微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)課件 【知識精講精研】 高二下學(xué)期生物人教版（2019）選擇性必修3

噬菌體藍(lán)細(xì)菌乳酸菌醋酸菌衣藻酵母菌毛霉草履蟲變形蟲新冠病毒酵母菌大腸桿菌微生物情境導(dǎo)入無細(xì)胞結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞真核細(xì)胞真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履蟲、變形蟲等1.微生物的類群病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌體等DNA病毒細(xì)菌：藍(lán)細(xì)菌、大腸桿菌、乳酸菌等；放線菌：鏈霉菌等難以用肉眼觀察的微小生物的統(tǒng)稱問題情境

向經(jīng)過殺菌處理的牛奶中添加某些對人體有益的細(xì)菌，再經(jīng)過發(fā)酵就可以制成酸奶。

自

制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適的事例屢見不鮮，主要原因是在制作過程中有雜菌混入。那么，怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？微生物的無菌培養(yǎng)技術(shù)第2節(jié)

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用01微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的基本思路：（1）為微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件（2）確保雜菌無法混入菌落1.定義：單個或少數(shù)同種菌體在固體培養(yǎng)基上大量繁殖，形成肉眼可見的子細(xì)胞群體。2.特征：形狀、大小、顏色、光澤度、透明度等。3.功能：菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落沙門氏菌毛霉青霉菌酵母菌強(qiáng)調(diào)：不同種類微生物的菌落特征各有特點(diǎn),但彼此之間存在一定的相似性;同種微生物的菌落特征受培養(yǎng)時間、營養(yǎng)物質(zhì)的含量與種類等影響也會有所差異。

培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。

作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。

種類(1)按物理性質(zhì)：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基。(3)按化學(xué)組成：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基。(2)按功能用途：選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。無有凝固劑瓊脂液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基注意：固體培養(yǎng)基中的瓊脂僅作為凝固劑，不能為微生物生長提供能量和碳源。劃分培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途（1）物理性質(zhì)不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂，明膠，硅膠等，擴(kuò)大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)獲取單菌落、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基觀察微生物運(yùn)動半固體培養(yǎng)基少量凝固劑選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求配置。：加入能與目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑。（2）功能例1，加入青霉素的培養(yǎng)基：分離酵母菌、霉菌等真菌；例2，不加氮源的無氮培養(yǎng)基：分離固氮菌；例3，不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基：分離自養(yǎng)型微生物A.選擇培養(yǎng)基：將某種類微生物從混雜的微生物群體中分離出來。培養(yǎng)基中加氨芐青霉素具有抗氨芐青霉素能力的菌落沒有氨芐青霉素抗性的細(xì)菌選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基+氨芐青霉素培養(yǎng)基沒有抗氨芐青霉素能力的菌落被淘汰怎樣選擇出抗氨芐青霉素能力的細(xì)菌?例1，加入伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基：鑒別大腸桿菌例2，加入剛果紅的培養(yǎng)基：鑒別纖維素分解菌B.鑒別培養(yǎng)基：加入能與目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，用于鑒別不同類型的微生物。剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。鑒別培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基：含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)：用已知的化學(xué)物質(zhì)配制（3）成分來源工業(yè)生產(chǎn)分類鑒定

培養(yǎng)基的配制一

無菌技術(shù)二目錄

微生物的純培養(yǎng)三一

培養(yǎng)基的配制一1．培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成(1)主要營養(yǎng)物質(zhì)：一般都含有

等營養(yǎng)物質(zhì)。水、碳源、氮源、無機(jī)鹽組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL水注：牛肉膏和蛋白胨來源于動物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)。1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成碳源無機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機(jī)碳源：糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物功能：①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②有機(jī)碳既是碳源又是能源。氮源無機(jī)氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等功能：氮是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)必須的元素。含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。無機(jī)鹽功能：提供無機(jī)營養(yǎng)、調(diào)劑PH、維滲透壓水功能：良好的溶劑維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定Ca、K、Mg等大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁〤、N等元素的營養(yǎng)物質(zhì)。為什么培養(yǎng)基需要氮源？旁欄思考思考1：培養(yǎng)微生物時，培養(yǎng)基中是否必須添加碳源和氮源？并說明理由。

不一定。例如，培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物時，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空氣中的二氧化碳；培養(yǎng)固氮微生物時，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空氣中的氮?dú)?。根?jù)碳/氮源的種類判斷微生物同化作用是自養(yǎng)還是異養(yǎng)a.異養(yǎng)型微生物的碳源為：b.自養(yǎng)型微生物的碳源為：含碳有機(jī)物含碳無機(jī)物氮源是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的。幾種微生物的營養(yǎng)和能量來源微生物碳源氮源能源藍(lán)細(xì)菌CO2光能硝化細(xì)菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類等有機(jī)物N2有機(jī)物大腸桿菌糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物蛋白質(zhì)等有機(jī)物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物思考1：下表是某微生物培養(yǎng)基的成分，請分析該培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)哪種微生物？若除去①，此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)根瘤菌嗎？編號①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL根瘤菌雖可以固氮，但其同化作用類型為異養(yǎng)型，培養(yǎng)基中必須提供有機(jī)碳源，所以該培養(yǎng)基不能用來培養(yǎng)根瘤菌。此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物。微生物碳源氮源能源藍(lán)細(xì)菌硝化細(xì)菌根瘤菌大腸桿菌CO2NH4＋、NO3-等光能CO2NH3NH3的氧化糖類等有機(jī)物N2有機(jī)物糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物蛋白質(zhì)等有機(jī)物1.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基的主要差別在于

；自養(yǎng)型微生物所需的碳源來自

碳源，異養(yǎng)型微生物所需的碳源來自

碳源2.無機(jī)氮源不但能給自養(yǎng)型微生物提供

，也能作為

，3.含有C、H、O、N的有機(jī)物可作為

微生物的碳源、氮源、能源；碳源氮源能源物質(zhì)異養(yǎng)型無機(jī)有機(jī)特別提醒一

培養(yǎng)基的配制一1．培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成(1)主要營養(yǎng)物質(zhì)：一般都含有

等營養(yǎng)物質(zhì)。水、碳源、氮源、無機(jī)鹽(2)其他需求：還需要滿足微生物生長對

的需求。pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、O2

例如：④培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供

的條件。①培養(yǎng)乳酸桿菌時，一般需要在培養(yǎng)基中添加

；②培養(yǎng)霉菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至

；③培養(yǎng)細(xì)菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至

；維生素酸性中性或弱堿性無氧主要指生長因子（微生物生長所必須的、微量的、自身不能合成或合成很少的有機(jī)物）種類：維生素、氨基酸、堿基、嘌呤、嘧啶、胺類等來源：酵母膏、蛋白胨、動植物組織提取液等(1)牛肉膏和蛋白胨來源于動物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)(

)(2)所有微生物在培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中都需加入氮源(

)√×培養(yǎng)自生固氮菌的培養(yǎng)基中可以不添加氮源。(3)培養(yǎng)不同微生物的培養(yǎng)基成分完全一樣(

)×培養(yǎng)不同微生物的培養(yǎng)基成分不完全一樣，如培養(yǎng)自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不需要碳源，培養(yǎng)自生固氮菌的培養(yǎng)基中可以不添加氮源。具體處理原理目的選擇培養(yǎng)基加入青霉素青霉素能抑制細(xì)菌生長，對真菌無作用不加氮源固氮微生物能利用空氣中的氮?dú)獠患佑袡C(jī)碳源自養(yǎng)型微生物能利用無機(jī)碳源分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)微生物發(fā)散思維

培養(yǎng)基的配制一

無菌技術(shù)二目錄

微生物的純培養(yǎng)三

獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染！兩個方面：消毒對操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒滅菌將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。無菌技術(shù)應(yīng)圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括：

無菌技術(shù)二消毒滅菌二、無菌技術(shù)無菌技術(shù)的類型:（1）消毒①概念：使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。②適用對象：對操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。（2）滅菌①概念：使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。②適用對象：用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。芽孢指某些細(xì)菌（如芽孢桿菌等）在一定條件下細(xì)胞質(zhì)高度濃縮脫水所形成的一種抗逆性很強(qiáng)的球形或橢圓形的休眠體。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。如某些細(xì)菌的芽孢煮沸3小時才死亡。每個細(xì)菌僅形成一個芽孢。孢子指細(xì)菌、真菌、原生動物和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖作用的生殖細(xì)胞。正常情況下不需要兩兩結(jié)合就可以由單個細(xì)胞直接發(fā)育成新個體。知識拓展1.消毒使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。常用的消毒方法：（1）煮沸消毒法：100℃煮沸5～6min，可以殺死微生物的營養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢,用于日常生活的一般物品。（2）巴氏消毒法：62～65℃下消毒30min或80～90℃處理30s～1min，適合一些不耐高溫的液體，如牛奶?？梢詺⑺琅Ｄ讨械慕^大多數(shù)微生物，并且不破壞牛奶的營養(yǎng)成分。（3）化學(xué)藥劑消毒法：用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。（4）紫外線消毒法：接種室、接種箱或超凈工作臺在使用前可用紫外線照射30min。在照射前，適量噴灑石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果。煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥物消毒法紫外線消毒法消毒方法2.滅菌概念：指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。原理：高溫蒸汽破壞蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)構(gòu)使其變性。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，效果可靠，可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體?；颈３峙囵B(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。對象：培養(yǎng)基等①濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa、121℃下維持15～30min。

常用的滅菌方法：高壓蒸汽滅菌鍋1.滅菌物品不要裝得太擠，以妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果注意事項2.錐形瓶和試管口不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包裹的瓶口的紙滲入棉塞3.加熱初期打開排氣閥，待冷空氣排盡之后再關(guān)閉4.斷開電源，讓鍋內(nèi)溫度自然下降，待壓力表指針指到零后打開排氣閥濕熱滅菌原理：使微生物細(xì)胞膜破壞、蛋白質(zhì)變性和

原生質(zhì)干燥等。對象：耐高溫，需保持干燥的物品，適用于

玻璃器皿

(如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器)

金屬器具(如針頭、鑷子、剪刀等)的滅菌。②干熱滅菌：干熱滅菌箱內(nèi)160～170℃下加熱2～3h。干熱滅菌箱干熱滅菌：干熱滅菌箱內(nèi)160-170℃下加熱2-3h。注意：等溫度降到70℃以下再打開箱門，否則驟冷容易使箱內(nèi)玻璃儀器破損。③灼燒滅菌：酒精燈火焰灼燒效果：最徹底原理：使微生物燃燒對象：接種工具如接種環(huán)、接種針，以及接種過程中的試管口或瓶口等易被污染部位。充分燃燒層（外焰）灼燒滅菌：直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒。接種針接種環(huán)涂布器方法工具對象操作濕熱滅菌法（高壓蒸汽滅菌法）高壓蒸汽滅菌鍋培養(yǎng)基等高壓蒸汽滅菌鍋100kpa，121℃，15-30min干熱滅菌法干熱滅菌箱耐高溫、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿等）和金屬用具等160-170℃的熱空氣中維持1-2h灼燒滅菌法酒精燈接種工具（如接種環(huán)、接種針、涂布器或其他金屬用具）、接種過程中容易被污染的部位（如試管口、瓶口等）直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒常用的滅菌方法防止雜菌污染的措施（1）實(shí)驗(yàn)前：①對操作空間、操作人員消毒；②對所用器皿、接種用具和培養(yǎng)基滅菌。①避免已滅菌處理材料用具與周圍物品接觸造成污染；②為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作都應(yīng)在超凈工作臺并在酒精燈火焰旁進(jìn)行。（2）操作時：（3）實(shí)驗(yàn)后：使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。P10旁欄思考：無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？還能有效避免操作者自身被微生物感染。

濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）干熱滅菌灼燒滅菌化學(xué)藥物消毒（酒精）紫外線消毒巴氏消毒法【鞏固練習(xí)】以下所采用的滅菌或消毒方法依次是化學(xué)藥物消毒（次氯酸鈉）培養(yǎng)基培養(yǎng)皿接種環(huán)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)室牛奶

有活性生物材料實(shí)戰(zhàn)訓(xùn)練

(1)獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染(

)(2)滅菌相比消毒對微生物的殺滅更徹底(

)(3)無菌操作的對象只要是沒有生物活性的材料(如培養(yǎng)基、接種環(huán)等)都可采用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌(

)判斷下列正誤√√×比較項理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌

較為溫和強(qiáng)烈部分微生物全部微生物一般不能一

無菌技術(shù)二能比較消毒和滅菌對微生物作用效果的差異一

無菌技術(shù)二項目主要方法應(yīng)用范圍消毒

巴氏消毒法

℃消毒30min或

℃處理15s或

℃處理10～15s

、啤酒、果酒和醬油等不耐高溫的液體煮沸消毒法100℃煮沸

min家庭餐具等生活用品紫外線消毒30W紫外燈照射

min(損傷細(xì)菌的DNA)化學(xué)藥物消毒

擦拭實(shí)驗(yàn)者雙手水源牛奶63～6572～76

5～630體積分?jǐn)?shù)為70%～75%的酒精氯氣接種室、接種箱或超凈工作臺80～85

一

無菌技術(shù)二項目主要方法應(yīng)用范圍滅菌灼燒滅菌直接在酒精燈火焰的

層灼燒干熱滅菌干熱滅菌箱中，

℃的熱空氣中維持

。高壓蒸汽滅菌(濕熱滅菌)充分燃燒接種工具，如涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具、試管口或瓶口等160～170

1～2h100kPa、121℃的條件下，維持15～30min培養(yǎng)基等耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金屬用具等思考1.牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？在達(dá)到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。2.為什么體積分?jǐn)?shù)為70%～75%的酒精殺菌效果最好？若酒精濃度過高，菌體表面蛋白質(zhì)變性過快而凝固成一層保護(hù)膜，酒精不能滲入其中；若酒精濃度過低，殺菌能力減弱。跟蹤訓(xùn)練1.下列有關(guān)無菌技術(shù)的說法，正確的是A.無菌技術(shù)的關(guān)鍵是殺滅實(shí)驗(yàn)室中所有的微生物B.培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行濕熱滅菌C.經(jīng)巴氏消毒法處理的食品因微生物未被徹底消滅，不能在常溫下長期保存D.無菌技術(shù)中，若處理對象為液體，則只能消毒，不能滅菌√無菌技術(shù)的關(guān)鍵是防止雜菌污染，A錯誤；無菌技術(shù)中，若處理對象為液體，可以用濕熱滅菌法滅菌，D錯誤。跟蹤訓(xùn)練√教材P10〔相關(guān)信息〕生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能夠寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)，使細(xì)菌裂解，因此可以用它們來凈化污水、污泥。2.(2023·山西陽泉高二期中)無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開。下列說法正確的是A.在100℃條件下煮沸5～6min屬于滅菌方法B.對接種室、涂布器、操作者的衣著和雙手只需要進(jìn)行消毒處理C.培養(yǎng)基可借助高壓蒸汽滅菌鍋或干熱滅菌箱進(jìn)行滅菌D.利用某些寄生于細(xì)菌體內(nèi)的微生物裂解細(xì)菌來凈化污水屬于生物消毒法

培養(yǎng)基的配制一

無菌技術(shù)二目錄

微生物的純培養(yǎng)三一

微生物的純培養(yǎng)三單個或少數(shù)同種菌體在固體培養(yǎng)基上大量繁殖，形成肉眼可見的子細(xì)胞群體，即菌落。

特征：形狀、大小、顏色、光澤度、透明度等。沙門氏菌毛霉青霉菌酵母菌強(qiáng)調(diào)：不同種類微生物的菌落特征各有特點(diǎn),但彼此之間存在一定的相似性;同種微生物的菌落特征受培養(yǎng)時間、營養(yǎng)物質(zhì)的含量與種類等影響也會有所差異。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)一

微生物的純培養(yǎng)三結(jié)合教材P11-12，理解以下概念純培養(yǎng)物：純培養(yǎng)：培養(yǎng)物：在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含有特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物。由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物。獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。配制培養(yǎng)基滅菌接種分離培養(yǎng)1概念2純培養(yǎng)的步驟：一

微生物的純培養(yǎng)三平板劃線法

稀釋涂布平板法(1)原理：采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。微生物群分散或稀釋單個細(xì)胞單個菌落繁殖(2)獲得單菌落的方法：探究

·

實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)酵母菌菌落：濕潤，粘稠，易挑起，表面光華，比細(xì)菌的菌落大而厚。（3）實(shí)驗(yàn)?zāi)康蘑賹W(xué)會配制培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基并倒平板②學(xué)會進(jìn)行無菌操作③嘗試通過平板劃線操作來獲得純化的酵母菌菌落（4）材料用具酵母菌培養(yǎng)液提供接種用的酵母菌配制酵母菌固體培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖（或蔗糖）蒸餾水瓊脂天平，小刀，紗布，燒杯，錐形瓶，棉塞、牛皮紙（或報紙）；皮筋，培養(yǎng)皿，接種環(huán)，酒精燈，超凈工作臺；高壓蒸汽滅菌鍋，干熱滅菌箱和恒溫培養(yǎng)箱等；超凈工作臺高壓蒸汽滅菌鍋干熱滅菌箱去皮切塊加水(1000mL)加熱煮沸軟爛馬鈴薯紗布過濾加瓊脂（15～20g）酵母菌培養(yǎng)基加水定容(1000mL)稱取馬鈴薯(200g)馬鈴薯塊濾液加葡萄糖/蔗糖（20g）

調(diào)pH①

②

(5)方法步驟：第1步

制備培養(yǎng)基

：配制培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基接種與分離培養(yǎng)培養(yǎng)基——高壓蒸汽滅菌轉(zhuǎn)移滅菌15~30min皮筋勒緊包牛皮紙放入高壓蒸汽滅菌鍋中（100kPa、121℃）酵母菌培養(yǎng)基錐形瓶加棉塞高壓蒸汽滅菌鍋1.避免因水蒸氣凝結(jié)而浸濕棉塞。2.

避免再次污染第2步

滅菌

培養(yǎng)皿——干熱滅菌滅菌2h幾層牛皮紙包緊放入干熱滅菌箱（160～170℃）5～8套培養(yǎng)皿干熱滅菌箱培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板。1拔出錐形瓶的棉塞。2將瓶口迅速通過火焰。3用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿（10～20mL），立即蓋上皿蓋。4等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置。1.防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)。2.防止皿蓋上冷凝水滴落，造成污染。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。不能完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。第3步

倒平板：

（1）培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至50℃左右時才能倒平板，溫度過高會燙手，溫度過低培養(yǎng)基又會凝固。（2）整個操作在酒精燈火焰旁附近進(jìn)行，避免周圍環(huán)境中微生物的污染。（3）平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。（4）倒平板時不要將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間，否則此培養(yǎng)基不能用來培養(yǎng)微生物，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。（5）將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。倒平板的注意事項倒平板注意事項：①溫度：50℃左右②操作：在酒精燈火焰附近③冷凝后平板倒置分離的方法平板劃線法

通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到單菌落。連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法(5)方法步驟：第2步

接種和分離酵母菌平板劃線法的具體操作1將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。2在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞。將試管口通過火焰。34在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。防止溫度太高殺死菌種。平板劃線法的具體操作5將試管口通過火焰，并塞上棉塞。在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。6

灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。7將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。1.為什么每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？思考

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討論第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物。第二次及以后劃線前：殺死上次劃線時殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線末端。2.劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。思考

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討論3.劃五次線，接種環(huán)需要灼燒幾次？12345第1次劃線接種環(huán)滅菌第2次劃線接種環(huán)滅菌第3次劃線接種前接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌第4次劃線接種環(huán)滅菌第5次劃線接種環(huán)滅菌需要灼燒6次。4.第二次及以后的劃線時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？5.為什么不能將最后一次的劃線與第一次的劃線相連？將聚集的菌種逐步稀釋，以便獲得單菌落。線條末端酵母菌的數(shù)目比起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使酵母菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到單菌落。思考

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討論菌種經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，分離得到單菌落。第一次劃線酵母菌數(shù)量多，最后一次劃線酵母菌數(shù)量少，首尾相連，不容易得到單個菌落。第3步

培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。在實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開實(shí)驗(yàn)室時一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。警示對照：說明培養(yǎng)基是否被雜菌污染。(5)方法步驟：

未接種的培養(yǎng)基是不能有菌生長的，如果有菌生長，則說明受到污染或者滅菌不徹底。

正確的做法是，配好培養(yǎng)基之后，將培養(yǎng)基放在溫箱里培養(yǎng)24小時觀察，長菌的培養(yǎng)基應(yīng)該丟棄，無菌生長的方能使用。這樣做的另一個好處是將培養(yǎng)基水蒸發(fā)干，不會對微生物的培養(yǎng)產(chǎn)生影響。1.

在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有，說明了什么？2.

如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你認(rèn)為可能是由哪些原因引起的？可能是接種的菌種不純、培養(yǎng)基滅菌不徹底，或接種過程中感染了雜菌。結(jié)果分析與評價（p13）

有一段時間，水果“酵素”風(fēng)靡各地。水果“酵素”制作的大致過程是：將洗凈、切成塊狀的水果放入潔凈的容器，再加入糖和水，密封，置于陰涼處發(fā)酵一至兩周。有人說，吃水果“酵素”可以美容、減肥、促進(jìn)消化和提高免疫力。請評估這一論點(diǎn)是否可信。追問以下問題可以幫助你分析?！敖退亍本褪恰懊浮钡牧硪环N說法。其制作是利用微生物進(jìn)行無氧呼吸的原理，進(jìn)行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。其中可能有糖類（包括一些簡單的糖和膳食纖維等）、蛋白質(zhì)（包括多種酶）、有機(jī)酸等成分。不存在它獨(dú)有的、特殊的營養(yǎng)物質(zhì)。其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，食用后可能會危害人體健康。思維訓(xùn)練評估論點(diǎn)的可信程度

水果“酵素”是什么？

其制作原理是什么？

其中可能含有哪些成分？

其是否含有人們無法從其他食品中獲取但又是維護(hù)健康所必需的成分？

其中的所有成分都有益于人體健康嗎？1.微生物的純培養(yǎng)既需要適宜的培養(yǎng)基，又要防止雜菌污染。判斷下列相關(guān)表述是否正確。（1）培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對微生物的生長越有利。（）（2）消毒和滅菌的殺菌程度存在差異。（）（3）微生物的純培養(yǎng)物就是不含有代謝廢物的微生物培養(yǎng)物。（）×√×練習(xí)與應(yīng)用（p14）一、概念檢測練習(xí)與應(yīng)用（p14）2.日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長的？干制—降低食品的水分含量；腌制—通過食鹽、糖等制造高滲環(huán)境，從而抑制微生物的生長和繁殖；低溫儲存—通過降低微生物的代謝速率來抑制微生物的生長和繁殖。一、概念檢測二、拓展應(yīng)用1.某同學(xué)將5個手指尖在貼有“洗手前”標(biāo)簽的培養(yǎng)基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個指尖在貼有“洗手后”標(biāo)簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按一下。將這兩個培養(yǎng)皿放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，發(fā)現(xiàn)貼有“洗手后”標(biāo)簽的培養(yǎng)皿中菌落較少。請分析回答下列問題。（1）這個實(shí)驗(yàn)中需要進(jìn)行滅菌處理的材料用具有

。培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基（2）“將指尖在培養(yǎng)基上輕輕按一下”相當(dāng)于微生物培養(yǎng)中的哪一步操作？接種練習(xí)與應(yīng)用（p14）（3）從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，洗手后我們就能進(jìn)行無菌操作了嗎？操作時，我們可以采用什么方法來避免手上微生物的污染？

通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看到，洗手后手上還有一些微生物，不能直接進(jìn)行無菌操作。

可以通過用酒精棉球擦拭雙手，或戴消過毒的手套等方法來避免手上微生物的污染。二、拓展應(yīng)用1.某同學(xué)將5個手指尖在貼有“洗手前”標(biāo)簽的培養(yǎng)基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個指尖在貼有“洗手后”標(biāo)簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按一下。將這兩個培養(yǎng)皿放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，發(fā)現(xiàn)貼有“洗手后”標(biāo)簽的培養(yǎng)皿中菌落較少。請分析回答下列問題。練習(xí)與應(yīng)用（p14）2.某生物興趣小組將從葡萄皮上成功分離來的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速分別為210r/min，230r/min和250r/min。培養(yǎng)時間與酵母菌種群密度的關(guān)系如下圖所示。請分析回答下列問題。（1）搖床轉(zhuǎn)速不同，意味著培養(yǎng)條件有什么不同？二、拓展應(yīng)用意味著培養(yǎng)液中O2含量不同。（2）從圖中數(shù)據(jù)你可以得出什么結(jié)論？其原因是什么?培養(yǎng)液中O2含量越高，酵母菌種群密度越大。（3）為什么培養(yǎng)8h后，其中2個錐形瓶中酵母菌的種群密度基本達(dá)到穩(wěn)定?這時候已經(jīng)達(dá)到了環(huán)境容納量。課堂小結(jié)本堂課你學(xué)到了哪些知識？畫出概念圖進(jìn)行總結(jié)微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)無菌技術(shù)煮沸消毒法純培養(yǎng)培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基接種分離平板劃線法稀釋涂布平板法種類液體培養(yǎng)基營養(yǎng)水、碳源、氮源、無機(jī)鹽消毒巴氏消毒法滅菌濕熱滅菌干熱滅菌灼燒滅菌五分鐘查落實(shí)【要語必背】1.培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基