病原微生物樣本采集保存運(yùn)輸張凡非課件

1病原微生物樣本

采集保存包裝運(yùn)輸山西省疾病預(yù)防控制中心張凡非2實(shí)驗(yàn)室的作用3實(shí)驗(yàn)室的作用傳染病的診斷需要綜合實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果。傳染病的診斷應(yīng)包括流行病資料、臨床病史、體格檢查以及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果等。病原體的檢出是確診傳染病的主要依據(jù)。應(yīng)盡一切可能別離到病原體，特別是細(xì)菌、真菌等。病毒感染因病原不易被檢出，培養(yǎng)需較長(zhǎng)時(shí)間，一般實(shí)驗(yàn)室難以開展病毒別離工作，因此在大多數(shù)情況下依賴免疫學(xué)試驗(yàn)而確立診斷。此外，還有分子生物學(xué)檢測(cè)、影像檢查、活體組織檢查等。4實(shí)驗(yàn)室的作用5樣本的重要性

科學(xué)合理地采集、保存、包裝和運(yùn)輸樣本，直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。6樣本采集決策樣本采集的質(zhì)量是獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的重要因素。樣本采集的質(zhì)量主要取決于樣品采集的決策。7樣本采集決策對(duì)樣本采集決策者的要求1.有廣博的知識(shí)，最好是懂臨床、流行病、實(shí)驗(yàn)室2.對(duì)采樣質(zhì)量能夠進(jìn)行正確評(píng)價(jià)3.對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行評(píng)估4.微生物標(biāo)本的特殊性8樣本采集決策采集什么樣本，樣本送檢的目的是什么？在什么時(shí)間什么條件下采集？如何采集〔方法和器材〕？如何保存與運(yùn)送？在臨床診斷和流行病學(xué)分析的根底上檢驗(yàn)工程明確，不能包羅萬(wàn)象。9樣本采集要求采樣人采樣時(shí)間樣本采集器材樣本標(biāo)識(shí)送檢單保存運(yùn)輸條件防護(hù)用品10樣本采集要求11采樣時(shí)間：一般在疑心細(xì)菌感染時(shí)應(yīng)盡量在急性發(fā)病期和使用抗生素之前采集標(biāo)本，進(jìn)行細(xì)菌的別離培養(yǎng)，否那么這種標(biāo)本在別離培養(yǎng)時(shí)要加藥物拮抗劑。樣本采集要求12采樣時(shí)間：作病毒別離和病毒抗原檢測(cè)的標(biāo)本，應(yīng)在發(fā)病初期和急性期采樣，因?yàn)榇藭r(shí)病毒在體內(nèi)大量繁殖，檢出率高，病毒分類標(biāo)本最好在發(fā)病1～3天內(nèi)采取。樣本采集要求13抗體檢測(cè)樣本采樣時(shí)間：①血清：用于檢測(cè)IgM的血清一般采于發(fā)病1個(gè)月內(nèi)；用于檢測(cè)IgG的血液應(yīng)收集兩次，第一次于發(fā)病初期〔1～3天〕，越早越好，第二次血樣一般在恢復(fù)期〔第一次采血后3～4周〕。雙份血清同時(shí)檢測(cè)，如抗體滴度有4倍以上升高才有意義。②腦脊液：一般于出現(xiàn)神經(jīng)病癥時(shí)采集，查IgM只需一份腦脊液，而查IgG那么需收集兩次，時(shí)間間隔同前所述。樣本采集要求14樣本采集要求樣本采集器材：樣本容器、記號(hào)筆、送檢單、酒精燈、剪刀、酒精棉等采集標(biāo)本應(yīng)使用無(wú)菌容器，一個(gè)標(biāo)本一個(gè)容器。對(duì)容器根本要求是選耐用材料制成，容器包裝好后可防滲漏。能承受空中地面運(yùn)送過(guò)程中可能發(fā)生的溫度和壓力變化。15樣本采集要求16樣本采集要求17樣本采集要求保存運(yùn)輸條件用于別離細(xì)菌的標(biāo)本，應(yīng)選擇適宜的培養(yǎng)基和推薦保存溫度，這取決于運(yùn)送時(shí)間的長(zhǎng)短及不同病原微生物對(duì)枯燥、溫度、營(yíng)養(yǎng)、pH值的耐受能力。用于別離培養(yǎng)細(xì)菌的標(biāo)本應(yīng)在運(yùn)送培養(yǎng)基中運(yùn)送并保存于適宜的溫度。能確保目標(biāo)細(xì)菌的存活并抑制其他微生物的過(guò)度生長(zhǎng)。18樣本采集要求保存運(yùn)輸條件用于別離細(xì)菌的標(biāo)本，一般保存在4℃～8℃，但一些對(duì)低溫敏感的細(xì)菌除外，如志賀氏菌、腦膜炎雙球菌、肺炎球菌?？傊畱?yīng)盡快別離。19樣本采集要求保存運(yùn)輸條件用于別離病毒的標(biāo)本，一般應(yīng)放在保溫容器〔0?C～4?C〕里，最好放置不超過(guò)2天，如不能立即別離病毒時(shí)，最好在－70?C或-70℃以下凍存。不應(yīng)保存在-20℃。標(biāo)本分裝保存，盡量防止反復(fù)凍融。如疑心是寄生蟲，所取糞便中參加10%福爾馬林和PVA防腐劑〔充分混合〕。20樣本采集要求保存運(yùn)輸條件用于檢測(cè)抗原或抗體的標(biāo)本，可在4?C～8?C保存24～48h，在－20?C保存時(shí)間更長(zhǎng)。檢測(cè)抗體的血清，可在4?C保存約一個(gè)星期，最長(zhǎng)10天；超過(guò)一周必須在-20?C下冷凍。21樣本采集要求防護(hù)用品采樣中防止標(biāo)本污染和人員感染和都是至關(guān)重要的，應(yīng)采用防護(hù)措施，注意平安操作。采樣應(yīng)戴手套；根據(jù)生物危害程度，穿工作衣/防護(hù)服、使用口罩/N95口罩、護(hù)目鏡。使用過(guò)的防護(hù)用品裝入廢棄物專用袋內(nèi)。22糞便的采集方法

一份約450g的冷凍糞便樣本送至實(shí)驗(yàn)室。樣本量是否滿足檢驗(yàn)需求？適宜嗎？實(shí)驗(yàn)室如何保存處理該樣本？該怎么辦？23糞便的采集方法

自然排出糞便取樣：選擇有粘液、膿血部位。成形5g，稀便3~5ml。放入密封無(wú)菌容器送檢。腸拭子：應(yīng)用專用器材，如能立即接種時(shí)可用棉拭子插入肛門3~5cm，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)拭子，取出糞便。不能立即接種時(shí)，要放入保存液內(nèi)送檢。24尿液的采集方法

留中段尿法：先消毒外陰，再消毒尿道口，然后用生理鹽水再?zèng)_洗，以免尿內(nèi)混入消毒液，用無(wú)菌容器取中段尿10~20ml，根據(jù)送檢的工程處理，可離心后取沉淀物培養(yǎng)，也可以不離心直接計(jì)數(shù)無(wú)菌導(dǎo)尿25血液培養(yǎng)標(biāo)本的采集方法

無(wú)菌操作采集靜脈血液，將血液直接注入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，最好是用細(xì)菌培養(yǎng)液，有不同的培養(yǎng)瓶可供選擇，如厭氧、微需氧、需氧等。如無(wú)密封培養(yǎng)瓶，可選用無(wú)菌三角燒瓶，嚴(yán)格無(wú)菌操作，以免污染無(wú)菌帶有抗凝劑的小瓶，最好帶羅帽，每項(xiàng)量最少5ml，根據(jù)培養(yǎng)工程確定采集量。26腦脊液標(biāo)本的采集方法由有經(jīng)驗(yàn)醫(yī)生在無(wú)菌條件下腰錐穿剌，最好是床邊接種采樣量3~5ml，也可取離心沉淀物培養(yǎng)27咽拭子標(biāo)本的采集方法根據(jù)不同病種，采集相應(yīng)部位的分泌物。猩紅熱病人，采集咽部紅腫、化膿性分泌物。白喉病人：在扁桃體兩側(cè)取偽膜，采集偽膜往往需用無(wú)菌鑷子夾取。流腦病人：在鼻咽腔流感/人禽流感：雙側(cè)扁桃體及咽后壁。麻疹：鼻咽部和咽喉部

28皮膚創(chuàng)傷標(biāo)本的采集方法多見于炭疽、結(jié)核病，腺鼠疫〔淋巴結(jié)破損〕。方法：先用鹽水拭子擦外表，如沒(méi)破，可用無(wú)菌注射器抽取液體。如破潰，擦洗后，可取深部膿血液。注意：采集后同時(shí)涂片染色鏡檢。29樣本的包裝與運(yùn)輸30依據(jù)31分類?人間傳染的病原微生物名錄?中規(guī)定的第一類、第二類病原微生物菌〔毒〕種或樣本。?人間傳染的病原微生物名錄?中第三類病原微生物運(yùn)輸包裝分類為A類的病原微生物菌〔毒〕種或樣本。疑似高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本。32批準(zhǔn)運(yùn)輸?shù)谌龡l規(guī)定的菌〔毒〕種或樣本〔以下統(tǒng)稱高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本〕，應(yīng)當(dāng)經(jīng)省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)。未經(jīng)批準(zhǔn)，不得運(yùn)輸。33申請(qǐng)單位從事疾病預(yù)防控制、醫(yī)療、教學(xué)、科研、菌〔毒〕種保藏以及生物制品生產(chǎn)的單位，因工作需要，可以申請(qǐng)運(yùn)輸高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本。34運(yùn)輸申請(qǐng)申請(qǐng)單位在運(yùn)輸前應(yīng)當(dāng)向省級(jí)衛(wèi)生行政部門提出申請(qǐng)，并提交以下申請(qǐng)材料〔原件一份，復(fù)印件三份〕：35申請(qǐng)材料可感染人類的高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本運(yùn)輸申請(qǐng)表；法人資格證明材料〔復(fù)印件〕；接收高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本的單位(以下簡(jiǎn)稱接收單位)同意接收的證明文件；<規(guī)定>第七條第〔二〕、〔三〕項(xiàng)所要求的證明文件〔復(fù)印件〕；容器或包裝材料的批準(zhǔn)文號(hào)、合格證書〔復(fù)印件〕或者高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本運(yùn)輸容器或包裝材料承諾書；其它有關(guān)資料。36接收單位應(yīng)具備的條件具有法人資格；具備從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)資格的實(shí)驗(yàn)室；取得有關(guān)政府主管部門核發(fā)的從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)、菌〔毒〕種或樣本保藏、生物制品生產(chǎn)等的批準(zhǔn)文件。37屢次運(yùn)輸申請(qǐng)?jiān)诠潭ǖ纳暾?qǐng)單位和接收單位之間屢次運(yùn)輸相同品種高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本的，可以申請(qǐng)屢次運(yùn)輸。屢次運(yùn)輸?shù)挠行跒?個(gè)月；期滿后需要繼續(xù)運(yùn)輸?shù)?，?yīng)當(dāng)重新提出申請(qǐng)。38申請(qǐng)?jiān)谑?、自治區(qū)、直轄市行政區(qū)域內(nèi)運(yùn)輸申請(qǐng)?jiān)谑?、自治區(qū)、直轄市行政區(qū)域內(nèi)運(yùn)輸?shù)?，由省、自治區(qū)、直轄市衛(wèi)生行政部門審批。省級(jí)衛(wèi)生行政部門應(yīng)當(dāng)在5個(gè)工作日內(nèi)做出是否批準(zhǔn)的決定；符合法定條件的，頒發(fā)?可感染人類的高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本準(zhǔn)運(yùn)證書?;不符合法定條件的，應(yīng)當(dāng)出具不予批準(zhǔn)的決定并說(shuō)明理由。39申請(qǐng)跨省、自治區(qū)、直轄市運(yùn)輸申請(qǐng)跨省、自治區(qū)、直轄市運(yùn)輸高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本的，應(yīng)當(dāng)將申請(qǐng)材料提交運(yùn)輸出發(fā)地省級(jí)衛(wèi)生行政部門進(jìn)行初審；對(duì)符合要求的，省級(jí)衛(wèi)生行政部門應(yīng)當(dāng)在3個(gè)工作日內(nèi)出具初審意見，并將初審意見和申報(bào)材料上報(bào)衛(wèi)生部審批。40申請(qǐng)跨省、自治區(qū)、直轄市運(yùn)輸衛(wèi)生部應(yīng)當(dāng)自收到申報(bào)材料后3個(gè)工作日內(nèi)做出是否批準(zhǔn)的決定。符合法定條件的，頒發(fā)?可感染人類的高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本準(zhǔn)運(yùn)證書?；不符合法定條件的，應(yīng)當(dāng)出具不予批準(zhǔn)的決定并說(shuō)明理由。41突發(fā)事件運(yùn)輸申請(qǐng)對(duì)于為控制傳染病爆發(fā)、流行或者突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處理的運(yùn)輸申請(qǐng)，省級(jí)衛(wèi)生行政部門與衛(wèi)生部之間可以通過(guò)的方式進(jìn)行上報(bào)和審批；需要提交有關(guān)材料原件的，應(yīng)當(dāng)于事后盡快補(bǔ)齊。42向中國(guó)疾病預(yù)防控制中心運(yùn)送申請(qǐng)根據(jù)疾病控制工作的需要，應(yīng)當(dāng)向中國(guó)疾病預(yù)防控制中心運(yùn)送高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本的，向中國(guó)疾病預(yù)防控制中心直接提出申請(qǐng)，由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心審批；符合法定條件的，頒發(fā)?可感染人類的高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本準(zhǔn)運(yùn)證書?；不符合法定條件的，應(yīng)當(dāng)出具不予批準(zhǔn)的決定并說(shuō)明理由;中國(guó)疾病預(yù)防控制中心應(yīng)當(dāng)將審批情況于3日內(nèi)報(bào)衛(wèi)生部備案。43包裝要求44專人護(hù)送運(yùn)輸高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本，應(yīng)當(dāng)有專人護(hù)送，護(hù)送人員不得少于兩人；申請(qǐng)單位應(yīng)當(dāng)對(duì)護(hù)送人員進(jìn)行相關(guān)的生物平安知識(shí)培訓(xùn)；在護(hù)送過(guò)程中采取相應(yīng)的防護(hù)措施。45運(yùn)輸實(shí)施陸路運(yùn)輸：有關(guān)單位或者個(gè)人不得通過(guò)公共電〔汽〕車和城市鐵路運(yùn)輸病原微生物菌〔毒〕種或者樣本〔條例第十二條〕。水路運(yùn)輸民用航空運(yùn)輸：申請(qǐng)單位應(yīng)當(dāng)憑省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門或中國(guó)疾病預(yù)防控制中心核發(fā)的?可感染人類的高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本準(zhǔn)運(yùn)證書?到民航等相關(guān)部門辦理手續(xù)。承運(yùn)單位憑批準(zhǔn)文件運(yùn)輸！46運(yùn)輸實(shí)施47生物平安本卷須知高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本在運(yùn)輸之前的包裝以及送達(dá)后包裝的開啟，應(yīng)當(dāng)在符合生物平安規(guī)定的場(chǎng)所中進(jìn)行。申請(qǐng)單位在運(yùn)輸前應(yīng)當(dāng)仔細(xì)檢查容器和包裝是否符合平安要求，所有容器和包裝的標(biāo)簽以及標(biāo)本登記表是否完整無(wú)誤，容器放置方向是否正確。48運(yùn)輸后續(xù)工作?運(yùn)輸管理規(guī)定?第十六條在運(yùn)輸結(jié)束后，申請(qǐng)單位應(yīng)當(dāng)將運(yùn)輸情況向原批準(zhǔn)部門書面報(bào)告。49處分對(duì)于違反本規(guī)定的行為，依照?病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物平安管理?xiàng)l例?第六十二條、六十七條的有關(guān)規(guī)定予以處分。50出入境管理高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本的出入境，按照衛(wèi)生部和國(guó)家質(zhì)檢總局?關(guān)于加強(qiáng)醫(yī)用特殊物品出入境管理衛(wèi)生檢疫的通知?進(jìn)行管理。51第十九條本規(guī)定自2006年2月1日起施行。52樣品的包裝感染性物質(zhì)53樣品的包裝指在運(yùn)輸過(guò)程中與之接觸能對(duì)健康人或動(dòng)物造成永久性殘疾或致命疾病的感染性物質(zhì)。此處“接觸〞系指感染性物質(zhì)離開保護(hù)性包裝與人或動(dòng)物的身體接觸或經(jīng)呼吸道吸入的情況。A類感染性物質(zhì)使人染病或使人和動(dòng)物都染病者聯(lián)合國(guó)編號(hào)為UN2814，其運(yùn)輸專用名稱為危害人的感染性物質(zhì)；僅使動(dòng)物染病者聯(lián)合國(guó)編號(hào)為UN2900，其運(yùn)輸專用名稱為僅危害動(dòng)物的感染性物質(zhì)。A類感染性物質(zhì)54樣品的包裝不符合列入A類標(biāo)準(zhǔn)的感染性物質(zhì)。其聯(lián)合國(guó)編號(hào)為UN3373。運(yùn)輸專用名稱為生命物質(zhì)B類。

B類感染性物質(zhì)55實(shí)驗(yàn)室分級(jí)-危害程度分類-感染性物質(zhì)包裝分類實(shí)驗(yàn)室分級(jí)處理對(duì)象危險(xiǎn)等級(jí)危害程度包裝分類BSL-1ABSL-1對(duì)人體和環(huán)境危害較低，不會(huì)引發(fā)健康成人疾病Ⅰ級(jí)四類A、BBSL-2ABSL-2對(duì)人體和環(huán)境有中等危害或具有潛在危險(xiǎn)的致病因子Ⅱ級(jí)三類BSL-3ABSL-3主要通過(guò)呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致命疾病的致病因子。通常有預(yù)防治療措施Ⅲ級(jí)二類BSL-4ABSL-4對(duì)人體有高度危險(xiǎn)性，通過(guò)氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明的微生物。尚無(wú)預(yù)防治療措施Ⅳ級(jí)一類56樣品的包裝57樣品的包裝這一包裝系統(tǒng)可以應(yīng)用于所有的感染性物質(zhì)，由以下三層包裝組成：

1.主容器：初級(jí)容器防水、防滲漏，內(nèi)裝標(biāo)本。其外包裹有的吸收材料。

樣品必須保存于大小適宜、帶膠墊的外螺旋蓋的塑料管中，擰緊蓋、封好管口〔如用封口膜或防水的塑料膠帶袋〕管外要用油性筆注明標(biāo)本的編號(hào)、種類、姓名及采樣日期、采集量。58樣品的包裝2.次級(jí)包裝：次級(jí)包裝為第二層持久的、防水、防滲漏的包裝，它封閉和保護(hù)初級(jí)容器。多個(gè)包有緩沖材料的初級(jí)容器可放于同一個(gè)次級(jí)包裝中，但是，這要求同時(shí)也放入足夠的吸收材料以確保一旦發(fā)生泄漏后所有液體都可被吸收。標(biāo)本有關(guān)信息填寫“×××送檢單〞，用一塑料袋密封，并粘在塑料容器外面。59樣品的包裝3.外層包裝：次級(jí)包裝包裹有適宜的緩沖材料后，即可被裝入外層運(yùn)輸包裝。外層運(yùn)輸包裝保護(hù)其內(nèi)容物免受外界影響，如運(yùn)輸過(guò)程中的物理?yè)p壞。樣品的容器要使用能夠承受不少于95Kpa壓力的高質(zhì)量的防水包裝材料并且密封，以防止運(yùn)輸發(fā)生內(nèi)容物的外泄。60樣品的包裝感染性物質(zhì)外包裝件上必須做出如下的使用標(biāo)記：1〕托運(yùn)人名稱地址和收貨人名稱地址。2〕運(yùn)輸專用名稱：A類感染性物質(zhì)為：感染性物質(zhì)；B類感染性物質(zhì)為：生命物質(zhì)。3〕聯(lián)合國(guó)編號(hào)〔UN編號(hào)〕4〕運(yùn)送A、B類感染性物質(zhì)的凈含量：A類感染性物質(zhì)要標(biāo)出；B類感染性物質(zhì)可以不標(biāo)出。5〕標(biāo)記負(fù)責(zé)人姓名和聯(lián)系。6〕如使用干冰作制冷劑，應(yīng)標(biāo)出DryIce(干冰)、UN1845以及干冰的凈重。7〕生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)。61樣品的包裝冷凍劑的使用:

1)在使用冰、干冰或其他冷凍劑進(jìn)行冷藏運(yùn)輸時(shí)，冷凍劑必須放在輔助容器和外包裝之間，內(nèi)部要有支撐物固定，當(dāng)冰或干冰消耗以后，仍可以把輔助容器固定在原位置上。如使用冰，外包裝必須不透水。如果使用干冰，外包裝必須能夠排放二氧化碳?xì)怏w，防止壓力增加造成容器破裂。在使用冷凍劑的溫度下，主容器和輔助容器必須能保持良好性能，在冷凍劑消耗完以后，仍能承受運(yùn)輸中的溫度和壓力。62樣品的包裝冷凍劑的使用:

2)當(dāng)使用液氮對(duì)樣品進(jìn)行冷藏時(shí)，必須保證主容器和輔助容器能適應(yīng)極低的溫度。此外，還必須符合其他有關(guān)液氮的運(yùn)輸要求。

3)主容器和輔助容器須在使用制冷劑的溫度下，以及在失去制冷后可能出現(xiàn)的溫度和壓力下保持完好無(wú)損。主容器和輔助容器必須在無(wú)泄漏的情況下能夠承受95kPa的內(nèi)壓，并能保證在－40℃到＋55℃的溫度范圍內(nèi)不被損壞。A類感染性物質(zhì)的包裝與標(biāo)簽63B類感染性物質(zhì)的包裝與標(biāo)簽64A類、B類感染性物質(zhì)運(yùn)送外包裝的區(qū)別主容器外包裝放置方向標(biāo)識(shí)高致病性病原微生物危險(xiǎn)標(biāo)簽高致病性病原微生物運(yùn)輸?shù)怯洷?9收樣單位：

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