萬代蘭雜交授粉及無菌播種技術(shù)規(guī)程

1萬代蘭雜交授粉及無菌播種技術(shù)規(guī)程本文件確立了萬代蘭雜交授粉及無菌播種的程序，規(guī)定了父本選擇、花粉采集保存、母本選擇、雜交授粉、果莢采收及保存和無菌播種等階段的操作指示和方法。本文件適用于萬代蘭的雜交授粉及無菌播種。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T8321(所有部分)農(nóng)藥合理使用準則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1人工授粉artificialpollination利用人工方法把花粉傳送到柱頭上，以實現(xiàn)結(jié)實，達到自交或雜交的技術(shù)措施。3.2花粉塊pollennugget許多花粉結(jié)合在一起形成塊狀，蘭科植物的花粉多以花粉塊的形式存在。3.3柱頭腔stigmacavity蘭科植物合蕊柱上凹陷呈腔狀的雌蕊。3.4無菌播種asepticseeding在無菌環(huán)境中，將植物種子接種到經(jīng)滅菌消毒處理的培養(yǎng)基中，實現(xiàn)促進種子萌發(fā)的技術(shù)措施。4父本選擇4.1個體選擇挑選長勢良好、株型健壯、無病蟲害的植株作為父本。4.2花朵選擇上午9:30～10:30，選擇完全開放后2d～3d，色澤艷麗，花型飽滿，花朵碩大，花部完整，花粉發(fā)育完全的花朵，用于花粉采集。4.3花粉獲取2利用干凈的牙簽小心撬開花藥帽后，將牙簽先端觸碰花粉塊粘柄，當粘柄與牙簽粘合后，輕輕抽回牙簽，花粉塊將隨著粘柄一起粘連于牙簽上。4.4去除粘柄將粘柄及花粉塊放置于干凈的白紙上，左右手各執(zhí)一支牙簽將花粉塊與粘柄分離。5花粉采集、保存將花粉塊放入干凈的離心管，貼上標注有植株編號、物種名、采集日期、花粉塊數(shù)量等信息的標簽，放入冰箱冷凍層（-10℃)中低溫保存，宜在30d內(nèi)使用。6母本選擇6.1母本個體選擇挑選長勢良好、株型健壯、無病蟲害的植株作為母本。6.2母本花朵選擇選擇完全開放后2d～3d，色澤艷麗，花型飽滿，花朵碩大，花部完整，柱頭發(fā)育完全的花朵作為授粉的母本花朵；柱頭腔如有臟污或柱頭凹洞上粘液表面已變黃或褐色，則不宜做母本花朵。7人工授粉去除母本的花粉塊，以干凈的牙簽尖端蘸母本花柱頭凹洞表面上的粘液，然后將父本的花粉塊粘起，將花粉塊送入母本花朵的柱頭腔內(nèi)，每個柱頭腔放入4個花粉塊。摘除唇瓣，掛上標注有父本植株編號、物種名、花粉采集日期、授粉日期的標簽。8果莢采收及保存8.1果莢成熟標準授粉后180d～210d，果莢開始變黃但尚未開裂時采收。8.2果莢采收利用酒精消毒后的剪刀，將果莢柄剪斷，將果莢放入干凈自封袋中，并貼上標注有果莢編號的標簽，在果莢采集本上記錄其父本植株編號、父本種名、花粉采集日期、授粉日期、母本植株編號、母本種名、授粉日期及果莢采摘日期。8.3果莢保存將裝有果莢的自封袋放入4℃的冰箱保存，宜在30d內(nèi)完成播種。9無菌播種9.1果莢預處理用毛刷將果莢表面刷干凈，置于飽和洗衣粉水中浸泡20min，期間不斷搖晃，然后置于流水下沖洗30min。9.2果莢滅菌在超凈工作臺內(nèi)用75％酒精棉球擦拭果莢表面，接著用0.1％升汞浸泡20min，無菌水沖洗4次，無菌濾紙吸干表面水分。39.3播種方法將果莢放置于滅菌碟上，用解剖刀剖開果莢，用鑷子取出種子，將其均勻地撒播在萌發(fā)誘導培養(yǎng)基（見附錄A中的A.1）。培養(yǎng)室溫度23℃~27℃,光照強度2400lx～3200lx，光周期10h～12h。60d后，種子萌發(fā)。9.4壯苗培養(yǎng)當小苗長出葉片后，即可將成簇小苗分離成單株，接入壯苗培養(yǎng)基（見附錄A中的A.2）中。培養(yǎng)室溫度和培養(yǎng)條件見8.3。9.5生根培養(yǎng)當小苗長出3～4片葉子后，即可將小苗接入生根培養(yǎng)基（見附錄A中的A.3）中。培養(yǎng)室溫度和培養(yǎng)條件見8.3。當單株小苗長出4～5片葉，2～3條根時，即可拿出煉苗移栽。4（規(guī)范性附錄）培養(yǎng)基配方A.1萌發(fā)誘導培養(yǎng)基配方1/2MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L＋香蕉50g/L+白砂糖30g/L＋瓊脂4.2g/L，pH5.5～5.8。A.2壯苗培養(yǎng)基配方MS+6-BA1mg/L＋香蕉80g/L+白砂糖30g/L＋瓊脂4.2g/L，pH5.5～5