動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

動物細(xì)胞工程其中，動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的根底。動物細(xì)胞工程

常用的技術(shù)手段動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞核移植動物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體第一頁，共二十四頁。燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植。但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？思考？第二頁，共二十四頁。取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得人造皮膚后再移植。第三頁，共二十四頁。〔一〕、概念

是指從動物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖?！捕?、原理細(xì)胞分裂增殖一、動物細(xì)胞培養(yǎng)第四頁，共二十四頁。(三)、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程取動物組織塊剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的根底剪碎組織及胰蛋白酶處理的目的？剪碎組織及胰蛋白酶處理的目的：將組織分散成單個細(xì)胞，有利于細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)。制成細(xì)胞懸液動物胚胎或幼齡動物器官因為這些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。第五頁，共二十四頁?！菜摹硠游锛?xì)胞生長特性1.細(xì)胞貼壁：細(xì)胞懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)外表光滑無毒、易于貼附。2.接觸抑制第六頁，共二十四頁。接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到外表相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。50代以后失去接觸抑制接觸抑制〔細(xì)胞為單層〕50代以后細(xì)胞失去接觸抑制第七頁，共二十四頁。原代培養(yǎng)：

人們通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：

貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。第八頁，共二十四頁。培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動物的細(xì)胞、組織或器官細(xì)胞懸浮液→原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代單個細(xì)胞胰蛋白酶加培養(yǎng)液剪碎細(xì)胞貼壁剝離分瓶局部細(xì)胞的細(xì)胞核型發(fā)生變化動物細(xì)胞培養(yǎng)最終不能培養(yǎng)成動物體接觸抑制第九頁，共二十四頁。培養(yǎng)器皿第十頁，共二十四頁。

超凈工作臺實驗設(shè)備細(xì)胞培養(yǎng)箱倒置顯微鏡第十一頁，共二十四頁?！参濉?、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件1、無菌、無毒的環(huán)境〔①添加一定量的抗生素；②定期更換培養(yǎng)液〕2、營養(yǎng)〔葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等〕3、溫度和PH溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境O2和CO2〔95%空氣和5%CO2〕〔使用合成培養(yǎng)基時，需參加血清、血漿等〕補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，如血清激素、氨基酸等。CO2有調(diào)節(jié)PH的作用。第十二頁，共二十四頁。思考與討論1、進(jìn)行動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)時用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？2、胰蛋白酶真的不會把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？主要是蛋白質(zhì)。不行，因為動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜PH為7.2—7.4，而胃蛋白酶適宜PH為2.0，胃蛋白酶會失去活性。長時間會消化細(xì)胞膜蛋白，對細(xì)胞有損傷作用。所以應(yīng)控制好胰蛋白酶的消化時間。P44第十三頁，共二十四頁。3、動物細(xì)胞培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)基相比，有何獨特之處？4、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？動物細(xì)胞培養(yǎng)液的獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體第十四頁，共二十四頁。植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較工程植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基性質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖動物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細(xì)胞數(shù)目增多培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白第十五頁，共二十四頁。動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等健康細(xì)胞培養(yǎng)：如獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。用于檢測有毒物質(zhì)用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)第十六頁，共二十四頁。P50

動物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化過程嗎？為什么？

不經(jīng)過。因為高度分化的動物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力。第十七頁，共二十四頁。二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物

1.概念：將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。核移植受體細(xì)胞：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易

用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。2.原理：動物體細(xì)胞核的全能性?！搽y度高〕MⅡ期的卵母細(xì)胞第十八頁，共二十四頁。選用去核卵母細(xì)胞的原因：①卵母細(xì)胞比較大，容易操作；②細(xì)胞質(zhì)多，營養(yǎng)豐富，含有促進(jìn)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)。②胚胎移植

①動物細(xì)胞核移植原理：動物細(xì)胞核具有全能性和細(xì)胞膜的流動性第十九頁，共二十四頁。討論：1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物。P49第二十頁，共二十四頁。2.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10～50代左右時，局部細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。第二十一頁，共二十四頁。3.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是。①克隆動物絕大局部DNA來自于供體細(xì)胞核，