GB∕ T 40145-2021 化妝品中地索奈德等十一種糖皮質(zhì)激素的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（正式版）

ICS71.100.70化妝品中地索奈德等十一種糖皮質(zhì)激素的測(cè)定液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T40145—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由全國(guó)質(zhì)量監(jiān)管重點(diǎn)產(chǎn)品檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC374)提出并歸口。ⅡGB/T40145—2021禁用物質(zhì)是指不能作為化妝品生產(chǎn)原料即組分添加到化妝品中的物質(zhì)?！痘瘖y品安全技術(shù)規(guī)范》規(guī)預(yù)見的使用條件下不得對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。目前我國(guó)尚未規(guī)定這些物質(zhì)的限量值，本文件僅對(duì)化妝品中測(cè)定這些物質(zhì)提供檢測(cè)方法。1GB/T40145—2021化妝品中地索奈德等十一種糖皮質(zhì)激素的測(cè)定液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法1范圍2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T24800.2—2009化妝品中四十一種糖皮質(zhì)激素的測(cè)定液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法和薄層層析法3術(shù)語和定義GB/T24800.2—2009界定的術(shù)語和定義適用于本文件。5試劑和材料5.650%乙腈水溶液：準(zhǔn)確量取500mL乙腈(55.80.1%甲酸水溶液：準(zhǔn)確移取1mL甲酸(5.4)至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。2GB/T40145—20215.9對(duì)照物質(zhì)：純度均大于或等于95%。地索奈德等十一種糖皮質(zhì)激素的相關(guān)信息參見附錄A的表A.1。5.10標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，1.0mg/mL:準(zhǔn)確稱取適量各對(duì)照物質(zhì)(5.9),分別用甲醇(5.2)溶解并定容至5.12混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.11),分別用乙腈(5.3)配制成質(zhì)量濃度為6儀器設(shè)備6.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS/MS):配電噴霧離子源(ESI)。6.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。7.1試樣制備后，加入3mL70%乙腈水溶液(5.7),渦旋振蕩2min,以10000r/min離心5min,吸出下層溶液至量樣液至塑料離心管中，以10000r/min離心5min,取1mL上清液經(jīng)氮?dú)獯抵两?.2測(cè)定條件c)柱溫：30℃;3GB/T40145—2021時(shí)間流速mL/min%流動(dòng)相B%01655f)離子源溫度：550℃;序號(hào)化合物名稱母離子m/z定性離子m/z定量離子m/z碰撞電壓V去簇電壓V116α-羥基潑尼松龍377.1359.1359.1323.1216α-羥基潑尼松龍醋酸酯419.2401.2401.2323.33二氟拉松411.2277.24地索奈德417.1399.2399.2323.15氟輕松453.2337.1337.1433.16去羥米松377.2357.2357.2339.24GB/T40145—2021表2十一種糖皮質(zhì)激素的質(zhì)譜參數(shù)(續(xù))序號(hào)化合物名稱母離子m/z定性離子m/z定量離子m/z碰撞電壓V去簇電壓V7帕拉米松醋酸酯435.18地索奈德-21-醋酸酯459.2441.2441.29甲基潑尼松龍醋酸丙酸酯473.3455.2455.2鹵倍他索丙酸酯485.2倍他米松丁酸丙酸酯411.2411.27.3定性測(cè)定7.3.1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備分別準(zhǔn)確移取50μL混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.12)于10mL容量瓶中，用50%乙腈水溶液(5.6)定容，7.3.2定性測(cè)試步驟取試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在相同試驗(yàn)條件下測(cè)定，試樣溶液中待測(cè)組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)組分的保留時(shí)間一致(偏差在±2.5%之內(nèi)),且定性離子的相對(duì)豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)組分的定性離子的相對(duì)豐度進(jìn)行比較，偏差不超過表3規(guī)定的范圍，即可判定試樣中存在該組分。十一種糖皮質(zhì)激素對(duì)照物質(zhì)的總離子流色譜圖及LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖參見附錄B的圖B.1和圖B.2。表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的允許偏差相對(duì)離子豐度k%允許的最大偏差%k>5050≥k>20士2520≥k>10士30k≤10士507.4定量測(cè)定7.4.1基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備稱取與待測(cè)試樣基質(zhì)類型相近的空白樣品5份，分別加入50μL混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.12),按7.15GB/T40145—2021進(jìn)行處理，得到質(zhì)量濃度為2.0pg/L、4.0μg/L、10.0pg/L、20.0pg/L、50.0pg/L的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。7.4.2定量測(cè)試步驟取試樣溶液與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在相同試驗(yàn)條件下測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制基質(zhì)校準(zhǔn)曲線，根據(jù)峰面積對(duì)應(yīng)校準(zhǔn)曲線上的溶液濃度定量。試樣溶液中待測(cè)組分的響應(yīng)值應(yīng)在校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后測(cè)定。注：因稀釋可能導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)的變化，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液可根據(jù)試樣溶液的稀釋比例重新制備并測(cè)定。如未能找到與待測(cè)試樣基質(zhì)類型相近的空白樣品，則可采用標(biāo)準(zhǔn)加入法定量：取待測(cè)試樣6份，向其中5份試樣分別加入50pL混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.12),按7.1進(jìn)行處理，得到添加濃度為0μg/L、試樣加標(biāo)溶液。將試樣加標(biāo)溶液在7.2試驗(yàn)條件下測(cè)定，以添加濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線，由校準(zhǔn)曲線與橫坐標(biāo)的截距，可得出試樣溶液中待測(cè)組分的濃度。7.5空白試驗(yàn)除不加入試樣外，均按7.1～7.4進(jìn)行測(cè)定。7.6檢出限和定量限8結(jié)果計(jì)算試樣中糖皮質(zhì)激素的含量按式(1)計(jì)算獲得： (1)式中：X,——試樣中待測(cè)組分的含量，單位為微克每克(μg/g);pi———由校準(zhǔn)曲線得出的試樣溶液中待測(cè)組分的質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L);V——樣液定容體積，單位為毫升(mL);f——稀釋倍數(shù)；m——稱取試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果精確至小數(shù)點(diǎn)后一位。9回收率與精密度待測(cè)組分在添加濃度為0.1pg/g～2.5μg/g的范圍內(nèi)，回收率為80.8%～119.2%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于9.9%。6GB/T40145—2021(資料性)十一種糖皮質(zhì)激素對(duì)照物質(zhì)的信息序號(hào)中文名稱CAS號(hào)分子式結(jié)構(gòu)式相對(duì)分子質(zhì)量116α-羥基潑尼松龍prednisolone13951-70-7C?1H??O?376.44216α-羥基潑尼松龍醋酸酯16α-Hydroxy-prednisonloneacetate86401-80-1CH?O0HO418.483二氟拉松Diflorasone2557-49-5C?2H?8F?O?0HO0OII410.454Desonide638-94-8C?H??O?HOH(00416.515氟輕松Fluocinoloneacetonide67-73-2C?H?F?O?HO0FHO-H0452.497GB/T40145—2021序號(hào)中文名稱CAS號(hào)分子式結(jié)構(gòu)式6去羥米松Desoximetasone382-67-2C22H?gFO?376.467醋酸酯ParamethasoneacetateO0HOOJJ0434.508地索奈德-21-醋酸酯Desonide21-Acetate25092-25-5C?H?O?0HOH00458.549龍醋酸丙酸酯Methyl-prednisoloneaceponate86401-95-800(0472.57鹵倍他索丙酸酯Halobetasolpropionate66852-54-8C?5H??ClF?O?HO0484.96Betamethasonebutyratepropionate5534-02-1(HO,H0518.618(資料性)十一種糖皮質(zhì)激素對(duì)照物質(zhì)的總離子流色譜圖及多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖十一種糖皮質(zhì)激素對(duì)照物質(zhì)的總離子流色譜圖見圖B.1,LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖7——帕拉米松醋酸酯；9——甲基潑尼松龍醋酸丙酸酯；10——鹵倍他索丙酸酯；11——倍他米松丁酸丙酸酯。圖B.1十一種糖皮質(zhì)激素對(duì)照物質(zhì)的總離子流色譜圖9GB+MRM(377.1>359.1)2+MRM(419.2>401.2)3+MRM(411.2>121.1)4+MRM(417.1>399,2)5+MRM(453.2>337.1)6+MRM(377.2>357.2)+MRM(435.1>319.1)8+MRM(459.2>441.2)9