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DB21DB21/T2592.3—2016雞傳染性疾病檢測方法第3部分：雞馬立克氏病毒實時熒光PCR檢測方法DetectionmethodofchickeninfectiousdiseasePart3:Thetestingmethodofreal-timefluorescentPCRforchickenMarek'sdisease遼寧省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 5——雞傳染性法氏囊病毒實時熒光RT-PCR檢測方法——雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測方法——雞馬立克氏病毒實時熒光PCR檢測方法本部分起草單位：遼寧省動物疫病預防控制中心、遼寧省動物1件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用DNA：脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic實時熒光PCR：實時熒光聚合酶鏈式反應（real-timefluore4儀器與器材4.1.2高速離心機4.1.6微量移液器（最大量程為2μL，20μL，200μL，25.1DNAzol?Reagent：DNA抽提試劑，外觀為淡綠色，于4℃~8℃保存。5.575%乙醇：用無水乙醇和滅菌雙皮膚要選病變明顯部分的邊緣，采取少許放入1.5mL離心羽毛選病變明顯部分，用刀片刮取羽毛及根部的皮屑少許，放入1.5mL離心管將產生馬立克氏病毒蝕斑的細胞培養(yǎng)物凍融3次，轉入1.5mL離心管采集的樣品在2℃~8℃條件下保存應不超過24h；若需長期保存，應放置-70℃冰箱，但應避免送到實驗室。按照《獸醫(yī)實驗室生物安全技術管理規(guī)范》進行樣品生物3在樣本處理區(qū)進行。在各設定的熒光PCR管或96孔板4Ct值>30.0，且出現(xiàn)擴增曲線的樣本判定為可疑?？梢蓸颖具M行雙孔重復試驗，若任一孔或兩孔重復試驗結果Ct值≤30.0并出現(xiàn)典型擴增5A.10.02mol/LpH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）A.1.10.2mol/L磷酸氫二鈉溶液：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H20）71.A.1.20.2mol/L磷酸二氫鈉溶液：稱取磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H20）31.21g，先加適量去離子水溶A.1.3

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