T-DALN 037-2024 青貯飼料有機(jī)酸含量的測(cè)定高效液相色譜法

IICS65.120CCSB40T/DALN037-2024Determinationoforganicacidcontentinsilage—High-performance2024-05-20發(fā)布1T/DALN037-2024本文件按GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)則起本文件由沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)提出。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省奶業(yè)協(xié)會(huì)歸口。本文件起草單位：遼寧省奶業(yè)協(xié)會(huì)、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)、遼寧奉牧聯(lián)合奶業(yè)有限公司。本文件主要起草人：白春生、李曉明、趙波、徐環(huán)宇、佟艷、周叢。本文件首次發(fā)布。1T/DALN037-2024青貯飼料有機(jī)酸含量的測(cè)定高效液相色譜法本文件規(guī)定了青貯飼料中4種有機(jī)酸（乳酸、乙酸、丙酸和丁酸）含量的測(cè)定方法——高效液相色譜法。本文件適用于青貯飼料樣品中4種有機(jī)酸（乳酸、乙酸、丙酸和丁酸）含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6435GB/T6682NY/T2129飼料中水分的測(cè)定分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法飼草產(chǎn)品抽樣技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理將青貯飼料樣品加水勻漿制備為浸提液后，用離子交換色譜柱分離，利用高效液相色譜儀的紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)210nm處測(cè)定，相對(duì)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5試劑或材料如無特殊說明，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1濃硫酸（H2SO4），色譜純。5.2乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（CH3CHCOOH，CAS號(hào)：79-33-4），純度≥98%。5.3乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（CH3COOH，CAS號(hào)：64-19-7），純度≥99%。5.4丙酸標(biāo)準(zhǔn)品（CH3CH2COOH，CAS號(hào)：79-09-4），純度≥99%。5.5丁酸標(biāo)準(zhǔn)品（CH3CH2CH2COOH，CAS號(hào)：107-92-6），純度≥99%。5.62.5mmol/L硫酸溶液：準(zhǔn)確稱取0.5152g濃硫酸（4.1），用水定容至2L容量瓶，混勻。5.7標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取乳酸（4.2）0.1g、乙酸（4.3）0.1g、丙酸（4.4）0.05g、丁酸（4.5）2T/DALN037-20240.05g，精確至0.0001g，用水定容至10mL。儲(chǔ)備液中乳酸、乙酸、丙酸和丁酸濃度分別為100mg/mL、100mg/mL、50mg/mL和50mg/mL。于4℃保存，保存期3個(gè)月。5.8標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.7）0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、3.00mL，用水定容于10mL?，F(xiàn)配現(xiàn)用。5.9水系微孔濾膜：0.45μm。6儀器設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。6.2電子天平：感量0.1g和0.1mg。6.3組織搗碎機(jī)。6.4電熱鼓風(fēng)干燥箱。7樣品采集與浸提液制備7.1青貯飼料樣品采集按照NY/T2129規(guī)定執(zhí)行。7.2青貯飼料的干物質(zhì)含量測(cè)定按照GB/T6435規(guī)定執(zhí)行。7.3浸提液制備稱取青貯飼料樣品20g，精確至0.1g，加入180mL水，組織搗碎機(jī)勻漿1min，用4層紗布粗濾，之后經(jīng)定性濾紙過濾得青貯飼料浸提液。浸提液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后待測(cè)。8試驗(yàn)步驟8.1色譜參考條件8.1.1色譜柱：離子交換色譜柱，5μm，7.8mm×300mm（或相當(dāng)型號(hào)色譜柱）。8.1.2流動(dòng)相：2.5mmol/L硫酸溶液（4.6）。8.1.3流速：0.6mL/min。8.1.4柱溫：55℃。8.1.5檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。8.1.6進(jìn)樣量：10μL。8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制3T/DALN037-2024將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖參見附錄A的圖A.1。8.3樣品測(cè)定將青貯飼料樣品浸提液（見6.3）注入高效液相色譜儀中，得到相應(yīng)的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到浸提液中各種有機(jī)酸的濃度。9結(jié)果的表述樣品中的4種有機(jī)酸含量按式（1）計(jì)算：式中：X——樣品中各組分的含量，單位為百分比（%）；c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品浸提液中各組分的含量，單位為毫克每毫升（mg/mLV——制備浸提液時(shí)水的體積，單位為毫升（mL）；m——制備浸提液是的樣品質(zhì)量，單位為克（g）；d——青貯飼料的干物質(zhì)含量，單位為百分比（%）。計(jì)算結(jié)果保