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文檔簡介

肝糖原的提取及鑒定

實驗目的了解肝糖原的性質(zhì)并掌握其提取方法。熟悉肝糖原的鑒定方法。實驗原理（一）肝糖原的提取

糖原儲存于細胞內(nèi)，采用研磨勻漿等方法可使細胞破碎。加入三氯醋酸能使蛋白質(zhì)變性，破壞肝組織中的酶且沉淀蛋白質(zhì)，而糖原仍穩(wěn)定地保存于上清液中。糖原不溶于乙醇，故用乙醇可將糖原沉淀。（二）肝糖原的鑒定

糖原的基本結(jié)構(gòu)糖原與碘作用呈紅色。糖原水解產(chǎn)物與本尼迪克特試劑在沸水浴下生成磚紅色沉淀。（一）肝糖原的提取

1.取新鮮動物肝臟(一只動物肝分為4份）至研缽中，加入3mL10%的三氯醋酸溶液，充分研磨至糜狀（戴手套操作），再加入3mL10%的三氯醋酸和3mL蒸餾水繼續(xù)研磨片刻，使成均勻糜漿（均分為3組）。2.取3ml轉(zhuǎn)入離心管中，2000r/min離心5min。3.取上清液于另一離心管中，加入等體積的95%乙醇，混勻后靜置片刻，使糖原呈絮狀析出，再2500r/min離心10min。棄去上清液，將離心管倒置于濾紙上。

操作步驟（二）肝糖原鑒定

肝糖原沉淀中加入1mL蒸餾水，用細玻棒攪拌至溶解，得糖原溶液。1.取小試管2支，一支加入糖原溶液500μl，另一支加入蒸餾水500μl，然后兩管再各加入碘液2滴，混勻。觀察管中顏色變化，并解釋現(xiàn)象。2.在剩余糖原溶液內(nèi)加濃鹽酸3滴，沸水浴中加熱10min，取出冷卻，加入20%的NaOH溶液1ml至堿性。加入班氏試劑1mL，再置沸水浴中加熱2-3min取出。觀察管中沉淀的生成，并解釋現(xiàn)象。

新鮮肝臟須迅速以三氯醋酸處理。

肝臟研磨應充分。

離心時，離心管平衡后對稱放入離心機。注意事項離心機的使用1、離心管必須先平衡后對稱放入離心機；避免液體灑在離心機上；記住位置編號；2、開機前，檢查有無空套管；開機后逐級加速；如有異常，立即切斷電源，

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