高中生物-檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)

第一章細(xì)胞的分子組成第三節(jié)有機化合物及生物大分子實驗1：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)實驗：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)實驗原理：某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)?；瘜W(xué)試劑+有機化合物→特定的顏色①還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀②脂肪+蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）染液→橘黃色（或紅色）③蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑→紫色④淀粉+碘→藍色水浴加熱一、可溶性還原糖的檢測：（1）原理：還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀。(除多糖和蔗糖以外其他的糖類都是還原性糖)（2）選材：梨、白蘿卜。含糖量較高，顏色為白色或近于白色的植物組織。（注意事項；材料要含糖量高且無色）（3）檢測過程：水浴加熱振蕩混勻50～65℃水浴加熱2min2mL組織樣液剛配制的斐林試劑2mL呈現(xiàn)淺藍色變成磚紅色（Cu2O）還原糖：含有半縮醛羥基的糖類，主要是葡萄糖、果糖和麥芽糖。蔗糖、淀粉和纖維素屬于非還原糖。

斐林試劑是等量混合的A液0.1g/mL的NaOH溶液與B液0.05g/mL的CuSO4溶液，立即生成淡藍色的Cu（OH）2懸濁液。Cu（OH）2與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀。因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶性還原糖。R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O注意事項；1、甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。2、需水浴加熱還原糖的檢測結(jié)果斐林試劑與可溶性還原糖在水浴熱的條件下，生成磚紅色的Cu2O沉淀。-CHO+Cu(OH)2懸濁液-COOH+Cu2O↓（磚紅色）二、脂肪的檢測（1）選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。（2）檢測過程：制片選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央制成臨時裝片：滴12滴蒸餾水，蓋上蓋玻片染色：在薄片上滴加23滴蘇丹Ⅲ染液，染色23min洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精12滴鏡檢觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。蘇三（蘇丹Ⅲ）送了我一個橘黃色的胭脂（脂肪）切片：花生種子（浸泡３－４h），去皮，將子葉削成薄片。視野中有橘黃色顆粒橘黃色小圓顆粒即為脂肪顆粒脂肪+蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）染液橘黃色（或紅色）注意事項：（1）若用花生種子作實驗材料，必須提前浸泡3～4小時，浸泡時間短了，不容易切片，浸泡時間過長，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。（2）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解蘇丹Ⅲ），染色和洗浮色時間不宜過長。（3）需要顯微鏡觀察三、蛋白質(zhì)的檢測：（1）原理：蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑紫色絡(luò)合物（2）選材：黃豆、雞蛋清（稀釋）、牛奶、豆?jié){（3）檢測過程：2ml組織樣液2ml雙縮脲試劑A液，搖勻3-4滴雙縮脲試劑B液，搖勻觀察顏色變化紫色雙（雙縮脲）子（紫色）彈（蛋白質(zhì)）無色紫色（創(chuàng)造堿性條件）（提供Cu2+）雙縮脲試劑B3-4滴雙縮脲試劑A2mL2mL組織樣液在堿性條件（NaOH）下，蛋白質(zhì)中的肽鍵（—NH—CO—）與Cu2＋作用生生紫色絡(luò)合物。注意事項；1、操作時，應(yīng)先加A再加B，且A多B少，如果B過量，Cu2＋的藍色就會遮蓋生成的紫色。2、不需加熱制備組織樣液黃豆組織樣液（或雞蛋清稀釋液）黃豆浸泡研磨過濾濾液去皮、切片蛋清液雞蛋雞蛋清稀釋液稀釋顯色反應(yīng)向試管中注入2ml組織樣液向試管中注入2ml雙縮脲試劑A加入3-4滴雙縮脲試劑B觀察現(xiàn)象觀察顏色變化：無→紫色結(jié)論：加入雙縮脲試劑A后，顏色呈現(xiàn)為無色，加入B后，變?yōu)樽仙f明雞蛋清中有蛋白質(zhì)存在。蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果注意事項：（1）如果用雞蛋清作為材料，則必須進行充分稀釋，否則反應(yīng)后的產(chǎn)物會粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗刷干凈。（2）【雙縮脲試劑】：A液：0.1g/mLNaOH，B液：0.01g/mLCuSO4。先加A液后加B液，且B不能過量，不需要加熱。（3）過量的雙縮脲試劑B會與試劑A反應(yīng)，使溶液呈藍色，而掩蓋生成的紫色。（4）先加入A液2ml，搖勻；再加入B液3-4滴，搖勻。四、淀粉的檢測：（2）選材：馬鈴薯勻漿（1）原理：淀粉+碘藍色（3）檢測過程：2ml組織樣液2滴碘液觀察顏色變化藍色藍（藍色）點（淀粉）點（碘）制備組織樣液馬鈴薯塊莖研磨取5g，放入研缽中洗凈、去皮、切塊過濾濾液顯色反應(yīng)向試管中注入2ml組織樣液加入5滴碘-碘化鉀觀察現(xiàn)象觀察溶液顏色變化：無色→藍色結(jié)論：溶液變藍，說明馬鈴薯組織中有淀粉存在。鑒定物質(zhì)生物材料所用試劑顏色變化還原糖脂肪蛋白質(zhì)淀粉蘋果、梨、白蘿卜斐林試劑磚紅色沉淀花生種子蘇丹Ⅲ染液蘇丹Ⅳ染液橘黃色紅色豆?jié){、牛奶、雞蛋清雙縮脲試劑紫色面粉、馬鈴薯勻漿液碘液藍色注：鑒定還原糖需加熱；脂肪的鑒定不一定要用顯微鏡，要觀察脂肪顆粒，則必須用顯微鏡。五、觀察DNA、RNA在細(xì)胞中的分布實驗原理：（1）DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi)，RNA大部分存在于細(xì)胞質(zhì)中。（2）甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同，甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色。（3）利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細(xì)胞染色，可以顯示DNA和RNA在細(xì)胞中的分布。（4） 鹽酸能夠改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進入細(xì)胞，同時使染色體中的DNA和蛋白質(zhì)分離，有利于DNA和染色劑結(jié)合。 甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色，通過觀察兩種顏色出現(xiàn)的部位來判斷DNA和RNA在細(xì)胞中的分布。方法步驟：（1）取材和制片在潔凈的載玻片上滴1滴0.9%NaCl溶液用消毒牙簽刮口腔內(nèi)側(cè)壁后涂抹在液滴上將涂有口腔上皮細(xì)胞的載玻片在酒精燈上烘干（2）水解：將烘干的載玻片放入盛有30mL8%鹽酸的小燒杯中，30℃水浴保溫5min（3）沖洗涂片：用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片10秒（4）染色吸水紙吸去載玻片上的水分在載玻片上滴加兩滴2滴用吡羅紅，甲基綠染色劑，染色5分鐘吸去多余的染色劑，蓋上蓋玻片（5）觀察：先低倍鏡：選染色均勻，色澤淺的區(qū)域，移到視野中央。后高倍鏡：觀察細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的染色情況。0.9%生理鹽水？人口腔上皮細(xì)胞8%鹽酸？蒸餾水30℃水浴吡羅紅甲基綠染色劑取材水解沖洗染色觀察四﹑實驗結(jié)果示例思考與討論：（1）9%Nacl溶液的作用？保持空腔上皮細(xì)胞的正常形態(tài)。（2