遺傳信息，具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。細(xì)胞分化：指細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過(guò)程。涉及時(shí)間和空間上的分化。脫分化：又稱去分化，指分化細(xì)胞失去特有的結(jié)構(gòu)和功能變?yōu)榫哂形捶只?xì)胞特性的過(guò)程。即分化的細(xì)胞在適當(dāng)條件下轉(zhuǎn)變?yōu)榕咝誀顟B(tài)而重新獲得分裂能力的過(guò)程。再分化：是指在離體條件下，無(wú)序生長(zhǎng)的脫分化細(xì)胞在適當(dāng)條件下重新進(jìn)入有序生長(zhǎng)和分化狀態(tài)的過(guò)程。細(xì)胞培養(yǎng)：指從體內(nèi)組織分離細(xì)胞，模擬體內(nèi)環(huán)境，在無(wú)菌適當(dāng)?shù)臈l件使其生長(zhǎng)繁殖的技術(shù)。人工種子：又稱合成種子或體細(xì)胞種子，指將植物離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的胚狀體或芽包裹在具有養(yǎng)分和保護(hù)功能的人工胚乳和人工種皮中形成的類似種子的顆粒。植物胚胎培養(yǎng)：指對(duì)植物的胚及胚器官進(jìn)行人工離體無(wú)菌培養(yǎng)，使其發(fā)育成幼苗的技術(shù)。試管受精：指在無(wú)菌條件下離體培養(yǎng)未受精子房或胚珠和花粉萌發(fā)產(chǎn)生的花粉管進(jìn)入胚珠從而完畢受精過(guò)程。細(xì)胞核移植：一種運(yùn)用顯微操作技術(shù)將一種動(dòng)物的細(xì)胞核移入同種或異種動(dòng)物的去核成熟卵細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。體外受精：指使哺乳動(dòng)物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完畢受精過(guò)程的技術(shù)。胚胎移植:指將受精卵或發(fā)育到一定階段的胚胎移植到與供體同時(shí)發(fā)情排卵但為配種的受體母畜輸卵管或子宮的技術(shù)。人工受精：指將采集的精子注入人發(fā)情解決的母體內(nèi)完畢受精過(guò)程。試管嬰兒：指將卵子與精子取出在體外受精，培養(yǎng)發(fā)育成初期胚胎，再植回母體子宮內(nèi)發(fā)育出生的嬰兒，也就是采用體外受驚聯(lián)合胚胎移植技術(shù)哺育的嬰兒。胚胎核移植：一種運(yùn)用顯微操作技術(shù)將一種動(dòng)物的細(xì)胞核移入同種或異種動(dòng)物的去核成熟卵細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。愈傷組織：脫分化后的細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞分裂，產(chǎn)生無(wú)組織結(jié)構(gòu)、無(wú)明顯極性的松散的細(xì)胞團(tuán)。胚狀體：由外植體或愈傷組織產(chǎn)生的與正常受精卵發(fā)育成的胚相類似的胚狀結(jié)構(gòu)。胞質(zhì)體：除去細(xì)胞核后由質(zhì)膜包裹的無(wú)核細(xì)胞。細(xì)胞融合：指使用人工的方法使2個(gè)或2個(gè)以上的細(xì)胞合并形成1個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。對(duì)稱融合：兩個(gè)完整的細(xì)胞間的融合。異核體：來(lái)自不同基因型的融合細(xì)胞。不對(duì)稱融合：用物理或化學(xué)方法使某親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活再與另一完整的細(xì)胞進(jìn)行融合。體細(xì)胞雜交：指將不同來(lái)源的體細(xì)胞融合并使之分化再生、形成新品種的技術(shù)?；ㄋ幒突ǚ叟囵B(yǎng)：指離體培養(yǎng)花藥和花粉，使小孢子改變?cè)械呐渥芋w發(fā)育途徑，轉(zhuǎn)向孢子體發(fā)育途徑，形成花粉胚或花粉愈傷組織，最后形成花粉植株，從中鑒定出單倍體植株并使之二倍化的技術(shù)。植物細(xì)胞培養(yǎng)：在離體條件下，將分離的植物細(xì)胞繼代培養(yǎng)增殖，獲得大量細(xì)胞群體的技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：模擬體內(nèi)生理環(huán)境使分離的動(dòng)物細(xì)胞在體外生存、增殖的技術(shù)。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)：將細(xì)胞接種于液體培養(yǎng)基中并保持良好的分散狀態(tài)的培養(yǎng)方式。細(xì)胞固定化培養(yǎng)：將游離的細(xì)胞包埋在支持物內(nèi)部或表面進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)。貼壁培養(yǎng)：指細(xì)胞貼附在一定的固相表面進(jìn)行的培養(yǎng)。原代培養(yǎng)：接種組織塊直接長(zhǎng)出單層細(xì)胞或?qū)⒔M織分散成單個(gè)細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)，在初次傳代前的培養(yǎng)成為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：指將原代培養(yǎng)的細(xì)胞繼續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)的過(guò)程。原代細(xì)胞：有分裂但不旺盛，且多呈二倍體核型的細(xì)胞。細(xì)胞系：由原代培養(yǎng)經(jīng)傳代培養(yǎng)純化，獲得的能在體外生存的細(xì)胞群體。細(xì)胞株：指從一個(gè)通過(guò)生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法，有單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。天然培養(yǎng)基：只要有血清、組織提取液、雞胚汁等，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，成分復(fù)雜來(lái)源有限。單克隆抗體：通過(guò)免疫哺乳類動(dòng)物單一的B淋巴細(xì)胞，可以分泌單一性抗體，這種具有特異性的同質(zhì)性的抗體為單抗。轉(zhuǎn)基因技術(shù)：通過(guò)人工方式將外源基因整合到生物體基因組內(nèi)，并使該轉(zhuǎn)基因生物能穩(wěn)定地將此基因遺傳給后代的技術(shù)。轉(zhuǎn)基因生物反映器：將外源基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞或動(dòng)植物，運(yùn)用細(xì)胞增殖或動(dòng)植物代謝制備外源基因的表達(dá)產(chǎn)物的技術(shù)。乳腺生物反映器：將外源基因置于乳腺特異性調(diào)節(jié)序列指下，使之在乳腺中表達(dá)，然后通過(guò)回收乳汁獲得有重要價(jià)值的生物活性蛋白的技術(shù)。轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物：通過(guò)核移植產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：指在基因組內(nèi)穩(wěn)定地整合外源基因，并且外源基因可以穩(wěn)定地遺傳給后代的基因工程動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因植物：指將外源基因轉(zhuǎn)入到植物的細(xì)胞或組織獲得了新的遺傳性狀的植物。轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)化方法：載體介導(dǎo)法、基因直接導(dǎo)入法、種質(zhì)系統(tǒng)法、病毒感染法。干細(xì)胞：一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）：從著床前胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或原始生殖細(xì)胞經(jīng)體外分化克制培養(yǎng)分離的一種全能性細(xì)胞，是可以分化成任何一種組織類型的細(xì)胞。成體干細(xì)胞：是成體組織內(nèi)具有進(jìn)一步分化潛能的細(xì)胞，是多能或單能干細(xì)胞。單能干細(xì)胞：只能分化為單一類型細(xì)胞的干細(xì)胞。如表皮的基質(zhì)細(xì)胞只能分化產(chǎn)生表皮細(xì)胞。多能干細(xì)胞：可以形成兩種或兩種以上類型細(xì)胞的干細(xì)胞。如骨髓造血干細(xì)胞可以分化成紅細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等多種類型細(xì)胞。全能干細(xì)胞：具有無(wú)限分化潛能的干細(xì)胞。如胚胎干細(xì)胞。細(xì)胞重組：是指從活細(xì)胞中分離出細(xì)胞器及其組分，在體外進(jìn)行重組裝配成為具有生物活性的細(xì)胞的一種技術(shù)。 胞質(zhì)雜種：將兩種來(lái)源不同的核外遺傳物質(zhì)（細(xì)胞器）與一個(gè)特定的核組合在一起得到的細(xì)胞是胞質(zhì)雜種。同核體：基因型相同的細(xì)胞融合成的細(xì)胞。異核體：來(lái)自不同基因型的融合細(xì)胞。胚乳培養(yǎng)：指處在細(xì)胞期的胚乳組織的離體培養(yǎng)。胚乳是獨(dú)特的組織，它的功能是為胚發(fā)育和種子萌發(fā)提供營(yíng)養(yǎng)。胚珠培養(yǎng)：指未受精或受精后的胚珠離體培養(yǎng)。未受精胚珠培養(yǎng)可為；離體受精提供雌配子體，也可誘發(fā)大孢子發(fā)育成單倍體植株。細(xì)胞工程發(fā)展史：1839年，施萊登和施旺發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞學(xué)。192023，Haberlabdt提出了細(xì)胞全能學(xué)說(shuō)。1958年，Stwovrd有胡蘿卜韌皮部組織誘導(dǎo)生成再生植株。192023，Harrison創(chuàng)建動(dòng)植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞核移植：一種運(yùn)用現(xiàn)為操作技術(shù)將一種動(dòng)物的細(xì)胞核移入同種或異種動(dòng)物的去核成熟卵細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。細(xì)胞核移植事件：1997年，英格蘭愛(ài)丁堡羅斯林研究所和PPL制藥公司運(yùn)用高度分化的綿羊乳腺上皮細(xì)胞，通過(guò)核移植克隆了一只雌性小綿羊——多莉植物原生質(zhì)體融合有關(guān)事件：1960年，科金應(yīng)用酶解法初次成功的從番茄幼苗根部制備出大量原生質(zhì)體。1972年，卡爾森用NaNO3做誘導(dǎo)劑將來(lái)自不同種的兩個(gè)煙草原生質(zhì)體進(jìn)行融合，得到一個(gè)體細(xì)胞雜種植株。體細(xì)胞雜交：將不同來(lái)源的體細(xì)胞融合并使之分化再生形成新品種的技術(shù)。體細(xì)胞雜交相關(guān)事件：1972年，卡爾森開(kāi)發(fā)出第一個(gè)體細(xì)胞雜種植物1978年，米歇爾斯初次將番茄與馬鈴薯細(xì)胞雜交成功。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：模擬體內(nèi)生理環(huán)境使分離的動(dòng)物細(xì)胞在體外生存，增值的一門(mén)技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)事件：192023，哈里森開(kāi)創(chuàng)了動(dòng)物組織培養(yǎng)的先河1923年，卡雷爾設(shè)計(jì)的卡氏培養(yǎng)瓶，用于培養(yǎng)基胚的心肌組織取得成功，機(jī)打推動(dòng)了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的建立。1951年，厄爾利等人開(kāi)發(fā)了動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。發(fā)展歷史：19世紀(jì)30年代，施萊登和施旺創(chuàng)建了細(xì)胞學(xué)說(shuō)。192023，哈波蘭德提出人工哺育植物。1934年，懷特配置出了植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)了維生素和植物激素在植物組織培養(yǎng)中的重要作用。1943年，懷特正式提出植物細(xì)胞具有全能性的學(xué)說(shuō)。1948年，催繳和斯庫(kù)格發(fā)現(xiàn)腺嘌呤和生長(zhǎng)素的比例是控制芽和根形成的重要條件之一。1953年，繆爾開(kāi)創(chuàng)了單細(xì)胞無(wú)性繁殖的工作。1956年，米勒發(fā)現(xiàn)了有高度活力的促進(jìn)細(xì)胞分裂和芽形成的物質(zhì)命名為激動(dòng)素。1958年，史都華德初次通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了細(xì)胞具有全能性。1960年，莫雷爾采用蘭屬的莖尖培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)了去病毒和快速繁殖兩個(gè)目的。轉(zhuǎn)基因技術(shù)：通過(guò)人工方式將外源g整合到生物體g組內(nèi)，并使該g生物能穩(wěn)定地將此g遺傳給后代的技術(shù)。緒論：細(xì)胞工程的地位，內(nèi)容和技術(shù)從某種意義上來(lái)說(shuō)，基因工程是現(xiàn)在生物技術(shù)的核心，而細(xì)胞工程則是它的基礎(chǔ)和公共平臺(tái)，基因工程與細(xì)胞工程的結(jié)合決定著生物技術(shù)的發(fā)展按照生物類型可以分為：動(dòng)物細(xì)胞工程，植物細(xì)胞工程，微生物細(xì)胞工程，按照操作對(duì)象可以分為細(xì)胞與植物培養(yǎng)，細(xì)胞融合，細(xì)胞核移植，染色體操作，轉(zhuǎn)基因生物等，2-5，常用的化學(xué)消毒方法有哪些？化學(xué)方法（75%的酒精，甲醛，環(huán)氧乙烷，氯已定，戊二醛，過(guò)氧乙酸，等）4-1體培養(yǎng)細(xì)胞有哪些類型？其生長(zhǎng)有什么區(qū)別？一；貼壁型細(xì)胞1成纖維型細(xì)胞：細(xì)胞貼壁后呈長(zhǎng)梭形，圓形細(xì)胞核位于中央，生長(zhǎng)呈放射狀，旋渦狀走向。細(xì)胞之間排列疏散，有較大的細(xì)胞間隙。2上皮型細(xì)胞：細(xì)胞貼壁后呈三角形及不規(guī)則扁平的多角形，中央有扁圓形核，細(xì)胞彼次緊密連接。3游走型細(xì)胞：細(xì)胞在支持物上分散生長(zhǎng)，一般不連接成片形成菌落，呈活躍的游走和變形運(yùn)動(dòng)，速度快且方向不固定，外形不規(guī)則且不斷變化。4多形型細(xì)胞：形態(tài)上不規(guī)則，一般分胞體和胞突兩部分，其中胞突為細(xì)長(zhǎng)型，類似絲狀偽足，胞體呈現(xiàn)多角形。二：懸浮型細(xì)胞：某些細(xì)胞體外培養(yǎng)不需要貼附支持物上而生存空間大，能大量繁殖細(xì)胞，容易進(jìn)行傳代培養(yǎng)。4-2細(xì)胞系的生長(zhǎng)過(guò)程涉及哪些？每一個(gè)生長(zhǎng)階段有什么特性？（1）原代培養(yǎng)期：也稱初代培養(yǎng)，是指從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一代的階段，一般連續(xù)1～4周。此期細(xì)胞移動(dòng)比較的活躍，可見(jiàn)細(xì)胞分裂，但是不旺盛。（2）傳代期：原代細(xì)胞生長(zhǎng)一定期間后，如是貼附型細(xì)胞就會(huì)連接成片而鋪滿瓶底，這時(shí)需要將原代細(xì)胞分開(kāi)至多個(gè)培養(yǎng)瓶中。細(xì)胞增殖旺盛，并維持二倍體核型。（3）衰退期：此期細(xì)胞仍生存，但是不增殖或者增殖很慢，最后衰退死亡。4-3每代細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線涉及那幾個(gè)重要時(shí)期？各期細(xì)胞有何特點(diǎn)？（1）潛伏期：此時(shí)細(xì)胞已存活具有代謝及運(yùn)動(dòng)功能，但是尚未增殖（2）指數(shù)生長(zhǎng)期：又稱對(duì)數(shù)期，此期細(xì)胞增殖旺盛，成倍增長(zhǎng)，活力最佳，合用于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。（3）停止期，又稱平臺(tái)期，此期細(xì)胞幾經(jīng)將其支持物表面沾滿，細(xì)胞活力減退，已不再進(jìn)行分裂增殖。4-4體外培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)滿足哪些營(yíng)養(yǎng)成分？（1）水（2）平衡鹽溶液（3）消化液（4）消化酶克制液（5）PH調(diào)整液：NaHCO3溶液，HEPES溶液，（6）抗生素液（7）谷氨酰胺補(bǔ)充液4-5什么是細(xì)胞系，細(xì)胞株？如何建立細(xì)胞系？在研究中細(xì)胞系和細(xì)胞株能發(fā)揮哪些作用？國(guó)際上有哪些著名的細(xì)胞庫(kù)？細(xì)胞系：是由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化，獲得的一種細(xì)胞為主的，能在體外長(zhǎng)期生存的不均一的細(xì)胞群體。細(xì)胞株：細(xì)胞系通過(guò)進(jìn)一步的克隆化，便得到由單一細(xì)胞組成的細(xì)胞株。初代培養(yǎng)，又稱為原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞，組織和器官進(jìn)行第一次的培養(yǎng)物。一旦進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系美國(guó)的美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫(kù)或細(xì)胞銀行（ATCC）和人遺傳突變細(xì)胞庫(kù)（HGMR），細(xì)胞衰老細(xì)胞庫(kù)（CAR）等。4-6細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的重要技術(shù)基礎(chǔ)，細(xì)胞培養(yǎng)涉及天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基重要來(lái)自動(dòng)物體液或從組織分離提純制備的，營(yíng)養(yǎng)成分高，但是成分復(fù)雜，來(lái)源有限，合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成的，細(xì)胞培養(yǎng)涉及原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，原代培養(yǎng)是指細(xì)胞或組織離開(kāi)有機(jī)體之后的初次培養(yǎng)，培養(yǎng)到細(xì)胞生長(zhǎng)到一定密度后就需要更新培養(yǎng)液，這就是細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)的方法通常有：懸滴培養(yǎng)法，培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法，和旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法。4-7動(dòng)物的細(xì)胞與組織培養(yǎng)是從動(dòng)物體內(nèi)取出組織或細(xì)胞，模擬有機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件，在體外建立無(wú)菌，適溫和一定營(yíng)養(yǎng)條件等，使之生長(zhǎng)和生存，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)，動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞工程的重要技術(shù)基礎(chǔ)，細(xì)胞融合，組織工程，胚胎工程，動(dòng)物克隆等都離不開(kāi)細(xì)胞的培養(yǎng)，4-8培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)有：貼附，接觸克制，密度依賴性等。接觸克制：是體外培養(yǎng)中某些貼附型細(xì)胞生長(zhǎng)特性之一，當(dāng)兩個(gè)細(xì)胞由于移動(dòng)而互相靠近發(fā)生接觸時(shí)，細(xì)胞不在移動(dòng)，在接觸區(qū)域的細(xì)胞膜皺褶樣活動(dòng)停止，從而使細(xì)胞停止運(yùn)動(dòng)，這種由于細(xì)胞接觸而克制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象稱為接觸克制。密度克制：當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大，培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多，細(xì)胞由于營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度克制，導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。4-9細(xì)胞培養(yǎng)常用的液體【1】水【2】平衡鹽溶液【3】消化液【4】消化酶克制液【5】PH調(diào)整液;常用的有碳酸氫鈉溶液和HEPES溶液【6】抗生素液【7】谷氨酰胺補(bǔ)充液4-10原代培養(yǎng)的過(guò)程：原代培養(yǎng)就是初次培養(yǎng)，是從供體獲取組織后的初次培養(yǎng)，過(guò)程一般涉及：取材——培養(yǎng)材料的制備——接種——加培養(yǎng)液——培養(yǎng)4-11傳代培養(yǎng)的過(guò)程：傳代培養(yǎng)分為第一次傳代和常規(guī)傳代兩種方法。第一次傳代，當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)到一定的階段時(shí)，可以進(jìn)行第一次傳代，通常取決于原代培養(yǎng)方法，培養(yǎng)物的細(xì)胞活性，細(xì)胞類型和特點(diǎn)，接種的細(xì)胞密度，培養(yǎng)條件。常規(guī)傳代：【1】貼壁細(xì)胞的消化傳代法，【2】懸浮細(xì)胞傳代5-1簡(jiǎn)述單克隆抗體的制備過(guò)程及其重要原理。動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、選擇雜交細(xì)胞、檢測(cè)抗體、雜交瘤細(xì)胞的克隆化、單克隆抗體的大量產(chǎn)生幾個(gè)環(huán)節(jié)。免疫小鼠注射特定的抗原蛋白培養(yǎng)骨髓溜細(xì)胞↓↓B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞↘↙融合↓雜交細(xì)胞↓篩選雜交細(xì)胞（抗體檢查）↓克隆能產(chǎn)生抗體的陽(yáng)性細(xì)胞↓在克隆陽(yáng)性細(xì)胞↙↘注射小鼠體外培養(yǎng)↓↓單克隆抗體單克隆抗體5-2HAT的選擇原理是什么？HAT培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞由次黃嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸合成DNA途徑而設(shè)計(jì)的。5-3細(xì)胞融合的定義細(xì)胞融合是又稱體細(xì)胞雜交或細(xì)胞雜交，是指在離體條件下用人工的方法將不同的生物或同種生物不同類型的單細(xì)胞通過(guò)無(wú)性方式融合成一個(gè)雜合細(xì)胞的技術(shù)。細(xì)胞融合技術(shù)的出現(xiàn)標(biāo)志著細(xì)胞工程的誕生。5-4細(xì)胞融合的核心過(guò)程？（P82）6-1胚胎工程的概念：胚胎工程是在胚胎移植的技術(shù)上發(fā)展起來(lái)的現(xiàn)代生物技術(shù)，重要涉及體外受精技術(shù)，胚胎移植技術(shù)，胚胎分割技術(shù)，胚胎冷凍保存技術(shù)和性別控制技術(shù)。6-2體外受精體外受精：是指哺乳動(dòng)物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完畢受精過(guò)程的技術(shù)。它的基本原理是人工模擬體內(nèi)環(huán)境，涉及溫度，濕度，營(yíng)養(yǎng)，氣體，滲透壓，PH等，使卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體中的初級(jí)卵母細(xì)胞成熟，同時(shí)使精子獲能，完畢受精。6-3體外受精技術(shù)卵母細(xì)胞的采集和成熟培養(yǎng)；【1】超數(shù)排卵，從活體卵巢中采集卵母細(xì)胞；從屠宰后母畜卵巢上采集卵母細(xì)胞；【2】卵母細(xì)胞的選擇，【3】卵母細(xì)胞的成熟培養(yǎng)精子的獲能解決；體外受精【1】常規(guī)的體外受精技術(shù)【2】與分離精子相結(jié)合的體外受精技術(shù)【3】顯微受精技術(shù)。受精卵的體外培養(yǎng)；胚胎移植。7-1干細(xì)胞的定義干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞，根據(jù)其發(fā)育階段，干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞，按照分化的潛能的大小，可以將干細(xì)胞分為全能干細(xì)胞，多能干細(xì)胞，定向干細(xì)胞。7-2成體干細(xì)胞的類型成體干細(xì)胞是分布在成體組織中尚未分化的，具有自我更新，并能構(gòu)建和補(bǔ)充相應(yīng)組織的各種類型細(xì)胞潛能的干細(xì)胞，分為：造血干細(xì)胞，神經(jīng)干細(xì)胞，胰島干細(xì)胞，皮膚干細(xì)胞。7-3組織工程組織工程是指應(yīng)用工程學(xué)和生命科學(xué)的原理和方法來(lái)研究正常或病理狀況下的哺乳動(dòng)物組織的結(jié)構(gòu)功能和生長(zhǎng)的機(jī)制，研究開(kāi)發(fā)可以修復(fù)，維持或改善損傷組織的人工生物替代物的一門(mén)學(xué)科。8-1簡(jiǎn)述細(xì)胞核移植的發(fā)展史，討論“多莉”羊產(chǎn)生的學(xué)術(shù)意義？1952年Briggs和King發(fā)明了細(xì)胞核移植技術(shù)，初次把兩棲淚囊體胚的細(xì)胞核移植到去核卵中，發(fā)育成為可攝食的蝌蚪1997年，英格蘭愛(ài)丁堡羅斯林研究所和PPL制藥公司運(yùn)用高度分化的綿羊乳腺上皮細(xì)胞，通過(guò)核移植克隆了一只雌性小綿羊——多莉它是人類初次用成年的體細(xì)胞——乳腺上皮細(xì)胞獲得的克隆后代，證明了哺乳動(dòng)物高度分化的細(xì)胞核在卵母細(xì)胞質(zhì)的支持下也可以恢復(fù)其全能性，為細(xì)胞的全能性增長(zhǎng)了新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。8-2簡(jiǎn)述細(xì)胞核移植的類型和重要的操作技術(shù)？【1】胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)【2】干細(xì)胞核移植技術(shù)【3】體細(xì)胞核移植技術(shù)操作技術(shù)：【1】核受體細(xì)胞的準(zhǔn)備【2】核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備【3】細(xì)胞核移植【4】激活【5】重組胚的體內(nèi)或體外培養(yǎng)【6】胚胎移植8-3核移植技術(shù)的應(yīng)用？【1】制備基因克隆動(dòng)物，進(jìn)行生物藥物的生產(chǎn)【2】哺育優(yōu)良畜種，擴(kuò)大良種種群【3】開(kāi)展異種動(dòng)物克隆，拯救瀕危動(dòng)物【4】與干細(xì)胞技術(shù)結(jié)合。開(kāi)展治療性克隆【5】運(yùn)用核移植技術(shù)，研究生物學(xué)的基本問(wèn)題。9-1什么是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物？指在基因組內(nèi)穩(wěn)定地整合外源基因，并且外源基因可以穩(wěn)定地遺傳給后代的基因工程動(dòng)物。9-2簡(jiǎn)述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備方法，分析比較幾種方法的原理與特點(diǎn)。方法原理特點(diǎn)基因顯微注射法通過(guò)顯微注射儀將外源基因直接注射到受精卵的雄原核內(nèi)使外源基因整合到DNA中，發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物外源分子的DNA大小不受限制，每次注射外源基因的長(zhǎng)度可達(dá)50KB。方法簡(jiǎn)樸，導(dǎo)入過(guò)程直觀逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法將目的基因重組到逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組上，人為的感染床前或者著床后的胚胎，可以高效哦的感染宿主細(xì)胞，感染率達(dá)成100%胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法外源DNA導(dǎo)入體外培養(yǎng)的ES細(xì)胞，經(jīng)篩選后獲得整合穩(wěn)定和表達(dá)好的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，然后將這些細(xì)胞注入受體類囊配腔中，精子載體導(dǎo)入法以精子作為外源DNA載體的轉(zhuǎn)基因方法YAC介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移細(xì)胞核移植技術(shù)9-6轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用，【1】改良動(dòng)物品種【2】生物制藥【3】建立診斷和治療人類疾病的動(dòng)物模型【4】生產(chǎn)可用于人體器官移植的動(dòng)物器官【5】基因治療【6】基因打靶9-7動(dòng)物乳腺生物反映器的制備【1】表達(dá)載體的構(gòu)建【2】目的基因的選擇【3】體外重組【4】基因轉(zhuǎn)導(dǎo)【5】胚胎移植【6】鑒定，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺生物反映器可以從分子水平和乳腺分泌物兩個(gè)方面鑒定10-1什么是染色體工程？動(dòng)物染色體工程重要涉及哪些方面？是按照人們的需要對(duì)生物的染色體進(jìn)行操作，添加，消減或者替換染色體，從而達(dá)成定向選育新品種或者發(fā)明人工新物種的目的，動(dòng)物染色體工程重要涉及染色體倍性改造，結(jié)構(gòu)改造及人工染色體的運(yùn)用。10-2動(dòng)物染色體加倍技術(shù)重要有哪些？【1】化學(xué)誘導(dǎo)法；運(yùn)用秋水仙素，細(xì)胞松弛素，麻醉劑N2O【2】物理方法；溫度休克法，水靜壓法【3】生物學(xué)方法；通過(guò)雜交技術(shù)11-1結(jié)合細(xì)胞工程的發(fā)展，全面分析和理解細(xì)胞學(xué)說(shuō)和植物全能性理論的意義？細(xì)胞工程發(fā)展史：1839年，施萊登和施旺發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞學(xué)。192023，Haberlabdt提出了細(xì)胞全能學(xué)說(shuō)。1958年，Stwovrd有胡蘿卜韌皮部組織誘導(dǎo)生成再生植株。192023，Harrison創(chuàng)建動(dòng)植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。植物細(xì)胞的全能性：植物體的一部分組織或者器官具有發(fā)育成完整植株的潛在能力，稱之為植物細(xì)胞的全能性。植物全能性理論是植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)。11-2愈傷組織有什么特點(diǎn)？它在植物細(xì)胞工程中有什么作用？脫分化后的細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞分裂，產(chǎn)生無(wú)組織結(jié)構(gòu)、無(wú)明顯極性的松散的細(xì)胞團(tuán)。愈傷組織的誘導(dǎo)是植物細(xì)胞體外再生的第一步。也是關(guān)鍵的一步。愈傷組織形成再生植株需要通過(guò)什么途徑？要通過(guò)器官的發(fā)生和胚狀體發(fā)生兩條途徑。器官的發(fā)生是由愈傷組織一方面在一種培養(yǎng)基生誘導(dǎo)形成的芽（或根），再在另一種培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成根（或芽）。胚狀體發(fā)生是由愈傷組織形成類似種子的胚的結(jié)構(gòu)，同時(shí)產(chǎn)生芽端和根端的結(jié)構(gòu)，稱為胚狀體。11-4分析影響植物組織脫分化和再分化的因素？?jī)?nèi)部因素：涉及植物的遺傳性狀和生理狀況，外部因素：涉及營(yíng)養(yǎng)條件（如植物激素，無(wú)機(jī)鹽，有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分）和環(huán)境條件（如培養(yǎng)基的PH，滲透壓，溫度，濕度，光照）11-5植物組織培養(yǎng)基的組成成分有哪幾類？在離體培養(yǎng)中的功能是什么？【1】無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分。如鎂是葉綠素分子的一部分，鈣是細(xì)胞壁的組成之一，氮是各種氨基酸，維生素，蛋白質(zhì)和核酸的重要組成部分?！?】有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分。碳源，含氮物質(zhì)【3】植物激素類，生長(zhǎng)素類，細(xì)胞分裂素類，赤霉素類【4】瓊脂它是培養(yǎng)基中的一種必需成分【5】PH值在滅菌之前培養(yǎng)基的PH值一般都調(diào)節(jié)到5.0～6.011-6分析植物離體培養(yǎng)的環(huán)境條件及對(duì)培養(yǎng)的影響？環(huán)境的影響重要有：【1】光的影響：光對(duì)培養(yǎng)基所產(chǎn)生的影響是不同的，在煙草細(xì)胞培養(yǎng)物中泛醌的合成不受光的影響，【2】溫度的影響：不同植物細(xì)胞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和次生產(chǎn)物的合成對(duì)溫度有一定的規(guī)定?！?】振蕩的頻率：搖床的振蕩頻率對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和代謝物的積累都會(huì)產(chǎn)生影響。11-13植物幾種大規(guī)模培養(yǎng)系統(tǒng)各有什么特點(diǎn)？培養(yǎng)體系營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)較慢，易成團(tuán)產(chǎn)物含量較低，遺傳不穩(wěn)定，培養(yǎng)后期粘性大固定化培養(yǎng)載體固定化：生長(zhǎng)慢，產(chǎn)物含量較高，遺傳穩(wěn)定，可以連續(xù)培養(yǎng)，自固定化：生長(zhǎng)較快，細(xì)胞聚集，成大顆粒，產(chǎn)量高。培養(yǎng)夜澄清植物器官培養(yǎng)毛狀根生長(zhǎng)迅速，分支多，不需要外源激素，向地型弱，產(chǎn)量高，遺傳穩(wěn)定芽生長(zhǎng)較慢，遺傳較穩(wěn)定，產(chǎn)物含量高，需要光照，體細(xì)胞胚生長(zhǎng)慢，遺傳穩(wěn)定，次級(jí)代謝產(chǎn)物含量較高。冠癭組織生長(zhǎng)快，不需要外源激素，產(chǎn)量高，遺傳穩(wěn)定，懸浮培養(yǎng)為顆粒狀12-1什么是植物快繁技術(shù)？總結(jié)其重要的操作環(huán)節(jié)。運(yùn)用組織培養(yǎng)技術(shù)，將優(yōu)良植株的莖尖，腋芽，葉片，鱗片等器官，組織和細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，在短時(shí)間內(nèi)獲得大量遺傳性一致的植株的技術(shù)稱為植物的快繁技術(shù)。其重要的操作流程涉及無(wú)菌母株的制備，不定芽增殖，完整植株的形成，再生植株的鍛煉和馴化及再生植株的鑒定等環(huán)節(jié)。12-2植物脫毒方法有哪些？有微莖尖培養(yǎng)法，株心組織培養(yǎng)法，熱解決法13-1通過(guò)離體培養(yǎng)獲得單倍體的途徑有哪些？通過(guò)離體培養(yǎng)花藥和花粉，是離體培養(yǎng)獲得單倍體的重要途徑13-2花藥培養(yǎng)中再生植株的形成途徑與再生植株倍性有何關(guān)系？花藥再生植株有兩種方式：【1】花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再分化形成植株，【2】胚狀體再生，即花藥中的花粉通過(guò)形成胚狀體，發(fā)育成單倍體植株，在花藥培養(yǎng)中，花藥中的花粉最容易形成胚狀體或愈傷組織，但是，有時(shí)花藥的體細(xì)胞也可以分裂繁殖，因此，體外花藥培養(yǎng)除了得到小孢子來(lái)源的單倍體植物，還會(huì)的到花藥體細(xì)胞來(lái)源的二倍體植株。13-3花粉培養(yǎng)過(guò)程花粉培養(yǎng)是指把花粉從花藥中分離出來(lái)，以花粉粒作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。13-4花藥與花粉培養(yǎng)的方法13-4-1材料如何選擇【1】材料的遺傳差異【2】母本生理狀態(tài)的影響【3】花粉發(fā)育時(shí)期13-4-2材料的預(yù)解決【1】低溫解決【2】高溫解決【3】離心解決【4】激光照射【5】乙烯利解決【6】甘露醇解決13-4-3培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基，【1】碳源【2】激素【3】附加成分13-4-4，接種與再生植株的培養(yǎng)【1】材料的滅菌解決【2】培養(yǎng)條件【3】花粉的培養(yǎng)【4】花粉植株的鑒定【5】單倍體植物的染色體加倍14-1植物胚乳有哪些類型？植物胚乳可以分為兩大類：被子植物胚乳和騾子植物胚乳。胚乳發(fā)育初期是否形成細(xì)胞壁可分為：【1】核型胚乳【2】細(xì)胞型胚乳【3】沼生目型胚乳植物胚胎培養(yǎng)的定義和發(fā)展植物胚胎培養(yǎng)涉及：胚培養(yǎng)，胚珠培養(yǎng)，子房培養(yǎng)和胚乳培養(yǎng)。胚培養(yǎng)涉及成熟胚培養(yǎng)和幼胚培養(yǎng)。192023Hanning培養(yǎng)羅卜和辣根菜的胚，Laibach在1925年～19289年培養(yǎng)亞麻種間雜種幼胚成功的獲得了種間雜種，初次證實(shí)了這種方法在實(shí)際應(yīng)用中的價(jià)值胚培養(yǎng)的意義？1克服了遠(yuǎn)源雜交不孕和幼胚敗育2成熟胚培養(yǎng)快速繁殖3胚培養(yǎng)作為轉(zhuǎn)基因受體材料15-1愈傷組織與體細(xì)胞胚胎發(fā)生愈傷組織本來(lái)是指植物受損時(shí)在愈合傷口處長(zhǎng)出的一團(tuán)瘤狀突起，突起內(nèi)的細(xì)胞已發(fā)生脫分化的變化，培養(yǎng)中的愈傷組織是指從外植體的內(nèi)部或切口表面形成的一團(tuán)沒(méi)有分化的均勻一致，無(wú)序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞團(tuán)。這種組織具有再分化能力。愈傷組織的形成大體要通過(guò)起動(dòng)期，分裂期，形成期三個(gè)階段。愈傷組織器官的發(fā)生：【1】不定芽方式：是指愈傷組織培養(yǎng)物，通過(guò)形成不定芽的再生植株，【2】胚狀體的形成，是指培養(yǎng)的組織或細(xì)胞中直接或間接形成胚胎的生長(zhǎng)方式。15-2人工種子就是將植物離體培養(yǎng)產(chǎn)生的體細(xì)胞胚包埋在具有營(yíng)養(yǎng)成分和保護(hù)功能的物質(zhì)中而制成的，在條件適宜時(shí)他同普通種子同樣可以發(fā)芽成苗。人工種子涉及：體細(xì)胞胚，人工胚乳，人工中皮。15-3人工種子的研究現(xiàn)狀【1】人工種子結(jié)構(gòu)完整，體積小，便于儲(chǔ)藏和運(yùn)送?！?】供制作人工種子的體細(xì)胞胚數(shù)量多，