臨床醫(yī)學(xué)檢驗考試輔導(dǎo)《微生物檢驗》病毒感染的實驗診斷講義

病毒感染的實驗診斷

?考點

病毒的生物學(xué)性狀

病毒的實驗室檢查方法

常見病毒的感染

【內(nèi)容講解】

第一節(jié)概述

一類非細(xì)胞型微生物，個體極小，可通過細(xì)菌濾器，需用電子顯微鏡觀察。

僅含一種核酸作為遺傳物質(zhì)，外被蛋白質(zhì)衣殼或還有包膜。

病毒只能在活細(xì)胞內(nèi)寄生，以復(fù)制的方式進行增殖。

在臨床微生物感染中，近75%的傳染病是由病毒引起的。

一、病毒的基本性狀

(-)形態(tài)結(jié)構(gòu)

1.大小和形狀：

大?。簻y量單位用納米表示，一般在20-300nm之間。

形態(tài)大致可分為：球形或近似球形、桿狀、彈形、磚形、蝌蚪形等。

2.結(jié)構(gòu)

DNAorRNA

.核心_

基本結(jié)構(gòu)——核衣殼.［功能蛋白

.衣殼

-包膜

一輔助結(jié)構(gòu).

.纖突或刺突

(二)病毒的增殖

病毒必須依賴宿主細(xì)胞，

以特殊的自我復(fù)制方式進行增殖。

病毒的復(fù)制周期：

吸附、穿入、脫殼、生物合成、

組裝與成熟、釋放6個階段。

頓挫感染：病毒進入細(xì)胞后的環(huán)境不利于它的復(fù)制，不能合成本身的成分或不能組裝和釋放有感染性

的病毒顆粒。

缺陷病毒：由于病毒基因組不完整或基因位點改變而不能進行正常增殖的病毒。

干擾現(xiàn)象：當(dāng)兩種不同的病毒或兩株性質(zhì)不同的同種病毒，同時或先后感染同一細(xì)胞或機體時，可發(fā)

生一種病毒抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象。

（三）噬菌體

以細(xì)菌、真菌等為宿主，能引起細(xì)菌等裂解的病毒。

噬菌體特異性識別細(xì)菌表面受體，可用于進行細(xì)菌的鑒定與分型。

噬菌體感染細(xì)菌后產(chǎn)生兩種后果：

溶菌周期和溶源性周期。

0

空）

C~o)C-o)CZ)

（四）非尋常病毒

比病毒更小更簡單的致病因子，又稱為亞病毒因子，包括類病毒、衛(wèi)星病毒和骯粒等。

阮粒個體微小，不含核酸，其主要成分是一種蛋白酶抗性蛋白，對各種理化作用的抵抗力強，具有傳

染性，是引起傳染性海綿狀腦病的病原體。

阮粒致中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性病變，引起牛海綿狀腦?。ǒ偱２。??？搜挪。–JD）和Kuru病被認(rèn)為與

骯粒感染有關(guān)。

二、病毒的分類與命名

科、屬、種3級或科、亞科、屬、種4級。

DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒三大類。

按傳播途徑可分為呼吸道病毒、胃腸炎病毒、經(jīng)性傳播感染的病毒等。

按感染部位與癥狀特征可分為肝炎病毒、出血性熱病毒、皰疹病毒等。

第二節(jié)病毒感染的實驗診斷

病毒學(xué)實驗室診斷有三個方面：

①直接檢測和分離鑒定；

②檢測病毒蛋白抗原成分和核酸；

③檢測抗體。

一、標(biāo)本采集、運送及處理

（一）標(biāo)本采集

1.采樣時機：應(yīng)在病人急性期或發(fā)病初期采集標(biāo)本。

2.標(biāo)本種類：

根據(jù)不同病毒感染采集不同標(biāo)本，如鼻咽分泌物、腦脊液、血液、糞便等。

（-）標(biāo)本的運送及保存

快速傳遞，立即處理和接種。

采集和運送過程注意冷藏。如不能立即處理和接種，可在4℃保存數(shù)小時，長時間保存需置-70℃。

（三）標(biāo)本處理

凝固的血液需先離心，得到的血清可以用于病毒分離。

肝素抗凝全血、腦脊液、胸腔液、水痘液以及尿液均可直接用于病毒分離培養(yǎng)。

有些標(biāo)本如糞便等,常需粗提、提純和濃縮等復(fù)雜處理過程。

二、分離培養(yǎng)與鑒定

（-）分離培養(yǎng)

1.組織培養(yǎng)包括器官培養(yǎng)、組織塊培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。

目前常用的方法是細(xì)胞培養(yǎng)；

常用細(xì)胞：

①原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)；②二倍體細(xì)胞株；③傳代細(xì)胞系。

2.雞胚接種一般選用9-12日齡雞胚。

雞胚中的部位適宜病毒

卵黃囊嗜神經(jīng)病毒，如乙型腦炎病毒

羊膜腔流感病毒

尿囊腔流感病毒、腮腺炎病毒，還可制備疫苗和大量病毒抗原

絨毛尿囊膜天花病毒、單純皰疹病毒

腦內(nèi)狂犬病病毒

3.動物接種

實驗室常用新生小鼠或乳鼠進行病毒分離。

（二）病毒鑒定

1.初步鑒定根據(jù)臨床癥狀、流行病學(xué)特點、標(biāo)本來源、易感動物范圍、細(xì)胞病變特征及生物學(xué)特征、

理化性質(zhì)可初步判斷病毒的科及屬。

2.最終鑒定在初步鑒定的基礎(chǔ)上，選擇適當(dāng)?shù)难鍖W(xué)方法對病毒分離株進行最后鑒定，常用中和試

驗、補體結(jié)合試驗、血凝抑制試驗、免疫熒光試驗、酶免疫試驗等。分子生物學(xué)方法也在病毒鑒定方面得

到應(yīng)用。

初步鑒定（舉例）：

細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）：

細(xì)胞形態(tài)變化病毒

細(xì)胞圓縮，分散，不聚集，全部細(xì)胞被破壞腸道病毒

細(xì)胞腫大，顆粒增多，病變細(xì)胞聚集呈葡萄狀腺病毒

細(xì)胞融合成多核細(xì)胞副粘病毒，皰疹病毒

空泡狀，多核巨細(xì)胞麻疹病毒

脂溶劑敏感實驗：有包膜（+）,無包膜（-）:

耐酸實驗：腸道病毒（R）,鼻病毒（S）。

三、病毒感染的診斷

（一）顯微鏡檢查

1.用光學(xué)顯微鏡直接檢查病毒包涵體?？勺鳛椴《靖腥镜妮o助診斷，不是特異性試驗。

核內(nèi)包涵體：常見DNA病毒。如巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒和腺病毒等。

胞漿內(nèi)包涵體：常見RNA病毒。如呼吸道合胞病毒、狂犬病病毒和痘類病毒等。

胞質(zhì)內(nèi)和胞核內(nèi)包涵體：麻疹病毒等。

2.用電子顯微鏡直接檢查病毒顆粒。

數(shù)小時即可從病毒形態(tài)上作出明確的鑒別診斷。

應(yīng)用免疫電鏡靈敏度更高。

（二）病毒抗原檢查

利用特異性免疫血清檢測標(biāo)本中的病毒抗原。

常用方法有：免疫熒光技術(shù)、酶免疫技術(shù)、放射免疫法、反相間接血凝和對流免疫電泳等方法。

對于一些血清型別不多或在一般細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中尚不能成功增殖的病毒，直接檢測病毒抗原是快速而

實用的方法。

（三）病毒抗體檢查

利用特異性抗原檢測病毒感染者血清中的IgM和IgG抗體。

常用的方法有中和試驗、補體結(jié)合試驗、血凝抑制試驗及免疫擴散等，還可以利用放射免疫法及酶聯(lián)

免疫吸附法。

IgM抗體出現(xiàn)在病毒感染的早期，所以標(biāo)本采集時間對檢測結(jié)果的影響很大。

IgG抗體檢測需采集感染急性期與恢復(fù)期雙份血清，恢復(fù)期IgG效價必須比急性期增高4倍或4倍以上

時，才有診斷意義。

（四）病毒核酸檢測

利用核酸雜交和PCR技術(shù)檢測病毒特異基因片段。

檢出病毒核酸并不等于檢出具有傳染性的病毒顆粒0

第三節(jié)各類病毒感染的簡介

一、呼吸道病毒六、皰疹病毒

二、腸道病毒七、肝炎病毒

三、急性胃腸炎病毒八、反轉(zhuǎn)錄病毒

四、黃病毒九、狂犬病病毒

五、出血熱病毒十、人乳頭瘤病毒

一、呼吸道病毒

（一）流行性感冒病毒

（二）副流感病毒

（三）呼吸道合胞病毒

（四）腺病毒

（五）麻疹病毒

（六）風(fēng)疹病毒

（七）冠狀病毒

（-）流行性感冒病毒

1.生物學(xué)性狀

（1）形態(tài)：具有多形性，一般為球形或絲狀，絲狀多見于新分離株，感染性較強。

（2）結(jié)構(gòu):

神經(jīng)氨移1（NA）

核衣殼（-SSRNA+NP）,分節(jié)段

■脂質(zhì)雙層外——

RNA聚合陶復(fù)的

包膜

（2）分型與變異

1）分型：根據(jù)核蛋白抗原和M蛋白的不同，將流感病毒分為甲（A）、乙（B）、丙（C）型;

甲型流感病毒根據(jù)NA和HA的抗原性不同又分為若干亞型。

2）變異：變異的物質(zhì)基礎(chǔ)是HA和NA。

抗原變異幅度小時稱為抗原漂移；

變異幅度大形成新的亞型，引起大規(guī)模流行，為抗原轉(zhuǎn)變。

(3)培養(yǎng)特性：

常用雞胚接種培養(yǎng)，初次分離接種羊膜腔為最佳,傳代適應(yīng)后可移種尿囊腔。

細(xì)胞培養(yǎng)一般用原代猴腎細(xì)胞(P、IK)或犬腎傳代細(xì)胞(MDCK)?

利用紅細(xì)胞凝集試驗確定病毒的存在。

(4)抵抗力：

不耐熱，對干燥、日光、紫外線以及甲醛、乙醇等均敏感。

2.微生物檢驗

(1)標(biāo)本采集和處理：

在發(fā)病急性期，以前3天為最好。

采集鼻腔洗液、咽拭子、鼻拭子等，置于Hanks液中。

放入冰壺中，速送實驗室。若48小時內(nèi)未能進行接種，標(biāo)本應(yīng)放于低溫中保存。

(2)分離培養(yǎng)與鑒定：

標(biāo)本接種于雞胚羊膜腔，35℃3天后，收集羊水和尿囊液進行血凝試驗并測定滴度。

血凝陽性者，用已知抗體作血凝抑制試驗進行鑒定。

若血凝陰性時，需用雞胚盲傳1?2次，仍不出現(xiàn)血凝陽性者，方可判斷病毒分離陰性。

也可接種原代猴腎細(xì)胞(PMK)或犬腎傳代細(xì)胞(MDCK)?

(3)快速診斷

1)免疫熒光技術(shù)和酶免疫技術(shù)。

2)分子雜交技術(shù)。

3)PCR技術(shù)。

4)免疫電鏡技術(shù)。

(4)血清學(xué)診斷：

需同時檢測急性期(5天以內(nèi))和恢復(fù)期(2?4周)血清，在相同條件下進行血凝抑制試驗，如恢復(fù)

期抗體效價比急性期高4倍或4倍以上即有診斷意義。

3.臨床意義

病毒隨飛沫傳播進入易感者呼吸道,依靠血凝素與黏膜柱狀上皮細(xì)胞相應(yīng)受體結(jié)合，感染細(xì)胞。

主要在呼吸道柱狀上皮細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，很少入血,但代謝毒素樣物質(zhì)可進入血流引起發(fā)熱、頭痛和

全身酸痛。

甲型流感可以是散發(fā)，也可以是全球性大流行。乙型流感的播散速度及范圍不如甲型。

(二)副流感病毒

1.生物學(xué)性狀

屬副黏病毒科、副黏病毒亞科、副黏病毒屬。

形態(tài)結(jié)構(gòu)類似流感病毒，但體積較大，其核酸為單負(fù)股RNA,不分節(jié)段。

包膜上嵌有兩種糖蛋白刺突:

HN：具有血凝和神經(jīng)氨酸酶活性，具有流感病毒HA的吸附作用；

F：具有使病毒進入宿主細(xì)胞和使病毒在宿主細(xì)胞之間傳播的作用。

抵抗力弱，不耐酸，對熱敏感。

2.微生物學(xué)檢查

(1)標(biāo)本采集和處理：采集發(fā)病早期標(biāo)本，成人可采取鼻咽分泌物及咽嗽液標(biāo)本，年幼患者可用咽拭

子涂咽后壁，然后放入2ml收集液中，攪拌后，立即接種細(xì)胞。

(2)分離培養(yǎng)：最敏感的細(xì)胞是原代人胚腎和原代猴腎細(xì)胞，增殖并形成多核巨細(xì)胞或包涵體。

(3)病毒鑒定：最常用的方法是紅細(xì)胞吸附抑制試驗，亦可用血凝抑制試驗，中和試驗和補體結(jié)合試

驗對病毒進行鑒定。

(4)直接檢測病毒抗原：常用方法有間接免疫熒光法，也可用EUSA、放射免疫和電鏡技術(shù)直接檢測

標(biāo)本中的病毒抗原。

(5)血清學(xué)診斷：血清學(xué)試驗常有交叉反應(yīng)，診斷困難。

3.臨床意義：

感染者呼吸道分泌物通過人與人密切接觸或氣溶膠傳播；

可引起兒童和成人呼吸道感染；

1型和2型是主要的致病因子，而且?？梢鹣?；

3型常引起下呼吸道感染；

4型只引起輕型上呼吸道感染。

(三)呼吸道合胞病毒

1.生物學(xué)性狀：

屬副粘病毒科、肺病毒亞科、肺病毒屬。

球形，具有多形性。

核酸為單負(fù)股RNA,不分節(jié)段。

包膜上有兩種刺突：

G蛋白作用于類似于流感病毒的血凝素蛋白HA；

F蛋白是融合蛋白，介導(dǎo)病毒穿入和細(xì)胞融合。

2.微生物學(xué)檢查

(1)標(biāo)本采集和處理：可采用鼻腔洗液或鼻咽拭子，置轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基中冷藏(4℃)運送至實驗室，盡

可能立即接種。

(2)分離培養(yǎng)與鑒定：

不能在雞胚中增殖,可在人類上皮細(xì)胞傳代細(xì)胞系內(nèi)增殖。

培養(yǎng)后3~7天，細(xì)胞病變?yōu)楹习w形成即細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)形成嗜酸性包涵體。

(3)直接檢測病毒抗原：可利用免疫熒光技術(shù)和酶免疫技術(shù)。

(4)血清學(xué)診斷：

常用中和試驗、免疫熒光試驗和酶免疫試驗檢查血清中IgG、IgM及IgA。

中和試驗需雙份血清，檢測IgG滴度變化。檢測患者IgM、IgA可進行早期診斷。

3.臨床意義：

最常見的傳播途徑是經(jīng)飛沫傳染。

引起嬰幼兒下呼吸道疾病的最常見的病毒。

最易引起嬰幼兒細(xì)支氣管炎和細(xì)支氣管肺炎，若不及時處理，死亡.率較高；

較大兒童和成人主要引起上呼吸道感染。

(四)腺病毒

1.生物學(xué)性狀：

中等大小的無包膜病毒。

核心為單一線形雙股DNA,核衣殼呈20面體立體對稱。

不能在雞胚中增殖，只能在人源的組織細(xì)胞中增殖。

細(xì)胞病變?yōu)槟[脹、變形、聚集成葡萄串狀，細(xì)胞核中形成嗜堿性包涵體。

對酸和乙酸不敏感，對低溫耐受，但56℃30分鐘可被滅活。

2.微生物學(xué)檢查

(1)標(biāo)本采集：在病人急性期內(nèi)采集標(biāo)本，如鼻咽拭子、鼻咽吸取物、直腸拭子、尿道拭子或?qū)m頸拭

子及活檢組織等?？焖偎蜋z，快速檢查。

(2)直接檢測病毒抗原：

利用電鏡或免疫電鏡檢查；

免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)，如EIA進行病毒抗原檢測。

PCR技術(shù)或核酸探針進行鑒定。

(3)病毒分離與鑒定；

分離的細(xì)胞有傳代人細(xì)胞系HeLa、KB、A549以及原代人胚腎細(xì)胞等。

一般用補體結(jié)合試驗和EIA試驗對腺病毒進行分屬。以中和試驗或血凝抑制試驗進行血清型鑒定。

(4)血清學(xué)診斷：補體結(jié)合試驗，酶免疫測定及血凝抑制試驗及血清中和試驗等。

3.臨床意義：

可常年流行，在人體各器官均有發(fā)現(xiàn)，常引起呼吸道疾病，上呼吸道感染多見普通感冒、咽炎、扁桃

體炎。下呼吸道疾病有支氣管炎、細(xì)支氣管炎和肺炎。

腺病毒感染后，機體可獲得對同型病毒的持久免疫力。

(五)麻疹病毒

1.生物學(xué)性狀：

屬副粘病毒科、麻疹病毒屬。

球形，核心為單負(fù)鏈RNA,三種衣殼蛋白(L、P、N),外被包膜，包膜內(nèi)面為M蛋白，包膜表面有血

凝素(H蛋白)和融合蛋白(F)。

H蛋白與細(xì)胞表面病毒受體CD46結(jié)合，感染宿主。

病毒抵抗力不強，對陽光和一般消毒劑敏感。

2.微生物學(xué)檢查

(1)標(biāo)本采集：在病人急性期內(nèi)采集標(biāo)本，如鼻咽拭子、鼻咽吸取物、痰等。

(2)直接檢測病毒：

感染細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞融合和多核巨細(xì)胞，胞質(zhì)和胞核內(nèi)有嗜酸性包涵體。

電鏡或免疫電鏡檢查病毒顆粒。

免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)，如EIA進行病毒抗原檢測。

PCR技術(shù)或核酸探針進行鑒定。

(3)病毒分離：

接種傳代細(xì)胞系HeLa、Vero以及原代人胚腎細(xì)胞等。

鏡下觀察是否有細(xì)胞病變出現(xiàn)。

(4)血清學(xué)診斷：

雙份血清作補體結(jié)合試驗，酶免疫測定及血凝抑制試驗等。

用ELISA法檢測血清特異性IgM可協(xié)助診斷。

3.臨床意義：

麻疹是兒童時期最常見的急性呼吸道傳染病。

通過飛沫直接傳播，冬春季易發(fā)?

侵入上呼吸道和眼結(jié)膜上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，通過局部淋巴組織入血，出現(xiàn)第一次病毒血癥，病毒隨血流

侵入全身淋巴組織和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)增殖，再次入血形成第二次病毒血癥，并感染眼結(jié)膜、皮膚、口腔

黏膜、呼吸道、消化道、血管。

遠(yuǎn)期并發(fā)癥是亞急性硬化性全腦炎(SSPE)。

(六)風(fēng)疹病毒

1.生物學(xué)性狀：

球形，核心為單正鏈RNA,外被包膜，包膜表面有血凝素。

能在綠猴腎、兔腎和人胚腎細(xì)胞內(nèi)增殖。

抵抗力不強，不耐熱，對脂溶劑敏感，紫外線能滅活病毒。

2.微生物學(xué)檢查

(1)標(biāo)本采集：在早期采集標(biāo)本，如咽拭子、皮疹液、尿液以及死亡嬰兒的各種臟器等。

(2)直接檢測病毒：利用PCR技術(shù)或核酸探針進行鑒定。

(3)病毒分離與鑒定：接種非洲綠猴腎Vero以及原代人胚腎細(xì)胞等。鏡下觀察是否有細(xì)胞病變出現(xiàn)。

用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的單克隆抗體進行病毒鑒定。

(4)血清學(xué)診斷：

雙份血清作血凝抑制試驗等。用ELISA法檢測血清特異性IgM可協(xié)助診斷。

患兒出生時血清中有抗風(fēng)疹病毒IgM抗體和從母體獲得的IgG抗體，或?qū)m內(nèi)羊水中有IgM抗體可判定

為先天性風(fēng)疹綜合征。

3.臨床意義：

風(fēng)疹是兒童時期常見的傳染病。風(fēng)疹是全身麻疹樣出疹伴耳后及枕下淋巴結(jié)腫大為特征的急性呼吸道

傳染病。

病毒在局部淋巴結(jié)增殖后，通過病毒血癥播撒全身。大多數(shù)情況下，屬于一過性和無明顯臨床癥狀的

感染。

孕婦在妊娠早期感染病毒，經(jīng)胎盤垂在傳播感染胎兒,可引起先天性風(fēng)疹綜合征。胎兒出生后患先天

性心臟病、耳聾、失明、智力障礙等。

(七)冠狀病毒

冠狀病毒可能是成人和較大兒童上呼吸道感染的重要病因。

主要引起普通感冒和咽炎。大約10%?30%的普通感冒由該病毒引起。

嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)病毒可能是冠狀病毒變種所致。

二、腸道病毒

腸道病毒屬小RNA病毒科腸道病毒屬。

由糞-口途彳仝傳播。

主要包括脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒、埃可病毒和一些新腸道病毒。

(-)生物學(xué)性狀

無包膜，由簡單的病毒衣殼和單股正鏈RNA組成。

能在猴腎、人胚腎、人羊膜細(xì)胞、HEP-2、HeLa細(xì)胞中增殖。

對外界抵抗力較強，在污水及糞便中可生存數(shù)月。對酸及乙醛穩(wěn)定，對紫外線、干燥及熱敏感，56℃30

分鐘可滅活。

(二)微生物學(xué)檢查

L標(biāo)本的采集與處理：

合理采集相應(yīng)標(biāo)本，如腦脊液、血液、尿液、直腸拭子、咽喉拭子、鼻腔洗液等，將液體標(biāo)本置無菌

試管內(nèi)立即送檢。

2.直接檢測病毒：

電鏡檢查及酶免疫法均可直接檢測腸道病毒。

PCR在腸道病毒檢測方面更具優(yōu)勢。

3.病毒分離：

猴細(xì)胞系對脊髓灰質(zhì)炎病毒，B組柯薩奇病毒和ECHO病毒具有良好的敏感性。

人類二倍體成纖維細(xì)胞適合于A組柯薩奇病毒的分離。

4.病毒鑒定：

中和試驗進行病毒鑒定，此為鑒定的標(biāo)準(zhǔn)方法。

PCR及免疫熒光法進行快速鑒定。

5.血清學(xué)診斷：

常用方法有中和試驗、補體結(jié)合試驗、及血凝抑制試驗。

三種試驗只有中和試驗較特異，但操作繁瑣。

（三）臨床意義

腸道病毒雖然以感染胃腸道作為開始，但卻很少引起胃腸道疾病。

病毒的靶器官以神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉和其他系統(tǒng)為主。

在糞便中有腸道病毒排出時，多數(shù)病人往往無任何癥狀。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液、眼結(jié)膜分泌物和泌尿生殖道等部位的標(biāo)本中檢出腸道病毒，就意味著真正的病

毒侵入。

腸道病毒疾病

脊髓灰質(zhì)炎

損害脊髓前角運動神經(jīng)細(xì)胞，導(dǎo)致脊髓灰質(zhì)炎即小兒麻痹癥

病由

以幼年兒童最常見，極少數(shù)患者出現(xiàn)無菌性腦膜炎和輕癱等癥狀。可引起心肌炎和

柯薩奇病毒

心包炎、急性結(jié)膜炎等。

ECHO病毒以幼年兒童最常見，極少數(shù)患者出現(xiàn)無菌性腦膜炎和輕癱等癥狀。

腸道病毒71

導(dǎo)致手足口病、無菌性腦膜炎等，目前尚無有效的疫苗。

型

三、急性胃腸炎病毒一輪狀病毒

1.生物學(xué)性狀：

球形，核心含雙鏈RNA,外被雙層衣殼，內(nèi)層核衣殼的殼粒呈放射狀排列，電鏡下猶如車輪狀外形。

常用的細(xì)胞為原代猴腎細(xì)胞和傳代猴腎細(xì)胞。

病毒抵抗力強，耐酸堿，耐乙酸。56℃30分鐘可滅活?？杀幌緞缁?。

2.微生物檢驗

（1）標(biāo)本采集與處理：發(fā)病早期采集腹瀉糞便，密封送檢。

（2）標(biāo)本直接檢查：

1）電鏡和免疫電鏡檢查

2）抗原檢測常用ELISA法、膠乳凝集試驗

3）病毒RNA聚丙烯酰胺凝膠電泳分析用于病毒分型

4）檢測核酸

（3）分離培養(yǎng)

3.臨床意義：

輪狀病毒是引起嬰幼兒急性腹瀉的主要病因。在發(fā)展中國家發(fā)病率高。

其發(fā)病和嬰幼兒病死率僅次于呼吸道感染。

A組感染引起嬰幼兒急性胃腸炎，感染以溫帶地區(qū)的秋冬季為主。

B組引起成人腹瀉，無明顯季節(jié)性。

四、黃病毒

一大群通過吸血的節(jié)肢動物而傳播疾病的病毒。

（一）流行性乙型腦炎病毒

（二）森林腦炎病毒

（三）登革病毒

（一）流行性乙型腦炎病毒

1.生物學(xué)性狀：

基因組為單正鏈RNA。

結(jié)構(gòu)蛋白有三種：M、C和E。M位于包膜內(nèi)面，C在衣殼中，E是鑲嵌在包膜上的糖蛋白，組成血凝素。

最易感染的動物為出生2?3天的乳鼠，經(jīng)腦內(nèi)接種后3?5天即可發(fā)病。在地鼠腎，幼豬腎等原代培

養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)增殖，并引起明顯的細(xì)胞病變。

抗原性穩(wěn)定，很少變異。

2.微生物學(xué)檢查

（1）標(biāo)本直接檢查：

免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)進行病毒抗原檢測。

PCR技術(shù)或核酸探針檢測核酸。

（2）分離培養(yǎng)與鑒定：

接種乳鼠腦內(nèi)，或原代金色地鼠腎細(xì)胞等培養(yǎng)細(xì)胞.

根據(jù)細(xì)胞病變、紅細(xì)胞吸附試驗證實病毒的增殖，陽性即可傳代或鑒定。

（3）血清學(xué)診斷：可以利用血凝抑制、補體結(jié)合試驗等進行血清學(xué)診斷。

3.臨床意義：

豬為最重要的宿主和傳染源。通過三帶喙庫蚊叮咬傳播,引起流行性乙型腦炎。夏秋季節(jié)流行。

人感染后，絕大多數(shù)表現(xiàn)為隱性或輕型感染。只有少數(shù)發(fā)生腦炎。

病毒侵入腦組織內(nèi)增殖，造成腦實質(zhì)病變，表現(xiàn)為高熱、驚厥或昏迷癥狀。

（―）森林腦炎病毒

1.生物學(xué)特性：

形態(tài)結(jié)構(gòu)與乙腦病毒近似。

最易感染的動物為小鼠。

可在原代雞胚細(xì)胞和傳代地鼠細(xì)胞培養(yǎng)中生長并引起病變。

能在雞胚卵黃囊、絨毛尿囊膜增殖。

抗原性穩(wěn)定。

2.微生物學(xué)檢查：與乙型腦炎病毒相似。

3.臨床意義：

森林硬林為主要傳播媒介和儲存宿主。經(jīng)蟬傳播，引起人類森林腦炎。亦可經(jīng)胃腸道傳播。

人感染后，有相當(dāng)一部分表現(xiàn)為隱性感染，發(fā)病者潛伏期約10?14天，然后出現(xiàn)高熱、頭痛、腦膜刺

激癥、昏迷等。

（三）登革病毒

1.生物學(xué)性狀：

病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)與乙腦病毒相似。

根據(jù)抗原性不同，可分為1、2、3、4四個血清型。

可用蚊體胸內(nèi)接種培養(yǎng)，也可用白紋伊蚊的傳代細(xì)胞（C6/36株）或地鼠腎細(xì)胞進行培養(yǎng)，初生小鼠

進行動物接種。

2.微生物學(xué)檢查：

取病人第1?3天的血清接種白紋伊蚊C6/36株細(xì)胞等以分離病毒。

病人早期與恢復(fù)期血清抗體滴度有4倍或4倍以上增高則有診斷意義。

利用ELISA及斑點免疫測定法檢測特異性IgM抗體。這有助于登革熱的早期診斷。

3.臨床意義：

儲存于人和猴，通過埃及伊蚊和白紋伊蚊等傳播。

病毒感染人體后，可在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞中增殖，然后經(jīng)血液播散，引起發(fā)熱、肌肉和關(guān)

節(jié)酸痛、淋巴結(jié)腫脹及皮膚出血、休克等。

臨床上分為：

普通型登革熱：病情較輕。

登革出血熱/登革休克綜合征：病情較重。

五、出血熱病毒

（一）漢坦病毒

1.生物學(xué)性狀：

圓形、橢圓形或多形性。單負(fù)股RNA,有長、中、短三片段。

在人肺傳代細(xì)胞（A549）,非洲綠猴腎細(xì)胞（Vero-E6）,人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS）及地鼠腎細(xì)胞中

增殖，不引起明顯的細(xì)胞病變。

中和試驗可將世界各地分離的漢坦病毒分成6個血清型。

對脂溶劑敏感，對酸抵抗力弱，60℃1小時可被滅活。

2.微生物學(xué)檢查

（1）病毒分離與抗原檢測：

常用Vero-E6細(xì)胞、A549細(xì)胞分離病毒。

免疫熒光抗體染色檢查細(xì)胞胞漿內(nèi)的病毒抗原。

（2）血清學(xué)診斷：

免疫熒光染色，檢查病人血清中的特異性IgM或IgG抗體。

ELISA檢測特異性IgM適用于早期診斷。

3.臨床意義：

引起腎綜合征出血熱（HFRS）。

侵入人體后約有2周的潛伏期，可引起流行性出血熱，起病急，典型臨床表現(xiàn)為高熱、出血和腎損害。

伴有三痛（頭痛、眼眶痛、腰痛）及紅（面、頸、上胸部潮紅）。眼結(jié)膜、咽部及軟腭充血。軟腭、液下、

前胸等處有出血點。

（二）新疆出血熱病毒

L生物學(xué)性狀：與漢坦病毒相似。

2.微生物學(xué)檢查：主要是病毒分離和應(yīng)用ELISA,免疫熒光間接染色法測抗體。

3.臨床意義：

引起新疆出血熱，本病屬一種自然疫源性疾病，流行于有硬蟀活動的荒漠牧場。

野生嚙齒動物及家畜是主要儲存宿主，硬岬是該病毒的傳播媒介，亦是儲存宿主。

潛伏期2?10天，大多數(shù)感染者突然發(fā)熱，表現(xiàn)為發(fā)熱，全身肌肉痛，中毒癥狀和出血。

六、皰疹病毒

（一）單純皰疹病毒（HSV）

（二）水痘-帶狀皰疹病毒

(三)巨細(xì)胞病毒

(四)EB病毒

(-)單純皰疹病毒(HSV)

1.生物學(xué)性狀：

有包膜的DNA病毒，基因組由兩個互相連接的長片段(L)和短片段(S)組成，為雙股線狀DNA。

在多種細(xì)胞內(nèi)增殖，如原代兔腎、人胚肺、人胚腎細(xì)胞或地鼠腎細(xì)胞等。

細(xì)胞被感染后很快發(fā)生病變。如細(xì)胞腫脹、變圓、出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體。

有兩種血清型，HSV-1和HSV-2。

2.微生物學(xué)檢查

(1)標(biāo)本采集和處理；

采集水皰液、唾液、尿液、血液、腦脊液、陰道或?qū)m頸拭子

標(biāo)本應(yīng)立即接種敏感細(xì)胞培養(yǎng)液，如果不能則將標(biāo)本置于轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基，快速送檢。

(2)直接檢查病毒：

免疫電鏡檢查病毒顆?；虿∽兗?xì)胞。

姬姆薩染色，在光學(xué)顯微鏡下檢查多核巨細(xì)胞和胞核內(nèi)嗜酸性包涵體。

直接免疫熒光法或酶免疫法進行病毒抗原檢測。

(3)分離及鑒定：

病毒分離培養(yǎng)是I1SV感染實驗室診斷的最敏感的方法，IISV-1和I1SV-2在細(xì)胞培養(yǎng)中均可出現(xiàn)明顯的細(xì)

胞病變。

利用單克隆抗體進行確定HSV分離株的型別。

(4)分子生物學(xué)診斷；核酸雜交技術(shù)或PCR技術(shù)可檢測出HSV。

(5)血清學(xué)診斷：

ELISA或膠乳凝集試驗可檢測IISV抗體，但難以區(qū)分兩型的感染。無助于早期診斷及指導(dǎo)抗病毒治療。

3.臨床意義：

通過直接密切接觸和性接觸傳播,也可經(jīng)飛沫及垂直傳播。

HSV7感染常局限在口咽部，通過唾液或呼吸道分泌物傳播，引起口咽部皰疹、皰疹性角結(jié)膜炎、腦炎

等。多見于半歲以后的嬰幼兒，大多數(shù)呈隱性感染。

HSV-2的原發(fā)感染多見于青春期以后的患者，主要通過生殖道途徑傳播，主要表現(xiàn)為生殖器皰疹。

(二)水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)

1.生物學(xué)性狀：

與HSV相似，為線狀雙股DNA病毒。

只有一個血清型。

一般實驗動物及雞胚對VZV均不敏感。能在人胚二倍體腎細(xì)胞(HFDK)或人胚二倍體肺細(xì)胞(HFDL)

培養(yǎng)中增殖。

受感染的細(xì)胞出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體和多核巨細(xì)胞。

2.微生物學(xué)檢查

(1)直接檢測病毒或抗原：

直接或間接免疫熒光法檢測病變細(xì)胞內(nèi)的VZV抗原，有助于快速診斷。

免疫電鏡檢查，可對VZV感染進行特異性診斷。

核酸雜交或PCR技術(shù)亦可檢出皰疹液中的VZVo

(2)病毒分離：

取水痘內(nèi)容物(要求4天以內(nèi)的內(nèi)容物)接種人胚腎或人胚肺細(xì)胞。多數(shù)情況下3?7天可出現(xiàn)細(xì)胞

病變效應(yīng)。

(3)鑒定：

根據(jù)典型細(xì)胞病變效應(yīng)進行初步鑒定；

利用標(biāo)記的抗VZY的單克隆抗體進行直接熒光抗體染色，進行特異性鑒定。

(4)血清學(xué)診斷：

EIA已成為VZV血清學(xué)診斷的主要方法。

3.臨床意義：

VZV可引起水痘和帶狀皰疹。

水痘為原發(fā)感染引起，主要發(fā)生于兒童，兒童初次感染VZV大約有兩周的潛伏期，然后皮膚出現(xiàn)斑疹、

水皰疹，可進一步發(fā)展為膿皰疹并伴有發(fā)熱。

帶狀皰疹為復(fù)發(fā)感染所致，多發(fā)生于成人和老人。

(三)巨細(xì)胞病毒

1.生物學(xué)性狀：

形態(tài)與基因組結(jié)構(gòu)與HSV極為相似。

種屬特異性高，即人CMV(HCMV)只能感染人。

只能在人成纖維細(xì)胞中才能增殖，增殖緩慢。

細(xì)胞病變特點為腫脹、核變大形成巨大細(xì)胞，核內(nèi)有致密的嗜堿性包涵體，形似貓頭鷹眼特征。

加熱56℃30分鐘，低pH、乙醛、紫外線、反復(fù)凍融均能使CMV滅活。

2.微生物檢驗

(1)標(biāo)本采集：病毒分離可采取患者尿液、口腔拭子、外周血白細(xì)胞等。血清學(xué)診斷可采取患者血清。

(2)直接檢查病毒：

IIE等染色觀察巨大細(xì)胞和細(xì)胞核內(nèi)的包涵體。

免疫熒光技術(shù)和酶免疫技術(shù)檢查標(biāo)本中的IICMV抗原。

核酸雜交或PCR技術(shù)檢測HCMV的核酸。

3.臨床意義

通過多種途徑傳播。

有先天性或獲得性細(xì)胞免疫缺陷的兒童或成人，如艾滋病及器官移植患者，CMV感染很常見。

(1)正常人感染：常呈隱性感染，少數(shù)出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥。

(2)免疫功能缺損的個體的感染：致的間質(zhì)性肺炎是骨髓移植受者的首位死因。AIDS患者HCMV感染

以肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道感染最為常見。

(3)先天性和圍生期感染

1)先天感染：母體發(fā)生CMV感染，經(jīng)胎盤傳至胎兒引起宮內(nèi)感染。

2)產(chǎn)時感染：與產(chǎn)道中的病毒相接觸被感染。

3)產(chǎn)后感染：與排病毒的個體密切接觸而獲得。

(四)EB病毒

1.生物學(xué)性狀

病毒顆粒為球形。

不能用常規(guī)的皰疹病毒培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)。

一般用人臍血淋巴細(xì)胞或從外周血分離的B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。

根據(jù)病毒抗原表達(dá)時所處的病毒增殖周期的不同階段，將EBV抗原分為3類：

1)潛伏期表達(dá)的抗原：EBV核抗原(EBNA)和潛伏期膜蛋白。

2)EBV增殖早期抗原(EA)o

3）病毒增殖晚期抗原：EBV衣殼抗原（VCA）及EBV包膜抗原（MA）。

（1）直接檢查病毒：

抗補體免疫熒光法檢查淋巴細(xì)胞或上皮細(xì)胞EB病毒核抗原。

核酸雜交和PCR或RT-PCR技術(shù)檢測病毒。

（2）病毒分離培養(yǎng)及鑒定：

接種人臍帶血淋巴細(xì)胞對EB病毒進行分離培養(yǎng)，孵育4周，病毒陽性培養(yǎng)物，通過抗補體免疫熒光法

進行EB鑒定。

（3）血清學(xué)診斷：

嗜異性抗體檢測可用于輔助診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥。

進行針對病毒VCA、EA和EBNA的抗體測定，不同疾病患者的體內(nèi)針對EBV不同的抗原成分所產(chǎn)生的抗

體的組成及水平均有一定的特征性。

3.臨床意義

流行廣泛。主要通過唾液傳播，也可因輸血傳染。

幼兒感染后多數(shù)無明顯癥狀，但終生攜帶病毒，或引起輕度咽炎和上呼吸道感染。

青春期發(fā)生原發(fā)感染，約50%出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥。

EBV主要侵犯B細(xì)胞，與EB病毒感染有關(guān)的疾病主要有：傳染性單核細(xì)胞增多癥、非洲兒童惡性淋巴

瘤、鼻咽癌、霍奇金病和其他某些淋巴瘤。

七、肝炎病毒

病毒HAVHBVHCVHDVHEV

致病甲型乙型丙型丁型戊型

基因組ssRNAdsDNAssRNAssRNAssRNA

傳播糞一口血/垂血/垂血/垂糞-ri

流行流行/暴發(fā)流行/暴發(fā)

好發(fā)兒/青青/成

慢性攜帶土土土

肝硬化/肝癌土+

自動免疫+±

被動免疫丙球HBIg

（一）甲型肝炎病毒

1.生物學(xué)性狀

小RNA病毒科，無包膜，核心為單正股RNA。

只有一個血清型。

抵抗力較其他小RNA病毒強，60c加熱10?12小時后仍具有感染性，85℃加熱立即滅活，對乙醛、氯

仿及pH為3的酸性環(huán)境有抵抗力。

2.微生物檢驗

甲型肝炎患者病期不長，預(yù)后良好，一般不需進行病原學(xué)檢查。

微生物檢驗以測定病毒抗原或抗體為主。

感染早期一般可用RIA或EUSA檢測患者血清中抗-HAVIgM,是HAV新近感染的重要指標(biāo)。了解既往

感染史或進行流行病學(xué)調(diào)查，需檢測抗-HAVIgGo

RT-PCR、核酸雜交技術(shù)直接檢測抗原。

3.臨床意義

主要通過糞一FI傳播，傳染源多為人類，潛伏期15?50天，平均28天。

病毒常在患者ALT升高前5?6天就存在于患者的血清和糞便中，2?3周后，隨血清特異性抗體的產(chǎn)生,

血清和糞便的傳染性逐漸消失。

甲型肝炎患者的糞便污染水源、食物以及某些海產(chǎn)品，可造成散發(fā)式大流行。

(二)乙型肝炎病毒

1.生物學(xué)性狀

(1)形態(tài)與結(jié)構(gòu)：

電鏡下可見3種特有顆粒：

①大球形顆粒：為具有感染性的HBV完整顆粒，呈球形，又稱Dane顆粒。

②小球形顆粒：成分為HBsAg,無傳染性；

③管形顆粒：成分亦是HBsAg,由多個小球型顆?！按?lián)而成”。

FMinwntousformDanepartcieSptwdcaloartid?

(22nmdMmier)(42randiameter)(22±2nmdbameter)

完整病毒結(jié)構(gòu)：

外衣殼：相當(dāng)于病毒的包膜，HBsAg鑲嵌于包膜的脂質(zhì)雙層中。

內(nèi)衣殼：是HBcAg,用酶或去垢劑作用后，可暴露出HBeAg。

核心：基因組一環(huán)狀dsDNA-S,L,DNAPo

(2)抗原成分：

1)HBsAg是HBV感染的主要標(biāo)志,由病毒DNA的S區(qū)編碼。

2)HBcAg被HBsAg所覆蓋，血中不易檢出。由DNA的C區(qū)編碼。HBcAg免疫原性強，抗-HBcIgG在血

清中持續(xù)時間長，抗TIBcIgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)。

3)HBeAg為可溶性蛋白質(zhì)，游離在血中，其消長與病毒體及DNA多聚酶的消長基本一致，故HBeAg旦

作為HBV復(fù)制及具有強感染性的?個指標(biāo)。由病毒DNA的C區(qū)編碼。

(3)抵抗力：

對理化因素有較強抵抗力。

60C加熱10小時，98℃加熱1分鐘，以及乙醛、pH為2.4的酸性環(huán)境處理6小時均不能有效滅活病毒。

2.微生物檢驗

(1)標(biāo)本的采集與處理：

臨床上常采集血液標(biāo)本，HBV的血清標(biāo)志物較穩(wěn)定。

(2)檢查方法：

主要靠RIA和ELISA等血清學(xué)方法檢測HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBC.抗-HBe。其中HBsAg的檢測最

為重要，可發(fā)現(xiàn)無癥狀攜帶者，是獻(xiàn)血者篩選的必檢指標(biāo)。

PCR檢測HBVDNA也用于乙型肝炎的臨床診斷。

3.臨床意義

傳染源是HBV攜帶者和患者的血液、唾液、精液和陰道分泌物。

傳播途徑大致可分為血液、血制品傳播、性傳播、母嬰傳播。通過破損的皮膚和黏膜侵入機體。

乙型肝炎臨床表現(xiàn)呈多樣性。

肝炎的癥狀可以是輕度而短暫的，也可以是重度和遷延性的。患者可以完全恢復(fù)健康。也可因暴發(fā)性

肝炎而致死或成為慢性肝炎。部分HBV持續(xù)感染者可發(fā)生原發(fā)性肝癌。

(三)丙型肝炎病毒

1.生物學(xué)性狀

小的有包膜的單正股RNA病毒。

可在黑猩猩體內(nèi)傳代。

尚不能用體外細(xì)胞培養(yǎng)進行分離。

抗原成分主要包括核衣殼蛋白，包膜蛋白及非結(jié)構(gòu)蛋白。

對各種理化因素的抵抗力較弱。

2.微生物檢驗

目前臨床上常用的HCV檢測方法主要有兩類：

血清學(xué)方法：測定抗-HCV。

ELISA法作為篩選試驗

條帶免疫法作確認(rèn)試驗

PCR方法：檢測HCVRNA。

3.臨床意義

主要經(jīng)輸血或其他非腸道途徑(如共用針頭、血透析等)進行傳播。

HCV的亞臨床感染者是丙型肝炎的主要傳染源。

根據(jù)臨床病程可劃分為急性和慢性，以6個月為區(qū)分界限。

HCV感染的一個主要特點就是慢性化的幾率很高，感染過程很長，存在不同程度的肝組織病變，并呈慢

性進行性?？砂l(fā)展為肝硬化，與原發(fā)性肝癌關(guān)系十分密切。

(四)丁型肝炎病毒

1.生物學(xué)特性

球形，外被HBsAg包繞，核心含HDV抗原(HDAg)和HDV-RNA基因組，基因組為一單負(fù)鏈環(huán)狀RNA。

HDV不能獨立復(fù)制，需耍HBV輔助才能增殖。

對HDV敏感的動物有黑猩猩、東方土撥鼠等。

2.微生物檢驗

(1)HDAg檢測：去除表面的HBsAg,然后用RIA或ELISA檢測HDAg?

(2)HDVRNA檢測：核酸雜交或RT-PCR技術(shù)對HDVRNA進行檢測。

(3)抗-HDV抗體檢測：HDV感染后2周左右產(chǎn)生抗-HDIgM,一個月達(dá)高峰，隨后迅速下降，抗-HDIgG

出現(xiàn)較遲，在恢復(fù)期出現(xiàn)。

丁型肝炎抗體不能清除病毒，如持續(xù)高效價，可作為慢性丁肝的指標(biāo)。

利用ELISA等方法檢測患者血清中抗-HDVIgM或抗-HDVIgG,通過檢測抗-HBsIgM或IgG以及HBeAg

和抗-HBe,作出同步感染和重疊感染的診斷。

3.臨床意義

HDV可引起與HBV相關(guān)聯(lián)的急性和慢性肝病。

HDV感染通常引起嚴(yán)重和進行性的肝病。

HDV傳播方式主要是經(jīng)血傳播，也可通過密切接觸與母嬰間垂直傳播。HDV感染只有在感染了HBV的人

群或是與HBV同時侵入才能發(fā)生。重疊感染極易導(dǎo)致慢性化。

(五)戊型肝炎病毒

1.生物學(xué)特性

球型，無包膜，基因組為正單股RNA。

體外培養(yǎng)不易獲得成功，敏感的實驗動物為靈長目?特別是猾猴和黑猩猩。

對高鹽、氯化鈉、氯仿和反復(fù)凍融敏感。

2.微生物檢驗

可用電鏡或免疫電鏡技術(shù)檢測患者糞便中的HEV顆粒。

PCR方法檢測標(biāo)本中HEVRNA。

臨床常用的診斷方法是檢測血清中的抗HEVIgM或IgG。

3.臨床意義

主要經(jīng)糞-口途徑傳播，患者多見于成人，未成年者大多為隱性感染。

戊型肝炎的潛伏期約為10?60天，潛伏期末和急性期初的患者糞便中病毒量較大，傳染性最強，是戊

型肝炎的主要傳染源。

臨床表現(xiàn)以黃疸為主多數(shù)患者發(fā)病6周即可好轉(zhuǎn)并痊愈，不發(fā)展為慢性肝炎。

八、反轉(zhuǎn)錄病毒

帶有以RNA為模板合成DNA的反轉(zhuǎn)錄酶。

人類免疫缺陷病毒

人類免疫缺陷病毒(HIV)在病毒分類學(xué)上屬反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒亞科慢病毒屬。

已發(fā)現(xiàn)有HIV-1和HIV-2兩型：

HIV-1是引起全球艾滋病流行的病原體；

HIV-2主要局限于西部非洲。

1.生物學(xué)特性

(1)形態(tài)結(jié)構(gòu)：

RNA病毒，呈球形。

核心含有RNA.逆轉(zhuǎn)錄酶和核衣殼蛋白。

包膜，其中鑲嵌有如120和gp41兩種特異的糖蛋白。

gpl20與CD4受體蛋白結(jié)合。

gp41為跨膜蛋白。

由兩條拷貝的單股正鏈RNA在5'端通過氫鍵結(jié)合而形成二聚體。

基因組從5'至3'端依次排列為LTR、gag,pol>env>LTR：

gag基因編碼病毒核心蛋白，其中衣殼蛋白p24特異性最強。

pol基因編碼病毒復(fù)制所需的酶類。

env基因編碼合成兩種包膜糖蛋白gpl20和gp41。

(3)病毒的復(fù)制:

吸附

穿入

脫殼

生物合成

裝配

釋放

(4)病毒受體與細(xì)胞親嗜性：

HIV的主要靶細(xì)胞是CD4T淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞亞群。皮膚的Langerhans細(xì)胞、淋巴結(jié)濾泡的樹

突狀細(xì)胞、腦小膠質(zhì)細(xì)胞等也是感染的對象。

CD4分子是HIV的主要受體，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)兩種輔助受體CXCR4和CCR5。CXCR4是HIV的親T細(xì)胞病毒株

的輔助受體，CCR5是HIV的親巨噬細(xì)胞病毒株的輔助受體。

(5)培養(yǎng)特性：

體外僅感染表面有CD4受體的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞。

實驗室常用新鮮分離的正常人T細(xì)胞或病人自身分離的T細(xì)胞培養(yǎng)病毒。

(6)抵抗力：

病毒抵抗力較弱，56℃30分鐘可滅活?？杀幌緞缁睢５谑覝夭《净钚钥杀３?天。

2.微生物檢查

(1)病毒標(biāo)志：

病毒培養(yǎng)：分離HIV。

分子生物學(xué)方法：檢測HIVRNA。

（2）免疫標(biāo)志：HIV抗原及抗體等免疫復(fù)合物。

1）抗原檢測：常用間接ELISA法檢測p24抗原。

2）抗體檢測：抗p24及其前體p55的抗體在血清中出現(xiàn)最早，隨后出現(xiàn)抗gp120/160的抗體,是初

期感染的最穩(wěn)定的指標(biāo)?？筽41的抗體常在p24抗體出現(xiàn)后數(shù)周才出現(xiàn)。

①初篩試驗：EIA.IFA.凝集試驗等。

②確證試驗：免疫印跡實驗（Westernbolt,WB）、放射免疫沉淀試驗。

3）相關(guān)標(biāo)志：

與艾滋病病情發(fā)展或HIV感染密切相關(guān)而存在于體內(nèi)的某些生化或化學(xué)物質(zhì)。如CD4細(xì)胞、新蝶吟、

白細(xì)胞介素等。

3.臨床意義

HIV是獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS,艾滋?。┑牟≡w。

AIDS是以侵犯CD4細(xì)胞為主，造成細(xì)胞免疫功能缺陷，并繼發(fā)體液免疫功能缺損為基本特征的傳染病。

傳染源是HIV無癥狀攜帶者和艾滋病患者。

傳播途徑主要有：性接觸傳播、血液傳播、母嬰傳播。

臨床病程分為4個時期，即急性感染期、無癥狀感染期、艾滋病相關(guān)綜合征、艾滋?。ò滩⊥耆停?/p>

HIV的致病機制：

HIV直接損傷或間接損傷CD4T細(xì)胞；

HIV抑制抗原遞呈細(xì)胞功能；

HIV誘發(fā)自身免疫性疾病及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；

IIIV導(dǎo)致CD8T細(xì)胞喪失抗病毒活性等。

機體感染HIV后可產(chǎn)生多種抗體，病毒也可刺激機體產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，但依然無法清除病毒，這與

病毒能逃逸免疫作用有關(guān)。

九、狂犬病病毒

（一）生物學(xué)性狀

外形似了彈狀,病毒體內(nèi)含單負(fù)股RNA,外面是脂蛋白包膜，其表面有許多糖蛋白刺突，與病毒的感染

性和毒力有關(guān)。

一種嗜神經(jīng)性病毒。

該病毒可感染的動物范圍較廣。

在易感動物或人類的中樞神經(jīng)細(xì)胞中增殖時，在胞質(zhì)內(nèi)形成嗜酸性包涵體，稱內(nèi)基小體，在診斷上很

有價值。

（二）微生物檢驗

L隔離觀察動物

若7?10天不發(fā)病，一般認(rèn)為該動物沒有患狂犬病或咬人時唾液中尚無狂犬病病毒。

2.印片、切片檢查

取帶病毒動物海馬回部組織作切片或涂片，

HE染色檢查內(nèi)基小體；

直接熒光抗體法（DFA）或ELISA法檢測病毒抗原。

3.細(xì)胞培養(yǎng)

接種敏感細(xì)胞，培養(yǎng)40?48小時后，用DFA進行病毒抗原檢測，如果陰性進行第二代培養(yǎng)，經(jīng)3?4

天，再用DFA檢查是否有病毒生長，如果二次培養(yǎng)均陰性，則最終視為陰性。

4.血清學(xué)診斷

中和試驗、補體結(jié)合試驗、血凝抑制試驗、ELISA試驗等。

5.分子生物學(xué)

RT-PCR技術(shù)檢測標(biāo)本中狂犬病毒RNA,此方法敏感、快速、特異。

（三）臨床意義

人類狂犬病大多數(shù)是由病犬咬傷所致，有時也可因貓、狼以及其他帶菌動物咬傷所致。

典型臨床表現(xiàn)是神經(jīng)興奮性增高，吞咽或飲水時喉頭肌痙攣，甚至聞水聲或其他輕微刺激包括光線均

可引起全身痙攣發(fā)作，又稱恐水病。發(fā)病3?5天后患者轉(zhuǎn)入麻痹期，最后因昏迷、呼吸循環(huán)衰竭而死亡。

死亡率幾乎達(dá)100%。

十、人乳頭瘤病毒

（-）生物學(xué)性狀

由病毒衣殼和雙鏈環(huán)狀DNA組成。

具有宿主和組織特異性，只能感染人的皮膚、黏膜的上皮細(xì)胞。

易感細(xì)胞核內(nèi)增殖形成核內(nèi)嗜酸性包涵體。

目前HPV組織培養(yǎng)尚未成功。

（二）微生物檢驗

臨床常根據(jù)病史及典型的臨床表現(xiàn)即可作出診斷。

癥狀不典型：

病理學(xué)檢查或用免疫組化技術(shù)等方法檢查病變組織中的I1PV抗原。

分子生物學(xué)診斷方法有：核酸分析、原位雜交、DNA印跡、PCR?

（三）臨床意義

HPV可通過性接觸感染，引起尖銳濕疣。也可經(jīng)產(chǎn)道感染。

病毒感染僅局限于局部皮膚和黏膜中，引起該部位多種疣，不產(chǎn)生病毒血癥。

尖銳濕疣主要由HPV-6引起，也可由1、2等型引起。

HPVT6、18、31、33等型別可引起宮頸內(nèi)瘤樣變，組織學(xué)變化可由宮頸上皮的不典型增生至原位癌，

嚴(yán)重者可發(fā)展為浸潤癌。

【例題】病毒與立克次體的主要相同點是

A.細(xì)胞內(nèi)寄生

B.繁殖方式

C.對抗生素敏感

D.單一核酸類型

E.可在人工培養(yǎng)基生長

。[答疑編號502389270301]

【正確答案】A

【例題】病毒的干擾