新版微生物的分類和鑒定

第一節(jié)微生物純培養(yǎng)和顯微技術一、微生物分離二、微生物保藏技術三、微生物顯微技術新版微生物的分類和鑒定第1頁一、微生物分離（一）稀釋平皿分離法（二）平皿劃線分離法（三）稀釋搖管法（四）單孢挑取法（五）選擇性培養(yǎng)基分離法新版微生物的分類和鑒定第2頁微生物純培養(yǎng)自然環(huán)境如土壤和水中，通常棲息著是許多不一樣微生物混雜在一起群體要研究微生物生長，首先必須把它從混雜微生物類群中分離出來純培養(yǎng)（pureculture）：微生物學中將在試驗條件下從一個單細胞繁殖得到后代新版微生物的分類和鑒定第3頁（一）稀釋平皿分離法稀釋平皿分離法：將分離樣品作一系列稀釋，使樣品中微生物細胞充分分散，并培養(yǎng)于瓊脂平皿上（內）長出微生物菌落方法假如稀釋度適當，就可出現分散單菌落，它可能就是由一個微生物細胞或同源細胞組成微菌落繁殖形成挑取該單菌落，便可得到純培養(yǎng)新版微生物的分類和鑒定第4頁新版微生物的分類和鑒定第5頁一、微生物分離（一）稀釋平皿分離法（二）平皿劃線分離法（三）稀釋搖管法（四）單孢挑取法（五）選擇性培養(yǎng)基分離法新版微生物的分類和鑒定第6頁（二）平皿劃線分離法平皿劃線分離法：倒置瓊脂平皿，用無菌接種環(huán)挑取一定量待分離材料，在培養(yǎng)基表面經過各種方式劃線而到達分離目標這種方法是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面屢次作“由點到面”逐步稀釋，劃到最終，常能夠形成單菌落挑取該單菌落，便可得到純培養(yǎng)新版微生物的分類和鑒定第7頁新版微生物的分類和鑒定第8頁一、微生物分離（一）稀釋平皿分離法（二）平皿劃線分離法（三）稀釋搖管法（四）單孢挑取法（五）選擇性培養(yǎng)基分離法新版微生物的分類和鑒定第9頁（三）稀釋搖管法稀釋搖管法：對氧氣敏感厭氧性微生物所采取分離方法；將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基試管加熱使瓊脂熔化后，冷卻并保持在50℃左右，用這些試管進行梯度稀釋待分離材料，試管均勻，冷凝，傾注一層滅菌液體石蠟和固體石蠟混合物，將培養(yǎng)基和空氣隔開培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱中間，挑取和移植單菌落新版微生物的分類和鑒定第10頁新版微生物的分類和鑒定第11頁一、微生物分離（一）稀釋平皿分離法（二）平皿劃線分離法（三）稀釋搖管法（四）單孢挑取法（五）選擇性培養(yǎng)基分離法新版微生物的分類和鑒定第12頁（四）單孢挑取法單孢挑取法：首先對樣品進行充分稀釋，用單孢操作器在解剖顯微鏡下將一個單獨細胞或孢子直接挑選而出，接種在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使之形成單菌落此法慣用于真菌單孢子分離，需要熟練技術新版微生物的分類和鑒定第13頁新版微生物的分類和鑒定第14頁一、微生物分離（一）稀釋平皿分離法（二）平皿劃線分離法（三）稀釋搖管法（四）單孢挑取法（五）選擇性培養(yǎng)基分離法新版微生物的分類和鑒定第15頁（五）選擇性培養(yǎng)基分離法選擇性培養(yǎng)基分離法：采取適宜選擇性培養(yǎng)基能自微生物混雜基質內分離和判定某種微生物方法不一樣微生物對營養(yǎng)物質和環(huán)境原因要求不一樣：如在不含氮素Ashby培養(yǎng)基可用于篩選固氮細菌不一樣微生物對不一樣化學試劑如消毒劑、染料、抗生素等含有不一樣程度抵抗能力：如加入青霉素培養(yǎng)基能抑制大多數革蘭氏陽性細菌生長新版微生物的分類和鑒定第16頁新版微生物的分類和鑒定第17頁二、微生物保藏技術（一）菌種保藏目標與原理（二）菌種保藏方法新版微生物的分類和鑒定第18頁（一）菌種保藏目標與原理菌種保藏：就是依據微生物菌種特征及保藏目標不一樣，給菌種以特定條件，使其存活而得以延續(xù)目標：搜集各種研究、教學和生產性菌種；高質量保藏；可提供交換和使用基本原理：將菌種保留于不良環(huán)境中，如干燥、低溫、缺氧、黑暗、營養(yǎng)饑餓等而使其代謝速率極為遲緩或處于休眠狀態(tài)；或將菌種不停在新鮮培養(yǎng)基上轉接傳代新版微生物的分類和鑒定第19頁二、微生物保藏技術（一）菌種保藏目標與原理（二）菌種保藏方法新版微生物的分類和鑒定第20頁（二）菌種保藏方法方法原理適宜菌種保藏時間特點斜面冰箱保藏低溫、傳代各大類微生物3~6月短期、簡便石蠟油封藏低溫、缺氧各大類微生物1~2年簡便、中期砂土管保藏干燥、無營養(yǎng)產芽孢或產孢微生物1~10年簡便、中長久凍干管保藏干燥、無氧、無營養(yǎng)各大類微生物5~15年以上繁瑣、長久新版微生物的分類和鑒定第21頁新版微生物的分類和鑒定第22頁新版微生物的分類和鑒定第23頁新版微生物的分類和鑒定第24頁新版微生物的分類和鑒定第25頁1、國內部分菌種保藏中心普通微生物菌種保藏管理中心(CCGMC)：中科院微生物所，北京(AS)，真菌、細菌；中科院武漢病毒研究所，武漢(AS-IV)，病毒工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)：輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學研究所，南京(ID)，真菌；衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所，北京(NICPBP)，細菌；中國醫(yī)學科學院病毒研究所，北京(IV)，病毒新版微生物的分類和鑒定第26頁2、國外部分菌種保藏中心美國：經典菌種保藏中心（ATCC）；北部地域研究試驗室（NRRL）英國：國家經典菌種保藏中心（NCTC）日本：大阪發(fā)酵研究所（IFO）新版微生物的分類和鑒定第27頁三、微生物顯微技術（一）顯微鏡種類及原理（二）微生物顯微技術新版微生物的分類和鑒定第28頁（一）顯微鏡種類及原理1、普通光學顯微鏡2、暗視野顯微鏡3、相差顯微鏡4、熒光顯微鏡5、透射電子顯微鏡6、掃描電子顯微鏡新版微生物的分類和鑒定第29頁新版微生物的分類和鑒定第30頁三、微生物顯微技術（一）顯微鏡種類及原理（二）微生物顯微技術新版微生物的分類和鑒定第31頁（二）微生物顯微技術1、活體觀察2、染色觀察新版微生物的分類和鑒定第32頁1、活體觀察活體觀察：可采取壓滴法、懸滴法及菌絲埋片法等在明視野、暗視野或相差顯微鏡下對微生物活體進行直接觀察應用：可用于專門研究微生物運動能力、攝食特征及生長過程中形態(tài)改變，如細胞分裂、芽孢萌發(fā)等動態(tài)過程優(yōu)點：能夠防止普通染色制樣時固定作用對微生物細胞結構破壞新版微生物的分類和鑒定第33頁新版微生物的分類和鑒定第34頁2、染色觀察染色觀察：經過染色，將微生物細胞浸入染色劑內，使菌體細胞某一部分染上與其它部分不一樣顏色或深度不一樣顏色，產生不一樣折射率，方便觀察染色方法：革蘭氏染色、芽孢染色、莢膜染色新版微生物的分類和鑒定第35頁新版微生物的分類和鑒定第36頁第一章微生物分類與判定

（4課時）第一節(jié)微生物純培養(yǎng)和顯微技術（2課時）第二節(jié)微生物分類與判定（2課時）新版微生物的分類和鑒定第37頁第二節(jié)微生物分類與判定一、微生物分類二、微生物判定新版微生物的分類和鑒定第38頁分類、判定與命名分類（classification）：依據各種生物相同性和進化關系將其分為類群，排放在適當分類單元中判定（identification）：是分類操作過程，經過一系列測定來確定所研究菌株屬于哪個類群命名（nomenclature）：依據命名國際法規(guī)對所判定菌株給以科學名稱（學名）新版微生物的分類和鑒定第39頁一、微生物分類（一）微生物分類單元（二）微生物命名（三）微生物分類方法（四）微生物分類系統新版微生物的分類和鑒定第40頁（一）微生物分類單元界Kingdom

門Phylum

綱Class

目Order

科Family

屬Genus

種Species-----------------------

亞種subspecies，subsp.

變型variety，var.新版微生物的分類和鑒定第41頁1、種概念種（species）：微生物分類基本單位；是指以某個“標準菌株”為代表含有高度特征相同性菌株群菌株（strain）：是單個微生物細胞在人工培養(yǎng)基上繁殖而來純培養(yǎng)物；它是微生物分類和研究工作中最基本操作實體分離物（isolate）：是指已分離到但還未判定純培養(yǎng)物新版微生物的分類和鑒定第42頁2、變型概念變型（variety，var.）：是指微生物種以下，用一些特殊特征加以區(qū)分類群血清變型（serovar）：表示抗原結構不一樣生物變型（biovar）：表示特殊生化或生理特征致病變型（pathovar）：表示某專一致病性噬菌體變型（phagovar）：表示對噬菌體特異性反應形態(tài)變型（morphovar）：表示特殊形態(tài)特征新版微生物的分類和鑒定第43頁一、微生物分類（一）微生物分類單元（二）微生物命名（三）微生物分類方法（四）微生物分類系統新版微生物的分類和鑒定第44頁1、雙名法依照國際命名法則，采取瑞典科學家林奈（CarlvonLinne）在1753年提出雙名法：例1.金黃色葡萄球菌

StreptococcusaureusRosenhach1884例2.枯草芽孢桿菌

Bacillusubtilis（Ehrenberg）Cohn1872（二）微生物命名斜體字正體字（普通省略）學名=屬名+種加詞+（首次定名人）+現名定名人+現名定名年份新版微生物的分類和鑒定第45頁2、三名法學名=屬名+種加詞+符號subsp.或var.+亞種或變種加詞斜體字正體字（普通省略）斜體字例1.蘇云金芽孢桿菌臘螟亞種

Bacillusthuringiensissubsp.galleria例2.丁香假單胞煙草致病變種

Pseudomonassyringaepv.tabaci新版微生物的分類和鑒定第46頁一、微生物分類（一）微生物分類單元（二）微生物命名（三）微生物分類方法（四）微生物分類系統新版微生物的分類和鑒定第47頁（三）微生物分類方法1、經典分類法2、化學分類法3、數值分類法4、分子遺傳學分類法新版微生物的分類和鑒定第48頁1、經典分類法經典分類法（classictaxonomy）：最慣用微生物分類方法，以形態(tài)學特征、生理生化特征、生態(tài)學特征等為依據，對微生物進行分類科以上分類以形態(tài)結構特征為主，而科以下則以其生理生化特征和生態(tài)學特征為主新版微生物的分類和鑒定第49頁2、化學分類法化學分類法（chemotaxonomy）：依據微生物細胞結構或其代謝產物化學組分分析結果，對微生物進行分類方法，可作為微生物分類輔助伎倆分析方法：血清學檢測、氣相或液相色譜分析、質譜分析、凝膠電泳等新版微生物的分類和鑒定第50頁3、數值分類法數值分類法（numericaltaxonomy）：依據被判定微生物與某類群之間相同性而進行歸類程序：選擇菌株和待測性狀→性狀編碼（＋為1，－為0）→菌株間相同性計算→聚類分析（大于85%為同種，大于65%為同屬）→樹狀圖或矩形圖新版微生物的分類和鑒定第51頁4、分子遺傳學分類法分子遺傳學分類法：依據遺傳學指標（即遺傳機制和生物大分子，如DNA、蛋白質等組成）對微生物進行分類項目：DNAG+Cmol%分析、DNA-DNA雜交、DNA-rRNA雜交、16srRNA或18srRNA堿基序列分析等新版微生物的分類和鑒定第52頁一、微生物分類（一）微生物分類單元（二）微生物命名（三）微生物分類方法（四）微生物分類系統新版微生物的分類和鑒定第53頁（四）微生物分類系統惠特克（Whittaker,1969）五界系統：動物界，植物界，原生生物界，真菌界，原核生物界沃斯（Woese，1978）三域六界系統：古細菌域，僅有古細菌界；真細菌域，僅有真細菌界；真核生物域，包含原生生物界、真菌界、植物界和動物界新版微生物的分類和鑒定第54頁動物界植物界二界系統1753年，瑞典學者CarolusLinnaeus：依據是具運動性和吞食性還是行固著生活和自養(yǎng)，提出把生物分為動物界(Animalis)和植物界(Plantas)

新版微生物的分類和鑒定第55頁動物界植物界原生生物界三界系統

1860年，德國動物學家Haeckel：提議在動物界和植物界之外，增加一個由低等生物組成第三界---原生生物界(Protista)，包含菌類、低等藻類、原生動物等

新版微生物的分類和鑒定第56頁四界系統動物界植物界原生生物界原核生物界1956年，Copeland：動物界、植物界、原生生物界（包含原生動物、真菌、部分藻類）和原核生物界(Prokaryota)

（包含細菌和藍細菌）新版微生物的分類和鑒定第57頁1969年，Whittaker：依據營養(yǎng)方式不一樣，認為應將真菌獨立出，而把生物重新劃分為動物界、植物界、原生生物界、真菌界(Fungi)和原核生物界五界系統1977年，中國學者陳世驤：提議在五界系統基礎上，將病毒(Virus)和類病毒(Viroids)另立為病毒界，從而形成了六界系統病毒界動物界植物界真菌界原核生物界原生生物界新版微生物的分類和鑒定第58頁三域學說

1978年，美國C.R.Woese等：對生物進行16S和18SrRNA堿基測序并比較其同源性，提出了三域六界系統,即古細菌域(Archaebacteria),僅有古細菌界；真細菌域(Eubacteria),僅有真細菌界;真核生物域(Eucaryotes)，包含原生生物界、真菌界、植物界和動物界真細菌域古細菌域真核生物域三域六界系統新版微生物的分類和鑒定第59頁八界系統1989年，CavalierSmith：提出了八界系統,即古細菌界、真細菌界、古真核生物界、原生動物界、藻界(Chromista)、植物界、真菌界和動物界

真細菌界植物界真菌界動物界古細菌界原生動物界藻界古真核生物界新版微生物的分類和鑒定第60頁二、微生物判定（一）形態(tài)學特征測定（二）生理生化特征測定（三）血清學試驗（四）核酸堿基序列分析（五）蛋白質氨基酸序列分析新版微生物的分類和鑒定第61頁（一）形態(tài)學特征測定細胞形態(tài)與結構：細胞形態(tài)、大小與排列方式，細胞結構與染色反應等培養(yǎng)性狀：菌落形態(tài)、斜面菌苔特征、液體培養(yǎng)特征等新版微生物的分類和鑒定第62頁新版微生物的分類和鑒定第63頁新版微生物的分類和鑒定第64頁二、微生物判定（一）形態(tài)學特征測定（二）生理生化特征測定（三）血清學試驗（四）核酸堿基序列分析（五）蛋白質氨基酸序列分析新版微生物的分類和鑒定第65頁（二）生理生化特征測定營養(yǎng)類型：光合自養(yǎng)、光合異養(yǎng)、化能自養(yǎng)和化能異養(yǎng)等生態(tài)學條件：溫度生長測定、好氧性測定、最適pH值測定、耐鹽性測定等對碳源利用：各種單糖、雙糖、多糖以及醇類、有機酸等對氮源利用：蛋白胨、氨基酸、含氮無機鹽、N2等對生長因子需要：維生素、氨基酸等對抑菌劑敏感性：抗生素、消毒劑、防腐劑等新版微生物的分類和鑒定第66頁大腸桿菌幾項生理生化測定結果新版微生物的分類和鑒定第67頁API細菌數值判定系統新版微生物的分類和鑒定第68頁二、微生物判定（一）形態(tài)學特征測定（二）生理生化特征測定（三）血清學試驗（四）核酸堿基序列分析（五）蛋白質氨基酸序列分析新版微生物的分類和鑒定第69頁（三）血清學試驗抗血清制備：微生物細胞或代謝產物注射小白鼠或家兔，采血后制備成抗血清凝聚試驗：制備待檢菌菌懸液；取1滴于潔凈玻片上，加入抗血清混合，10s內觀察菌體凝聚現象新版微生物的分類和鑒定第70頁二、微生物判定（一）形態(tài)學特征測定（二）生理生化特征測定（三）血清學試驗（四）核酸堿基序列分析（五）蛋白質氨基酸序列分析新版微生物的分類和鑒定第71頁（四）核酸堿基序列分析1、